猪常见细菌性病原检测方法研究进展

李璐

（辽宁省农业发展服务中心，辽宁 沈阳 110299）

猪的细菌性疾病是目前生猪养殖过程中最为常见的一类传染性疾病，是由一些具有致病性的细菌引发的疾病，这类疾病可以导致猪的个体在呼吸、生殖、消化、泌尿、循环等系统发生各类疾病。虽然随着生猪养殖管理水平的不断提高，细菌性疾病的发病率有所下降，但是细菌性疾病已经由单一的细菌感染逐渐转变成多细菌感染的状况，同时细菌的耐药情况不断严重，这就导致临床上出现临床症状简单化变的复杂化，更是难以治疗，严重威胁我国的生猪生产。细菌性病原检测在目前的生猪生产中就显得尤为重要，病原检测可以快速准确的明确感染的细菌种类，是控制细菌性疾病发生发展的重要手段。细菌的分离培养鉴定一直是细菌感染诊断的最为传统方法，这种方法的特点是较为准确直观，但是由于这种检测方法耗时较长，操作过程较为繁杂，尤其是一些生长条件苛刻的细菌更是难于鉴定，导致这种方法不能作为一种快速诊断的方法进行应用。一些常见的免疫学检测方法如：凝集试验、补体结合试验、中和试验等，虽然能作为细菌检测的常用方法，但是存在特异性较差、灵敏性不高等特点，不能大面积的推广应用到生产实践中。随着科学技术的不断发展，细菌检测技术也在不断的进步，目前已经从传统的检测手段朝着更高层次发展，如：免疫胶体金标记技术、免疫磁珠分离技术、实时荧光定量PCR法、DNA杂交技术等，这些新的检测技术适用于快速诊断应用，能够较为准确的为我国生猪细菌性疾病的诊断提供快速诊断的新方法。

1 免疫胶体金标记技术（ICS）

免疫胶体金标记技术是一种较为新型的检测技术，主要采用胶体金作为检测中的标记物。这种技术主要是根据免疫学中的抗原抗体之间的关系，采取毛细管作用或者渗滤作用又将其分为胶体金免疫层析法（GICA）和斑点免疫渗滤法（DIGFA）。目前这种方法可以应用在金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等一些细菌的检测。其特点是不需要特别的实验室设备支持，操作简单，特异性较高，成本较低等。但是同时也存在稳定性不是非常高，眼观判断主观性较高等问题。易兵[1]建立了一种猪肺炎支原体胶体金快速诊断试纸，共检测了54份样品，与传统的ELISA进行了对比，发现这种胶体金快速诊断试纸的阳性率为83.8%，ELISA的阳性率为90.7%。随着科技的不断发展，尤其是一些与检测相关的新型材料的发展，这种检测方法的准确率和特异性将会得到进一步的提升。

2 免疫磁珠分离技术（IMS）

免疫磁珠分离技术是通过细菌中某些特异性抗原存在一定超顺磁性，这些特异性抗原与一些化学基团形成亲和性的磁珠，最终形成免疫复合物，再通过磁场将其分离出来，使其浓缩纯化。目前这种方法可以检测多种细菌，如胸膜肺炎放线菌、鼠伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌等。该方法具有细菌分离速度快、特异性强、效率高等特点，随着不断的深入研究，这种检测方法的应用前景将更为广阔。白莉等[2]采用免疫磁珠分离技术和实时荧光定量PCR技术检测志贺毒素大肠埃希菌，效果较好。李倩茹等[3]采用免疫磁珠分离技术与荧光微球免疫层析法检测鼠伤寒沙门氏菌进行检测，结果显示其灵敏度非常高，比单一的检测方法效率提高了30倍。

3 实时荧光定量PCR法

实时荧光定量PCR法是采取荧光标记的探针对产物进行了标记，然后通过制作好的专门软件对检测的细菌样品进行分析。目前这种检测方法可以检测多种细菌，如沙门氏菌、猪附红细胞体、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、猪传染性胸膜肺炎放线菌、猪支原体等。该方法具有特异性高、敏感性强等多种优点。但是也存在一定的不足，如需要专业设备，操作要求较高，费用高，这就导致这种特异性强的检测方法在基层使用过程中受到了一定的限制。

4 DNA杂交技术（DNAH）

DNA杂交技术是一种核酸分子杂交技术，2007年由美国的一家公司开发上市。该检测方法与一些传统的检测方法相比，其特点是样品处理较为简单，不存在提取核酸等环节，特异性强、灵敏度高、假阳性率低等特点。刘亚娟等[4]建立了沙门氏菌等的DNA杂交技术检测方法，试验结果显示这种方法的检测最低限较低，灵敏度较高。

5 LAMP

LAMP技术属于恒温核酸扩增方法，在65℃反应30～60min，结果可直接可视化判定，与常见的PCR比省去了高温变性的环节，节省时间，其灵敏度和特异性等方面明显优于普通PCR。目前这种方法可检测多种细菌，如链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌、炭疽芽孢杆菌等。蔡树东等[5]应用LAMP技术对多种基因型的大肠杆菌进行检查，其灵敏度较高，能够较为准确的鉴定出大肠杆菌的类型。虽然这种方法已经成为常用的检测方法之一，但是偶尔也会出现假阳性的现象，随着科技的不断进步，LAMP技术会与一些其他检查技术集成于一体，更广泛的应用于多种微生物的检测。

6 POCT技术

POCT技术又称为即时检测技术，是一种集计算机、纳米、生物等于一体的检测技术。这种技术简易、即时、自动化、智能化，不需要大型的检测设备，在养殖现场即可进行检测，帮助兽医即时进行临床初步检测。该技术可检测链球菌、结核杆菌、艰难梭菌等多种微生物，随着这种技术的不断发展，相信在我国未来POCT技术将成为检测微生物的领头羊。

7 细菌质谱鉴定技术

细菌质谱鉴定技术是较为先进的一种细菌鉴定技术，通过鉴定细菌自身特有的蛋白，检测出细菌的特有的蛋白质图谱，在与数据库的数据进行对比，可较为准确的鉴定出细菌的种类，甚至亚型。这种技术可鉴定临床上常见的多种细菌，如大肠埃希菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌等，操作简单，结果准确，但是也存在一定的局限性，如果数据库中没有需检测细菌的数据，鉴定将不能完成。