不对称二甲基精氨酸、膜联蛋白Ⅴ、生存蛋白在子痫前期患者血清及胎盘组织中的水平及意义

张亚伟, 邢 宇, 刘丽恒, 王 欣

(首都医科大学附属北京妇产医院/北京妇幼保健院 产科, 北京, 100026)

子痫前期是妊娠期特有的一种产科疾病，指平素血压正常的妇女妊娠20周以后出现血压突然升高、尿蛋白、水肿，伴有头痛、恶心、眼花、腹部不适等临床表现，该病可损害患者肾脏、肝脏、中枢神经系统及血液系统等多器官，严重者可出现抽搐、昏迷甚至死亡，对母婴健康有很大危害。临床上将子痫前期根据发生时间分为早发型和晚发型子痫前期，根据临床症状表现程度分为轻度和重度子痫前期，早发型患者多为重度子痫前期患者[1]。不对称二甲基精氨酸(ADMA)是一种内源性一氧化氮合酶的竞争性抑制剂，能够抑制一氧化氮的合成，使一氧化氮/一氧化氮合酶通路发生障碍，一氧化氮合成减少，导致血管内皮功能障碍[2]。磷脂结合蛋白膜联蛋白V(AnnexinⅤ)通过细胞外翻的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合形成二聚体，参与抗凝、抗炎、抗免疫和促使细胞凋亡等[3]。生存蛋白(Survivin)是一种凋亡抑制蛋白家族的新成员，常表达于肿瘤和胚胎组织中，与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移关系密切[4]。本研究观察ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子痫前期患者血清及胎盘组织中的水平，进而定量分析其对子痫前期的影响和作用，为该病的临床诊治提供新参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月—2019年2月产科住院的子痫前期患者60例为子痫前期组，平均年龄(31.3±1.3)岁，平均孕周(36.3±2.4)周，早发型24例、晚发型36例，轻度34例、重度26例。另外选取同期于产科住院的健康产妇60例为健康产妇组，平均年龄(30.9±1.3)岁，平均孕周(36.7±2.6)周。2组平均年龄、平均孕周等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。所有产妇及家属均对本研究知情，并签署知情通知书，本研究获得医院伦理委员会批准。

纳入标准: 子痫前期患者符合《妊娠期高血压疾病诊治指南(2020)》[5]中对子痫前期的诊断标准及分类标准，其中子痫前期发生时间早于34孕周为早发型，发生时间≥34孕周为晚发型；患者收缩压、舒张压≥140、90 mmHg, 尿蛋白≥0.3 g/24 h或随机尿蛋白(+)诊断为轻度子痫前期; 患者收缩压、舒张压≥160、110 mmHg, 尿蛋白≥2.0 g/24 h或随机尿蛋白≥()或有其他脏器损害指标异常诊断为重度子痫前期; 所有孕妇均为单胎妊娠，分娩方式为剖宫产。

排除标准: 有其他妊娠合并症及并发症者; 慢性高血压产妇; 心脏病产妇; 嗜好烟酒产妇; 糖尿病产妇; 肝、肾功能不全产妇; 存在精神、语言障碍的产妇。

1.2 方法

1.2.1 样本采集: 抽取所有产妇清晨空腹静脉血5 mL, 以离心半径为10 cm、3 000转/min离心处理15 min, 分离上层血清, -80 ℃保存待用; 胎盘组织于剖宫产术胎盘分娩出后5 min之内采集，在胎盘母体面近脐带处避开钙化、梗死及血管密集区域，取1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm大小的胎盘组织，经生理盐水冲洗灭菌后用纱布吸干，之后在低温环境下置于有柄研磨器中均匀研磨，转移至2.5 mL离心管中。在4 ℃低速冷冻离心机以3 000转/min离心处理20 min, 收集上清液, -70 ℃保存待用。

1.2.2 血清及胎盘组织ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平检测: 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清及胎盘组织ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平。将含有ADMA、AnnexinⅤ、Survivin的血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗涤1次; 与辣根过氧化物酶标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，然后将多余抗体洗除，加入底物四甲基联苯胺显色; 四甲基联苯胺在辣根过氧化物酶催化下转化成蓝色，并在酸的作用下最终转化成黄色。颜色的深浅与血清及胎盘组织中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin水平呈正相关。450 nm波长下用酶标仪测定光密度值，通过标准曲线计算血清及胎盘组织中ADMA、AnnexinⅤ、Survivin浓度。

1.3 统计学处理

采用SPSS 20.0统计软件进行分析处理。计量资料采用均数±标准差描述, 2组比较采用独立样本t检验，相关性分析采用Pearson相关性分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 2组产妇血清及胎盘组织中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平比较

子痫前期组产妇血清及胎盘组织中的ADMA表达水平高于健康产妇组，AnnexinⅤ、Survivin表达水平低于健康产妇组，差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 2组产妇血清及胎盘组织中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平比较

