海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对屠宰性能、器官指数、血清生化指标及组织病理学的影响

敖 蕊，许晨远，朱崇淼，姚 文，郑卫江*

(1.南京农业大学动物科技学院，南京 210095；2.南京致润生物科技有限公司，南京 211124)

鸡输卵管囊肿(cyst of fallopian tube，CFT)是由各种病因引起的输卵管肿胀，内含数量不等的液体的一类疾病的总称，也称为输卵管积液[1]。蛋鸡输卵管囊肿的临床症状多表现为病鸡腹部膨大，行走呈企鹅状；剖检后可观察到不同程度的输卵管积水，囊肿挤压生殖器官和其他腹部脏器并伴有萎缩或出血[1-2]。据统计，不同品种的蛋鸡均可发生输卵管囊肿；且随着蛋鸡养殖规模化、集约化的迅速发展，使蛋鸡长期处于亚健康状态，很容易诱发该疾病[3-4]。

输卵管囊肿是产蛋鸡比较常见的疾病。有研究表明，输卵管囊肿是慢性输卵管炎的常见并发症，可引起输卵管内渗或积脓[5]。Bisgaard和Dam[6]报道了丹麦蛋鸡输卵管炎的患病率为1.26%，而在澳大利亚患病率为11%[7]。Zhang等[8]临床调查发现，在种鸡和商业鸡中，输卵管囊肿的患病率分别为10%和15.1%。目前，对于蛋鸡输卵管囊肿研究多为探究其发病原因，如林楠[4]发现传染性支气管炎是输卵管囊肿蛋鸡可能的发病原因；闫志伟[1]采集输卵管囊肿病鸡组织进行细菌分离、血清鉴定，发现均可分离出卡氏杆菌及大肠杆菌；而输卵管囊肿对蛋鸡屠宰性能、器官指数、血清生化和免疫球蛋白的影响还鲜有报道。因此，本研究旨在为蛋鸡输卵管囊肿病提供更多的数据支撑，为后期预防和监测蛋鸡输卵管囊肿提供理论依据和参考。

1 材料与方法

1.1 试验设计

选取同一饲养环境和日龄(54周龄)的健康蛋鸡(CTR,n=9)和患有输卵管囊肿病的蛋鸡(CFT，n=7)。健康和患病蛋鸡均由病理专家现场挑选；健康蛋鸡的挑选标准为：在日产蛋率为87%～88%、体重在1.9～2.1 kg蛋鸡中随机挑选，所选健康鸡其行为、产蛋、采食量均正常(图1A)；输卵管囊肿蛋鸡的挑选标准为：患病鸡腹部膨大，触及地面，腹部触之柔软有“波动感”；站立和行走呈“企鹅”状(图1E)。

1.2 样品采集及指标测定

健康和患输卵管囊肿蛋鸡屠宰前禁食12 h，称量活重后于颈动脉采血，使用促凝管采集血液，通过冷冻离心机3 000 r·min-1离心15 min，吸取上清于冻存管中，制备血清样，-80 ℃保存，采集肺、胸腺、脾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠以及卵巢等样品。

1.2.1 屠宰性能测定 称量蛋鸡活重、屠体重、胸肌重及全净膛重，参照《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》(NY/T823—2004)[9]测定两组动物的屠宰性能。

1.2.2 器官指数测定 称取肠道、卵巢等组织的重量用于计算器官指数，计算公式如下：

器官指数(%)=各器官重/活体重×100。

参照Hao等[10]的方法，对卵巢卵泡直径进行计数：小白卵泡(SWF)直径为2～4 mm，大白卵泡(LWF)为6～8 mm，小黄卵泡(SYF)直径8～10 mm、等级卵泡(GF)直径>10 mm。

