鸡源8a 型腺病毒感染的诊断

吴通奎 包涛涛＊ 黄智明 莫兴虎

（1.黔东南州动物疫病预防控制中心 贵州凯里 556000；2.镇远县动物疫病预防控制中心 贵州镇远 557700）

禽腺病毒（Fowl adenovivus，FAdV）是禽的一种无囊膜双链DNA 病毒，通常分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3 种亚群， 其中Ⅰ亚群和Ⅱ亚群与火鸡的出血性肠炎及鸡的相关病毒病关系较为密切， 而Ⅲ亚群则主要与禽的产蛋下降相关。 Ⅰ亚群包含5 个基因型（A、B、C、D、E），5 个基因型涵盖 12 种血清型，如 A 型中血清1 型，B 型中血清 5 型，C 型中血清 4 型和 10 型，D型中血清 2、3、9 及 11 型，E 型中血清 6、7、8a 及 8b型[1]。

目前在我国主要流行C、D、E 3 种基因型，以其中的血清 4 型、8a 型、8b 型及 11 型更为常见， 主要感染肉鸡、肉鸭及蛋鸡[2]。 2015 年在我国山东、湖北及河南等多地发生以心包积液及肝炎为典型病变的禽类疾病，经诊断为禽腺病毒感染，对养禽业造成了严重的经济损失[3]。2021 年9 月，贵州黔东南某养鸡场90 日龄鸡出现发病及异常死亡，本文对该例临床疑似腺病毒感染的患鸡开展临床症状观察、 病理剖检、细菌分离培养及病原学检测，旨在为鸡腺病毒感染的诊断提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 发病情况 2021 年9 月，贵州黔东南某林下养鸡场90 日龄鸡发病。 经调查，该养殖场前期已按场内免疫程序对全场鸡群做过禽流感H7、禽流感H9、鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡传染性法氏囊病等疫苗免疫。 饲养接近90 日龄时，场内个别鸡群开始出现精神沉郁，颈部无力而导致头部自然下垂，站立不稳，排白色稀粪，发病率约70%，病死率约65%。应养殖场主需求，对该养殖场患鸡进行检测分析。

1.2 病料来源 病料采自贵州黔东南地区某养鸡场具有典型症状的90 日龄患鸡。

1.3 主要试剂 DNA/RNA 提取试剂盒， 购自北京天根生化科技有限公司；2×Taq PCR Master Mix 及DL2000 DNA Marker，购自莫纳生物；AIV 通用型及NDV 实时荧光定量RT-PCR 检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司； 其它试验试剂均为国产分析纯。

1.4 临床症状观察及病理剖检 观察患鸡的典型临床症状，同时对患鸡进行病理剖检，记录患鸡的临床症状及病理变化情况。

1.5 细菌分离培养 无菌采集患鸡心（含心包液）、肝、脾、肺及脑等组织，划线接种于鲜血及普通琼脂培养基，置于37 ℃恒温培养箱培养24~48 h，观察是否有细菌生长。

1.6 病原学检测 采集患鸡的脑、气管、心（含心包液）、肺、肝及脾等组织，使用DNA/RNA 提取试剂盒提取病变组织中的DNA/RNA，置于-20 ℃冰柜中保存，备用。

分别对提取的核酸样本开展鸡的疑似疾病病原检测。 首先参照试剂盒说明开展禽流感病毒（AIV）及新城疫病毒（NDV）实时荧光定量RT-PCR 检测；然后参考文献分别开展禽腺病毒4 型（FAdV-4）、禽腺病毒 8a 型（FAdV-8a）、禽腺病毒 8b 型（FAdV-8b） 及禽腺病毒 11 型 （FAdV-11）PCR 检测， 所得PCR 产物于1.5%琼脂糖凝胶进行电泳分析，将试验所检出的阳性条带送测序公司测序验证。

2 结 果

2.1 临床症状及病理剖检 患鸡临床主要表现为精神沉郁、站立不稳、头部无力自然下垂及排白色稀粪；病理剖检可见患鸡心包积液明显，肝脏变性、质脆，肺部少量出血。

2.2 细菌分离培养 细菌分离培养结果显示，37 ℃恒温培养箱培养24~48 h 的鲜血及普通琼脂培养基上均未见细菌生长。

2.3 病原核酸检测 分别开展鸡的疑似疾病病原的核酸检测， 结果显示，AIV、NDV、FAdV-4、FAdV-8b 及 FAdV-11 检测结果均为阴性， 仅能检出FAdV-8a 阳性（见图1），经测序公司测 序分析，所得阳性片段与预扩增片段大小一致， 且与NCBI 上载录的FAdV-8a 序列同源性高达98%以上。

图1 FAdV-8a 扩增结果

3 讨 论

我国是农业生产大国， 畜禽养殖业在农业生产环节具有十分重要的作用， 但不可忽视的是， 近年来，随着畜禽养殖业的快速发展，禽类的疾病也开始不断增加。 其中FAdV 感染便是一种近几年在我国养禽业中一直困扰着养殖户的禽类疾病， 该病呈典型世界性分布，但自2015 年以来，关于该病在禽类养殖环节中发生的报道屡见不鲜， 不同日龄的禽类均可发病，对我国养禽业造成了严重的经济损失。

本文从一例患鸡上检出FAdV-8a 病原核酸，这就意味着在当地已存在FAdV 感染， 对当地养禽业的健康发展也带来了新的挑战。 鉴于FAdV 血清型的多样性及不同血清型致病力存在的差异， 当前市面上尚无效果特别显著的商品化疫苗。 因此， 为了有效避免该病的发生而带来的经济损失， 在日常禽类疾病防控中，一方面必须加强饲养管理，做好环境卫生消毒工作；另一方面实施动态监测，发现该病要早日送样确诊，以便制定有效的防控策略。