局部臭氧联合持续负压吸引对高位肛瘘术后患者Bax、P53、caspase-3表达水平及伤口愈合的影响

谢云民　陈梅华　丁新民　何耀彬

【摘要】 目的：探討局部臭氧联合持续负压吸引对高位肛瘘术后患者Bax、P53、caspase-3表达水平及伤口愈合的影响。方法：选取2018年6月-2021年3月东莞市滨海湾中心医院收治的高位肛瘘切除术患者50例，采用随机数字表法分为联合组与臭氧组，每组25例。臭氧组术后给予局部臭氧治疗，联合组术后进行局部臭氧联合持续负压吸引治疗，对比两组临床疗效、愈合时间、愈合率、肛门疼痛积分及肛门肿胀评分以及凋亡分子Bax、P53、caspase-3的表达量。结果：联合组总有效率为96.00%，高于臭氧组的76.00%（P<0.05）。联合组创面愈合时间短于臭氧组，术后7、14 d创面愈合率均高于臭氧组，差异均有统计学意义（P<0.05）。联合组术后2 d肛门VAS评分与臭氧组相比，差异无统计学意义（P>0.05）;联合组术后7、14 d肛门VAS评分均低于臭氧组（P<0.05）。联合组术后2、7、14 d肿胀积分均低于臭氧组（P<0.05）。两组术后5、10、15 d的caspase-3、Bax、P53表达量比较，差异均有统计意义（P<0.05）。结论：局部臭氧联合持续负压吸引治疗可促进高位肛瘘术后创面愈合，提高临床疗效，减轻肛门疼痛与肿胀，抑制凋亡分子的表达，值得临床推广应用。

【关键词】 局部臭氧 持续负压吸引 高位肛瘘 术后 Bax P53 caspase-3 伤口愈合

Effect of Local Ozone Combined with Continuous Negative Pressure Suction on Expression of Bax， P53， Caspase-3 and Wound Healing in Patients with High Anal Fistula Surgery/XIE Yunmin， CHEN Meihua， DING Xinmin， HE Yaobin. //Medical Innovation of China， 2022， 19（07）： -151

[Abstract] Objective： To investigate the effect of local ozone combined with continuous negative pressure suction on the expression levels of Bax， P53， and caspase-3 and wound healing in patients with high anal fistula after surgery. Method： A total of 50 patients underwent high anal fistula resection in Binhaiwan Central Hospital of Dongguan City from June 2018 to March 2021 were selected and divided into the combined group and the ozone group by random number table method， 25 cases in each group. The ozone group received local ozone therapy after surgery， and the combination group received local ozone combined with continuous negative pressure suction therapy after surgery. The clinical efficacy， healing time， healing rate， anal pain score， anal swelling score and apoptosis molecule Bax， P53， caspase-3 expression levels were compared between two groups. Result： The total effective rate of the combination group was 96.00%， which was higher than 76.00% of the ozone group （P<0.05）. The wound healing time of the combination group was shorter than that of the ozone group， and the wound healing rates at 7 and 14 d after surgery were higher than those of the ozone group， the differences were statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in the anal VAS score between two groups at 2 d after surgery， and the anal VAS scores at 7 and 14 d after surgery were significantly lower than those in the ozone group （P<0.05）. The swelling scores of the combination group at 2， 7 and 14 d after surgery were significantly lower than those of the ozone group （P<0.05）. The protein expressions of caspase-3， Bax and P53 of the combination group at 5， 10 and 15 d after surgery were significantly lower than those of the ozone group （P<0.05）. Conclusion： Local ozone combined with continuous negative pressure suction therapy can promote wound healing after high anal fistula surgery， improve clinical efficacy， reduce anal pain and swelling， and inhibit the expression of apoptotic molecules， it is worthy of clinical application.

[Key words] Local ozone Continuous negative pressure suction High anal fistula Postoperative Bax P53 Caspase-3 Wound healing

First-author’s address： Binhaiwan Central Hospital of Dongguan City， Guangdong Province， Dongguan 523900， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.07.035