1.2.3 组织学病理观察 取蛋鸡的肺、卵巢及输卵管置于4%的多聚甲醛中固定，进行石蜡包埋、连续切片(5 μm)、HE染色、镜检[11]。

1.2.4 血清免疫球白的测定 血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法测定。相关免疫球蛋白ELISA试剂盒均购自上海江莱生物科技有限公司。

1.2.5 血清生化指标的测定 采用HITACHI-7020全自动生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和葡萄糖(GLU)。血清生化相关试剂盒均购自南京美康科技股份有限公司。

1.3 数据统计分析

将试验所得数据通过Excel 2016 进行整理，运用SPSS 26.0软件进行独立样本t检验分析，数据以“平均值(mean)±标准误差(SD)”表示。P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著，0.05≤P<0.10表示有提高或降低的趋势。

2 结 果

2.1 输卵管囊肿蛋鸡外观、内脏、卵巢和肺脏外观及组织病理学观察

图1为健康和输卵管囊肿蛋鸡内脏、卵巢和肺外观剖检结果。由图1可知，健康蛋鸡腹腔内脏器官排布正常(图1B)；进一步分离卵巢、输卵管(图1C)和肺(图1D)均无明显异常。但是，输卵管囊肿蛋鸡打开腹腔后可见输卵管出现似球状囊肿(图1F)；取出囊肿内液体发现，大部分液体清亮透明(图1F)，部分含有白色颗粒(图片未展示)。进一步对卵巢、输卵管和肺脏的外观检查发现，输卵管囊肿蛋鸡卵巢发育良好，可见不同发育阶段的卵泡(图1G)；偶见个别蛋鸡卵巢萎缩和发育不良(图片未展示)；此外，部分患病鸡的肺可看到黑色霉点状的病变(图1H)。

A～D为对照组(CTR)，A.外观；B.内脏解剖图；C.卵巢及输卵管；D.肺。E～H为输卵管囊肿组(CFT)，E.腹部肿大，站立呈“企鹅状”；F.输卵管内充满积液；G.卵泡发育正常；H.箭头处表示肺有“霉点状”病变

组织切片HE染色结果显示(图2)：对照组蛋鸡肺清晰可见其支气管、肺泡及毛细血管且无明显病理变化(图2A)；卵巢组织可见多个卵泡且卵泡发育正常(图2C)；输卵管组织膨大部黏膜层纤毛排列整齐(图2E)。进一步对虚线矩形标识处放大观察(100倍)发现肺无出血、淤血、水肿及炎性细胞浸润，肺泡内无浆液、红细胞等杂质(图2H)；卵巢结缔组织未见毛细血管充血(图2J)；输卵管膨大部黏膜层、浆膜层未见出血，胞膜、胞浆边界清楚(图2L)。与对照组相比，输卵管囊肿组蛋鸡对应脏器出现部分病理学变化，具体表现为：肺出现广泛性出血(图2B)，如箭头标识所示；卵巢皮质区出现充血(图2D)；输卵管彭大部黏膜层多处纤毛损伤严重，排列不齐，腺体结构模糊(图2F)。进一步放大观察(100倍)发现肺毛细血管充血，肺泡腔内充满大量的红细胞、炎性细胞及红色渗出物(图2I)，红色箭头处肺泡壁增厚；卵巢的病变主要表现在皮质区毛细血管扩张出血，炎性细胞浸润，其它未见明显病变(图2K)；输卵管膨大部黏膜层纤毛断裂、脱落，严重时无纤毛，浆膜层有炎性细胞浸润(图2M)。

A、H.CTR组肺；B、I.CFT组肺，肺泡腔内充满红色渗出物；C、J.CTR组卵巢；D、K.CFT组卵巢，皮质区毛细血管充血；E、L.CTR组输卵管；F、M.CFT组输卵管，膨大部绒毛断裂。A-F.放大倍数20倍，标尺500 μm; H-M.放大倍数100倍，标尺100 μm

