培养基激素配比对粉丽人长寿花茎段培养的影响

王明山 韩春叶

摘要：以粉丽人长寿花茎段为材料，MS 为基本培养基，研究激素不同浓度配比对粉丽人长寿花快速繁殖生长的影响，以期寻找粉丽人长寿花茎段再生体系的最佳激素配比。结果表明，适宜粉丽人长寿花花芽诱导的培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，适宜粉丽人长寿花生根的培养基为1/4MS+NAA0.5mg/L。

关键词：粉丽人长寿花;组织培养;培养基

一、材料与方法

（一） 试验材料

粉丽人长寿花购于郑州市双桥花卉市场，取带腋芽的粉丽人长寿花的茎段2cm左右。

（二） 试验方法

1、粉丽人长寿花腋芽诱导方法。在接种前，将粉丽人长寿花用洗衣粉洗净并放在自来水下冲洗1h，然后将整株的外植体剪成带腋芽的茎段，将外植体带入无菌操作室，在超净工作台上用70%酒精溶液浸泡30s，无菌水冲洗4次，接着用0.1%升汞溶液浸泡8min，用无菌水冲洗6次，将粉丽人长寿花茎段上的水珠用无菌纸吸干，然后进行接种。以MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L为基本培养基（下同），加入1.0mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA，每个处理接种15瓶，每瓶分别接种2个、3个、4个茎段，培养条件（下同） 为温度25±2℃， 相对湿度为70% ～80% ， pH 值5.8， 光照强度1000～1500 lux。培养一个月后，记录每瓶诱导出芽的数目和污染的数目，计算其诱导率。

2、腋芽茎段初生培养方法。采用不同的6-BA和NAA激素配比，以MS为基本培养基，对带腋芽的粉丽人长寿花的茎段进行初代培养。6-BA 浓度（mg/L） 为1.0、1.5、2.0， NAA 浓度（mg/L） 为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0，共21个处理，每个处理15瓶，每瓶接种2个带腋芽的茎段。2周后观察、统计茎段的腋芽诱导率与污染率。然后将获得的无菌外植体接入到新鲜的培养基，进行继代培养。

3、外植体生根培养方法。分别以MS、1/2MS、1/4MS为基本培养基，加0.5mg/L NAA进行生根培养，每个处理接种15瓶，每瓶分别接种2个，60d后统计生根率。再以MS培养基为基本培养基，分别加入0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4mg/L、0.5 mg/L 的NAA，以不加NAA为对照，每个处理接种15瓶，每瓶分别接种2个。60d后，统计生根率。诱导率、污染率、生根率的计算公式如下：

二、结果与分析

（一） 培养基接种数与诱导出芽的外植体数的关系

从表1可以看出，培养基里每瓶放置4个外植体时，腋芽的诱导率为75%;当培养基里每瓶放置3个外植体时，腋芽的诱导率为33.33%;当培养基里每瓶放置2 个外植体时，腋芽的诱导率为100%。

上述分析结果表明，一个培养基里放置2个外植体，其腋芽诱导率最高，即每瓶接种2 个外植体诱导出芽效果最好。

（二） 激素对外植体诱导的影响

1、6-BA浓度对外植体诱导率的影响。植物生长调节剂用生长素（NAA） 和细胞分裂素（6-BA），其中，6-BA是根尖合成向上运输，主要作用是促进细胞分裂和器官分化，促进侧芽分化和生长;NAA具有调节植物生长和生根的作用。

进行初代培养14d后，对630个茎段的培养情况进行统计，结果见表2。对21个不同激素配比进行比较可知，在激素6-BA浓度为1.0～2.0mg/L、NAA的浓度为0～1.0mg/L时，都能长出定芽，在6-BA浓度为1.0mg/L、NAA浓度为0.2mg/L时，能较早分化出定芽，且定芽的增殖速度很快;当6-BA为1.0mg/L时，外植体的诱导率最高，其平均值为54.29%。所以，6-BA的最佳浓度是1.0mg/L。

增加1.5mg/L6-BA和2.0mg/L6-BA两个浓度与7组不同NAA浓度构成14个不同的浓度配比，探究增加6-BA的浓度能否增加诱导率。由表2可知，在增加的14个不同的浓度配比中诱异率有3 个峰点，分别是6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L配比中的诱导率为66.67%，6-BA2.0mg/L+NAA0mg/L配比中的诱导率为76.67%，6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L配比中的诱导率为50.00%。6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L 有3 个最低点， 分别是6 - BA1.0mg/L +NAA1.0mg/L 诱导率为26.67% 、6 - BA1.5mg/L +NAA0.3mg/L 诱导率为33.33% 、6 - BA2.0mg/L +NAA1.0mg/L诱导率为26.67%。