2.2 早发型与晚发型子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平比较

早发型子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA表达水平高于晚发型子痫前期患者, AnnexinⅤ、Survivin表达水平低于晚发型子痫前期患者，差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。

表2 早发型与晚发型子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平比较

2.3 轻度与重度子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平比较

轻度子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA表达水平低于重度子痫前期患者，AnnexinⅤ、Survivin表达水平高于重度子痫前期患者，差异有统计学意义(P<0.05), 见表3。

表3 轻度与重度子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表达水平比较

2.4 ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之间相关性分析

ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之间进行Pearson相关性分析, ADMA与AnnexinⅤ、Survivin呈负相关(r=-0.481、-0.683,P=0.001、0.001), AnnexinⅤ与Survivin呈正相关(r=0.495,P=0.001), 见图1。

3 讨 论

子痫前期是妊娠期的一种严重并发症，是导致妊娠期妇女与围产儿发病和死亡的重要原因之一，且近年来发病率有明显上升趋势[6]。子痫前期可在不同程度上影响母婴健康及妊娠结局。产科及围产医学领域一直将子痫前期的病因和发病机制作为热点研究[7-8], 结果表明，该疾病可能起源于胎盘血管结构异常、血管内皮细胞受损及炎症免疫过度激活，但目前尚未完全定论。

ADMA是甲基化蛋白质精氨酸在蛋白质精氨酸甲基转移酶作用下产生的一种蛋白代谢产物，是一种内源性一氧化氮合酶抑制剂，对一氧化氮合酶的活性具有抑制作用，主要通过影响一氧化氮的合成起到调节血压的作用。ADMA的含量高低主要受降解酶二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)的调控[9]。已有研究[10]证实, ADMA氧化应激反应这一病理生理改变可引起DDHA的表达减少和(或)活性减弱，导致ADMA浓度增加，从而促进内皮功能失调，增加血管阻力，最终导致高血压的出现，并参与子痫前期的发生。研究[11-12]显示，子痫前期患者在早期妊娠时血清ADMA水平正常，子痫前期发生期其水平升高，分娩后再次下降。DDAH降低引起全身性血管内皮细胞功能障碍，部分胎盘血管内皮细胞氧化导致胎盘血管内皮损伤。血管形态发生改变，收缩增强，影响胎盘血流灌注量，严重威胁胎儿的正常发育。本研究对子痫前期患者血清及胎盘组织中ADMA水平进行评价，结果显示, ADMA在子痫前期患者血清及胎盘组织中高表达，且随着病情加重其表达水平增高，与相关研究[13-14]显示的ADMA参与子痫前期的发生结果相符。

AnnexinⅤ是膜联蛋白家族成员之一，广泛分布于人体内，在细胞及膜表面参与运转钙依赖调节蛋白质的活动。AnnexinⅤ在细胞外有钙离子的情况下与磷酯酰丝氨酸结合，进而起到抗凝、抗血栓形成、抗炎、抗免疫的作用。AnnexinⅤ在妊娠期间高表达于合体细胞滋养层，主要由胎盘滋养细胞分泌[15]。研究[16-17]表明，由于AnnexinⅤ抗凝的活性参与子痫前期的病理机制，子痫前期患者凝血和纤溶系统失衡导致胎盘绒毛间高凝状态，形成胎盘微血管血栓，继而导致胎盘组织缺血、缺氧，限制胎儿生长，参与子痫前期的发生。本研究对子痫前期患者血清及胎盘组织中AnnexinⅤ水平进行评价，结果显示, AnnexinⅤ在子痫前期患者血清及胎盘组织者中低表达，且随着病情加重其水平降低。

Survivin是一种凋亡抑制因子。研究[18]认为，Survivin可促进胎盘滋养细胞的存活和增殖，使滋养细胞适度侵袭，对胚胎着床和胎盘发育至关重要，并维持正常妊娠。研究[19]发现，Survivin的表达水平在未使用降压药的子痫前期患者中显著降低，这种改变诱导的细胞过度凋亡可使胎盘发育受限，引起妊娠并发症，因此Survivin参与子痫前期的发生，影响妊娠结局。本研究对子痫前期患者血清及胎盘组织中Survivin水平进行评价，结果显示, Survivin在子痫前期患者血清及胎盘组织者中呈低表达，且随着病情加重而降低，与曾玲娟等[20]研究认为的Survivin参与子痫前期的发生结果相符。

另外本研究还对ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之间的相关性进行分析，结果显示, ADMA与AnnexinⅤ、Survivin均呈负相关, AnnexinⅤ与Survivin呈正相关，此结果说明ADMA、AnnexinⅤ、Survivin存在一定相关性，且共同参与子痫前期的发生、发展。

综上所述, ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子痫前期患者血清及胎盘组织中呈特异性表达，且与病情轻重关系密切，为临床上子痫前期的诊治提供了新的理论参考。