2.2 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对屠宰性能的影响

由表1可知，输卵管囊肿组蛋鸡的活重和屠体重较对照组极显著升高(P<0.01),屠体率显著升高(P<0.05)，但全净膛率极显著降低(P<0.01)；胸肌重、胸肌率及全净膛重无显著差异(P>0.05)。此外，输卵管囊肿组蛋鸡输卵管积液体积为(820.00±285.54)mL，而对照组无积液。

表1 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对屠宰性能的影响

2.3 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对器官重、器官指数和卵泡数量的影响

由表2可知，输卵管囊肿组蛋鸡盲肠指数、十二指肠重、空肠重和回肠重及对应的指数较对照组极显著降低(P<0.01)，盲肠重和卵巢指数显著低于对照组(P<0.05)；对脾脏指数、胸腺指数、等级卵泡、小黄卵泡、小白卵泡和大白卵泡均无显著影响(P>0.05)。

表2 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对器官重、器官指数和卵泡数量的影响

2.4 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对血清生化和免疫球蛋白的影响

由表3可知，输卵管囊肿组蛋鸡血清中ALT和AST活性较对照组极显著升高(P<0.01)，ALP活性低于对照组(P<0.01)；TP(P=0.054)和GLOB(P=0.095)含量有升高的趋势；ALB和GLU含量差异不显著(P>0.05)；血清IgM含量有升高的趋势(P=0.085)，血清IgA和IgG含量差异不显著(P>0.05)。

表3 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对血清生化和免疫球蛋白的影响

3 讨 论

3.1 输卵管囊肿蛋鸡的剖检及组织学观察

禽类的泄殖腔是消化、泌尿和生殖系统的共同通道已被认为是输卵管囊肿主要的感染途径[12]。前期研究表明，由鸡杆菌引起的蛋鸡输卵管囊肿的病状多见于呼吸道及生殖道[13]。本研究中对输卵管囊肿蛋鸡剖检发现肺部有明显的“霉点状”病变，个别卵巢发育不良、卵泡萎缩变性；输卵管内蓄积积液。Ajayi等[14]研究发现，输卵管囊肿黑鸡的腹腔中出现中度弥漫性腹膜炎，伴有浆液性液体，存在发育良好的卵泡。Wang等[15]对60～90周龄的蛋鸡进行病理及细菌感染调查发现蛋鸡的输卵管囊肿可能是由泄殖腔区域的细菌上移引起的。本试验中蛋鸡输卵管囊肿病的感染类型及具体致病原因还有待进一步调查和研究。

刘慧敏[13]发现，输卵管囊肿能致鸡呼吸道及生殖道组织损伤且有明显的病理变化，表现在气管、肺、卵巢及输卵管均出现出血或炎性细胞浸润等。本试验中输卵管囊肿蛋鸡呼吸道和生殖道的组织病理学观察也发现了相似的结果，造成蛋鸡肺和输卵管组织上述病理变化的可能原因为：输卵管囊肿使肺、输卵管受损，造成炎性物质增加；同时实质器官上皮细胞受损，导致内皮肿胀，红细胞外渗，阻碍血液循坏，进而加重实质器官的病变及坏死。此外，有研究发现，输卵管膨大部黏膜层腺体出现炎症且呈红色，猜测是细菌引发感染造成血液循坏障碍[13]，使渗出物汇集于输卵管造成囊肿无法产蛋。本试验中虽观察到卵巢、肺及输卵管病变，但输卵管囊肿与上述脏器病变的相互关系及具体机制还需进一步研究。

3.2 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对屠宰性能的影响

屠宰率与全净膛率是禽类生产性能的重要指标[16]。林晴[17]研究发现，患有输卵管囊肿的30周龄海兰褐病鸡输卵管内积液体积量为500～1 000 mL。Williamson[2]研究发现，71周龄的白来航输卵管囊肿病鸡的体重30%在于输卵管内蓄积的积液重量，这与本试验中观察到的结果类似，输卵管囊肿组蛋鸡积液体积为(820.00±285.54)mL，占蛋鸡体重的28%；这也解释了输卵管囊肿组蛋鸡活重、屠体重和屠体率高于健康组，但全净膛率却低于对照组蛋鸡的原因。