高位肛瘺为肛肠外科常见疾病，主要由肛周脓肿、直肠肛门损伤、肛裂反复感染所致，临床主要表现为瘘口流脓、肿痛、瘙痒、排便不畅等。手术是治疗高位肛瘘的主要手段，术后创面是开放有菌创面，创面愈合过程为修复-感染-再修复，术后创面愈合缓慢，期间易出现粘连、感染、假性愈合，创面分泌物及渗出液较多，疼痛明显[1]。为促进高位肛瘘术后创面愈合，临床采用局部臭氧联合持续负压吸引治疗，可在一定程度上促进创面愈合[2]。本研究高位肛瘘术后采用局部臭氧联合持续负压吸引治疗，使患者创面愈合时间明显缩短，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年6月-2021年3月高位肛瘘切除术患者50例为研究对象。（1）纳入标准：①符合高位肛瘘诊断标准[3]，并经临床检查确诊，伴随不同程度流脓、瘙痒、疼痛症状;②均行高位肛瘘切除术;③术后创面9～18 cm;④经药敏试验，均对本研究选用药物无过敏反应。（2）排除标准：①伴有溃疡性结肠炎、肠道感染性疾病;②存在肛管、直肠占位性病变;③合并急性传染性疾病;④合并糖尿病、凝血功能障碍、贫血症状;⑤处于妊娠期或哺乳期。随机数字表法分为联合组与臭氧组，每组25例。本研究已经医院伦理学委员会批准，患者及家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法 两组均给予常规治疗，术前完善有关检查，进一步确定瘘管的走行，借助球头探针从肛瘘外口进入，并到达内口部位。同时，医生借助右手食指完成患者肛诊，制定详细的治疗方案。根据患者情况将直肠环下组织切开，并完成瘘管的截断，形成人为造口，上述操作完毕后再次向内切口，且不同切口之间留有一定的距离，保证不同切口能独立引流。同时，手术过程中尽可能清除腐烂组织，并常规给予抗生素冲洗，预防感染，采用同样方式完成对侧瘘管的处理，直肠环挂橡胶线，采用宽为1 cm左右的长胶片贯穿两外口管腔、固定，术后常规放置引流管，定期帮助患者换药[4]。

1.2.1 臭氧组 术后给予局部臭氧治疗，具体方法如下：采用臭氧治疗仪（购自武汉鑫乐泰医疗技术有限公司）进行治疗，结合患者情况设置相关参数：臭氧浓度10 mg/L，治疗时选定臭氧水冲洗模式，必要时可配合臭氧熏蒸模式，每次治疗3 min，并帮助患者定期换药，15 d后评估疗效。

1.2.2 联合组 术后进行局部臭氧联合持续负压吸引治疗。持续负压吸引治疗方法如下：对创面部位进行常规消毒、铺巾，清除溃烂组织，充分暴露肌腱等组织。上述操作完毕后，常规采用双氧水、生理盐水等完成创面的清洗。常规测量创面大小，并对负压吸引辅料进行修剪，保证其能填入创面或完成创面的覆盖，将泡沫材料的硅胶引出，借助三通管完成负压装置的连接，设定中心负压125 mmHg，尽可能保证引流管通畅。同时，常规完成周围皮肤的处理，最后采用生物透性膜完成整个创面的封闭，海绵塌陷无漏气且动态询问患者伤口疼痛情况，每日行臭氧灌注1次（10 mL/min，30 min），维持1周，并于干预15 d后评估患者[5]。局部臭氧治疗方法与臭氧组相同。

1.3 观察指标及判定标准

1.3.1 临床疗效 参照《中国肛肠病学》于治疗后14 d进行评定，显效：治疗后临床症状消失，无渗出液，创面完全上皮化;有效：治疗后临床症状消失，渗出液较少，创面基本愈合，创面红肿<5 cm;无效：治疗后临床症状无明显改善，功能未恢复[6]。总有效=显效+有效。

1.3.2 创面愈合时间与创面愈合率 创面愈合时间即手术之日至创面完全愈合（创面完全上皮化）的时间;创面愈合率即试验期间测定患者术后2、7、14 d创面面积，术后2 d创面面积为最初创面面积，测定方法为将透明薄膜明薄膜均匀敷贴于创面，描绘创缘，再将薄膜铺于心电图描记纸，计算面积;创面愈合率=（上次创面面积-本次创面面积）/最初创面面积×100%[7]。

1.3.3 肛门疼痛积分

（1）借助视觉模拟评分法（VAS）评定术后肛门疼痛情况，通过1条长10 cm的游动标尺，于两端标记“0”和“10”，疼痛程度与分值呈正相关，0分为不痛，10分为极度疼痛。1～3分为轻度疼痛，不影响肛门功能;4～6分为中度疼痛，对肛门功能有一定影响;7～9分为重度疼痛，严重影响肛门功能。评定时间为术后2、7、14 d。