由表2可知，增加6-BA的浓度并不一定能增加诱导率，只有NAA的浓度在0和0.3mg/L、0.4mg/L时，增加6-BA的浓度，可以增加外植体的诱导率，诱导率增加情况分别为： 由66.67% 增加为76.67% 、由33.33% 增加为36.67%、由43.33%增加为50.00%;NAA 在其他浓度下，增加6-BA的浓度，反而降低诱导率。

2、NAA 浓度对外植体诱导率的影响。设置NAA 浓度（mg/L） 从0开始，以0.1的等差到0.5共6个不同浓度的激素梯度，探究培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA的最佳浓度配比，并了解当NAA与6-BA浓度相等时，培养基的浓度与前6组相比是否为最佳浓度配比。由表2可知，当浓度配比为6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L时，外植体的诱导率最高，而且污染率也相對较低。当NAA与6-BA浓度相等时，即二者均为1.0 mg/L时，外植体的诱导率为26.67%，其诱导率最低。

上述分析表明，NAA与6-BA浓度相等，并不是培养基中NAA与6-BA的最佳浓度配比。

（三） 激素配比对生根培养的影响

1、MS培养基的浓度对粉丽人长寿花生根率的影响。由表3可知，在适当的浓度范围内，MS培养基的浓度越低，粉丽人长寿花的生根率越高。本研究以1/4MS培养基的生根率最高，为80%，表明1/4MS培养基既满足了粉丽人长寿花生长的营养需求，又能很好地诱导生根。

2、NAA浓度对生根培养的影响。由表4可知，当MS培养基的浓度一定时，NAA浓度增加为0.1mg/L，粉丽人长寿花的生根率增加，当浓度增加到0.4mg/L NAA时，粉丽人长寿花的诱导生根率最大，为76.67%;再增加NAA浓度到0.5 mg/L时，生根率反而降低，降低为50.0%。

三、结论与讨论

粉丽人长寿花茎段诱导率与培养基接种数关系密切。本实验结果表明，每瓶培养基接种2个外植体时，茎段的诱导率最高，达100%，而且植株的生长情况良好。每瓶接种外植体越少，外植体可利用营养物质越充分，有利于茎段诱导出新的定芽。外植体越少，污染率相对越低，有利于植株生长。

不同浓度植物生长调节剂对粉丽人长寿花带腋芽的茎段初代培养有较大影响。汪宏刚[2]、李玉梅[3]、崔广荣[4]等研究表明， 粉丽人长寿花芽诱导最适培养基为MS+ 6- BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，芽增殖的最适培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L;孙男[5]、高建莉[6]等研究表明，6-BA的最佳浓度是1.0mg/L，张瑞姿[7]、陈梅[8]等研究表明，NAA最佳浓度是0.5mg/L，孙利娜[9]研究表明，NAA最佳浓度是0.2mg/L，关艳清等[10]、李凤兰[11]、程军[12]研究结果显示，NAA最佳浓度是1.0mg/L。本实验表明，对粉丽人长寿花的芽增殖初代培养中，6-BA浓度为1.0mg/L，NAA浓度为0.1mg/L能够较早分化出芽，且芽的增殖速度很快，外植体的诱导率最高。

粉丽人长寿花的生根诱导时，有不少学者使用低浓度的MS培养基，用1/2MS培养基比用MS培养基粉丽人长寿花的诱导生根率高，不少学者也研究了NAA浓度对粉丽人长寿花生根率的影响，但结果不尽相同，也有人提出最适生根培养基为1/2 MS+NAA 0.2～0.5 mg/L[13-15]。本实验研究表明，在适宜的MS范围内，基本培养基的浓度越低，粉丽人长寿花的生根率越高，1/4MS培养基的诱导生根率最高，且在基本培养基相同的条件下，加入0.5mg/LNAA，粉丽人长寿花的诱导生根率最大。

参考文献：

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基金项目：2018年度河南省科技攻关资助项目“土壤结构对解决草莓连作障碍根际微生态效应的影响研究”，项目编号：162102110092。

作者简介：王明山（1978-），男，河南尉氏人，讲师，研究方向：农业信息技术。

（责任编辑 曹雯梅）