3.3 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对器官重量、器官指数和卵泡数量的影响

消化器官的重量和大小是衡量生理功能的指标；禽类消化器官的相对重量与养分代谢率呈正相关[18-19]。本试验中输卵管囊肿蛋鸡组的十二指肠、空肠、回肠重量及器官指数显著低于对照组，其原因可能为肠道的重量与营养物质的消化、吸收有关；输卵管囊肿挤压脏器向前方移动，致使一些脏器萎缩或贫血，造成其营养吸收、消化能力下降；另外，随着蛋鸡日龄的增长，其小肠的增长速率降低；在产蛋高峰后期，蛋鸡的消化代谢功能减弱，导致小肠的重量及器官指数降低。

有研究表明，输卵管积液的存在与诱导卵巢功能下降、卵泡发育不良有关且不利于生殖[20-21]。王继安等[22]发现，蛋鸡早期感染肾性传染性支气管炎会导致输卵管囊肿，出现“假母鸡”情况，致使生殖障碍，无法产蛋。本试验中输卵管囊肿蛋鸡在卵泡数量方面没有显著差异，未出现卵泡坏死或卵泡不发育情况，暗示本研究中引起该病症的病原体主要以引起输卵管积液为特征，但其生殖功能仍完善。需要指出的是，虽然卵泡发育成熟，但因输卵管内蓄积大量液体可能会阻止卵泡进入输卵管，导致其无法正常产蛋，造成鸡群产蛋量降低[7]。

3.5 海兰灰蛋鸡患输卵管囊肿对血清生化指标和免疫球蛋白的影响

血清生化参数是动物生理功能的内部微观反映，间接反映了营养代谢、器官功能和健康状况[23]。Okorie-Kanu等[24]认为，无论ALT、AST、ALP各种酶浓度和血尿素氮(BUN)等的增加或减少，都间接提示感染禽病毒的禽类正在发生器质性疾病。Huang等[25]观察到肾性传染性支气管炎(NIBV)组的胚鸡血浆ALT、ALP和AST水平显著提高,认为NIBV感染可引起胚胎鸡的肝损伤。本试验也得到了相似的结果，即输卵管囊肿组蛋鸡ALT和AST含量极显著高于对照组，ALP含量极显著低于对照组；上述结果暗示输卵管囊肿可能还导致了肝功能的损伤[26]。ALT和AST是使用最广泛的肝健康临床生物标志物，ALT和AST在肝细胞损伤后会从肝细胞渗漏到血液中，当肝受损时，它们的水平通常会上升[27]。免疫球蛋白在应对外来有害物质入侵时发挥着重要作用[28]。朱新叶和程泾[29]研究发现，患有输卵管炎偶伴有输卵管积液的鼠血清分泌性免疫球蛋白(sIgA)与IgA较对照组均增高但差异不显著，本试验得到了类似的结果，输卵管囊肿组的IgM、IgA和IgG含量均高于对照组但差异不显著，提示输卵管囊肿可能对蛋鸡造成一定的炎症反应，机体产生相应的免疫防御响应，但是其与输卵管囊肿的相互关系尚需进一步的研究。

4 结 论

综上所述，输卵管囊肿提高蛋鸡的活重、屠体重和屠体率，降低全净膛率、消化器官指数和卵巢指数；极显著提高蛋鸡血清AST和ALT活性，降低血清ALP活性；并造成蛋鸡肺、卵巢及输卵管组织出现不同程度的病理损伤。

致谢：感谢南京农业大学动物医学院孙卫东教授作为病理专家在筛选病鸡中的帮助，及对本研究设计所提的宝贵意见。