（2）肛门水肿积分：以肉眼观察描述，0分：无水肿;1分：将肛门作为中心，水肿最大直径≥0 cm且<1 cm;2分：水肿最大直径≥1分且<2 cm;3分：水肿最大直径≥2分且<3 cm;4分：水肿最大直径≥3分且<4 cm;5分：水肿最大直径≥4 cm[8]。评定时间为术后2、7、14 d。

1.3.4 Bax、P53、caspase-3蛋白表达量 于术后5、10、15 d换药时，蘸取创面肉芽组织，而后经裂解获得匀浆，并采用离心机进行分类获得检测样本，采用实时荧光PCR法测定Bax、P53、caspase-3蛋白水平[9]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 24.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验，组内比较采用配对t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用χ检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 联合组，男14例（56.00%），女11例（44.00%）;年龄21～55岁，

平均（40.17±5.64）岁;病程1～6年，平均（3.67±1.05）年。臭氧组，男13例（52.00%），女12例（48.00%）;年龄22～57岁，平均（41.08±5.42）岁;病程1～7年，平均（3.77±1.01）年。两组一般资料相比，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组临床疗效比较 联合组总有效率为96.00%，高于臭氧组的76.00%（χ=4.153，P<0.05），见表1。

2.3 两组创面愈合时间与创面愈合率比较 联合组创面愈合时间短于臭氧组，术后7、14 d创面愈合率均高于臭氧组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.4 两组不同时间肛门疼痛积分比较 联合组术后2 d肛门VAS评分与臭氧组相比，差异无统计学意义（P>0.05）;联合组术后7、14 d肛门VAS评分均低于臭氧组（P<0.05）。见表3。

2.5 两组不同时间肿胀积分比较 联合组术后2、7、14 d肿胀积分均低于臭氧组（P<0.05），见表4。

2.6 两组不同时间凋亡分子表达量比较 两组术后5、10、15 d的caspase-3、Bax、P53表达量比较，差异均有统计学意义（P<0.05），见表5。

3 讨论

高位肛瘘是肛肠科常见疾病，治愈该病分2个步骤，即使用高位肛瘘切除术清除感染病灶，术后创面完全愈合，术后创面愈合情况是治愈的重要标志[10]。近年来，随着手术技术不断进步，手术基本可将高位肛瘘完全切除，但由于肛门直肠生理结构复杂，神经丰富、血管纵横、淋巴密集，患者痛觉敏锐，且术后易发生感染、水肿[11]。同时，高位肛瘘术后创面为开放性有菌创面，疼痛明显，分泌物较多，愈合过程缓慢，易粘连、复发。因此，术后创面治疗对治疗效果具有重要影响[12]。

本研究结果显示，联合组总有效率为96.00%，高于臭氧组的76.00%（P<0.05）;联合组创面愈合时间短于臭氧组，术后7、14 d创面愈合率均高于臭氧组（P<0.05）。提示，局部臭氧联合持续负压吸引治疗可提高高位肛瘘术后创面愈合疗效，加快愈合速度。探究其原因在于，局部臭氧联合持续负压吸引治疗具有解毒生肌、消肿止痛作用，可有效避免细菌侵袭，可增加药物透皮速度与浓度，且对皮肤无明显刺激[13]。本研究结果显示，联合组术后7、14 d肛门VAS评分均低于臭氧组（P<0.05）;联合组术后2、7、14 d肿胀积分均低于臭氧组（P<0.05）。提示，局部臭氧联合持续负压吸引治疗可明显减轻患者肛门疼痛与肿胀症状。探究其原因在于，局部臭氧联合持续负压吸引治疗使皮肤与组织对药物的通透性显著增加，能够促使药物离子透过皮肤与组织定向、快速进入病变组织，使靶组织内药物浓度显著提升，药效增加[14]。

创面内成纤维细胞、内皮以及上皮细胞的增殖及其活性，主要与VEGF、FGFG1、FGFG2、EGF水平相关;但除此之外，Bax、P53、caspase-3凋亡分子在使细胞凋亡的同时，也可影响创面细胞的增殖活动[15]。这主要是因为Bax在通过线粒体途径以此诱导细胞凋亡过程中，其能定位表达于线粒体膜并能形成二聚体，Bax同源二聚体是细胞色素C通过线粒体膜进入细胞浆的通道[16];Bax通过促进细胞色素C进入胞浆来促进细胞发生线粒体途径凋亡。P53作为调控多条凋亡途径的分子，其在促进凋亡的过程中，主要是通过阻碍细胞周期以此对细胞增殖产生抑制作用，继而诱导细胞凋亡[17-18]。caspase-3则属于细胞凋亡过程的执行分子，不同的凋亡通路均能活化caspase-3并引起细胞凋亡[19-20]。本研究结果显示，两组术后5、10、15 d的caspase-3、Bax、P53表达量比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。说明局部臭氧联合持续负压吸引治疗能在一定程度上抑制肛瘘创面中的细胞凋亡、有利于创面内细胞的增殖，进而促进创面的愈合。

综上所述，局部臭氧联合持续负压吸引治疗用于高位肛瘘患者术后能缩短创面愈合时间，提高创面愈合率，抑制凋亡分子的表达，同时减轻肛门疼痛与肿胀，疗效较佳。

参考文献

[1]李杰，郭晓波.持续负压吸引联合臭氧治疗对高位肛瘘术后伤口愈合的疗效分析[J].检验医学与临床，2018，17（17）：2574-2577.

[2]吕小红.置管引流联合负压吸引应用于高位复杂性肛瘘的效果观察[J].齐齐哈尔医学院学报，2019，12（10）：85-86.

[3]尹璐，梁宏涛，姚一博，等.置管引流联合负压吸引治疗高位复杂性肛瘘的临床效果研究[J].结直肠肛门外科，2019，25（1）：13-18.

[4]李晟玮，陆继宏，张社生，等.改良式内口处理置管负压引流治疗高位肛瘘的临床分析[J].中国肛肠病杂志，2017，37（8）：41-43.

[5]彭勇，王思成，李王，等.臭氧水结合负压封闭引流持续灌洗治疗感染性创面的效果观察[J].中国冶金工業医学杂志，2018，35（5）：572-573.

[6]赵海龙，李珍，周伟忠.局部臭氧治疗在低位肛瘘创面愈合中的疗效观察[J].中国肛肠病杂志，2019，39（6）：28-29.

[7]王兴宝.基于内口高压原理先实后虚挂线法在高位肛瘘治疗的应用研究[D].南京：南京中医药大学，2019.

[8]曹东升.高位虚挂引流法对高位肛瘘患者术后康复及肛门功能的影响[J].河南医学研究，2018，27（23）：4318-4319.

[9]杜崩城.虚实结合挂线法与传统实挂线法治疗高位肛瘘患者的临床效果[J].医疗装备，2019，20（10）：252-253.

[10]王伟涛.虚挂线联合置管引流术对高位肛瘘患者肛门功能及并发症的影响[J].实用医药杂志，2018，35（12）：37-39.

[11]高红梅，王秦川，吴贝贝.主灶切开对口引流高位胶管引流治疗高位复杂肛瘘的临床应用[J/OL].临床医药文献电子杂志，2017，10（40）：7789-7789.

[12]张红伟.双向等压引流根治术对高位肛瘘患者创面愈合及肛门功能的影响[J].西藏医药，2018，39（6）：61-62.

[13]陈礼平，李凌冰，唐华.中医挂线联合对口引流疗法对高位肛瘘患者创面面积、切口愈合时间及临床疗效的影响[J].当代医学，2018，24（13）：117-118.

[14]李镇伟.直肠内推移瓣修补治疗高位肛瘘的临床效果[J].中国当代医药，2019，26（2）：46-48.

[15]曾四清.双向等压引流根治术、切开挂线术与虚挂术治疗高位肛瘘的手术效果及肛门功能保护效果比较[J].中外医学研究，2019，17（14）：132-134.

[16]顧文燕，李丽，吴敏.萝卜硫素通过调节Bax表达降低结肠癌细胞株对5-氟尿嘧啶的耐药性[J].中国现代中药，2019，21（4）：458-463.

[17]侯宇峰，蒲亚岚，张凤娟，等.RNA干扰抑制Paralemmin-3表达对6-OHDA致帕金森性神经损伤的保护作用[J].河北医药，2020，42（5）：664-667，672.

[18]赵海龙，李珍，周伟忠.局部臭氧治疗在低位肛瘘创面愈合中的疗效观察[J].中国肛肠病杂志，2019，39（6）：28-29.

[19]胡德明.臭氧大自血疗法联合负压封闭引流技术在脑卒中瘫痪患者难免性Ⅲ-Ⅳ期压疮的应用及机制探讨[J].黑龙江中医药，2019，48（6）：66-67.

[20]黄斌，张玉茹，刘连成，等.切开挂线术联合肛洗一号熏洗治疗高位肛瘘的临床研究[J].中国中西医结合外科杂志，2021，27（1）：63-67.

（收稿日期：2021-07-08） （本文编辑：程旭然）