基于茜素红S-苯硼酸光化学比色传感器的附子配方颗粒强心活性评价方法的建立

陈露梦，刘 惠，贺亚男，罗传红，贾明艳，周永峰，杨景屏，谭 鹏，杨 明，张定堃*

基于茜素红S-苯硼酸光化学比色传感器的附子配方颗粒强心活性评价方法的建立

陈露梦1，刘 惠1，贺亚男1，罗传红1，贾明艳1，周永峰1，杨景屏2，谭 鹏3，杨 明4*，张定堃1*

1. 成都中医药大学药学院，西南特色中药资源国家重点实验室，四川 成都 611137 2. 四川新盛源药业有限公司，四川 江油 621700 3. 四川省中医药科学院，国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室，四川 成都 610041 4. 江西中医药大学，现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004

基于附子强心组分去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱和棍掌碱共有的肾上腺素类似结构，构建了以邻二酚羟基基团与茜素红S-苯硼酸体系置换反应为核心的光化学比色传感器，用于整体评价附子配方颗粒的强心作用。以传感器的响应强度为评价指标，对超声提取时间、料液比、提取液浓度和乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）浓度等供试品的制备条件进行优化；并对该方法的精密度、重复性和稳定性进行考察；用平板扫描仪获取23批附子配方颗粒的|Δ|值（绿色， |Δ|＝|后－前|），同时采用LC-MS/MS测定附子配方颗粒中3种生物碱的含量，将|Δ|与强心成分总含量进行相关性分析。供试品制备方法优选为取附子配方颗粒粉末0.5 g，加10 mL甲醇，300 W、60 kHz超声提取15 min，将上清液全部转移至蒸发皿中，80 ℃挥干，4 mL 0.13 g/mL的EDTA-2Na溶液洗脱蒸发皿上物质，离心，取上清液，调pH至8.0左右，缓冲溶液稀释3倍。方法学考察表明该方法精密度、重复性和稳定性良好。23批样品的强心成分总含量的差异较大，为127.83～6 928.27 μg/g；|Δ|的范围为0～12.5，两者的相关系数（）高达0.96，表明强心成分总含量与|Δ|高度相关。该方法具有一定的科学性与准确性，可整体性评价附子配方颗粒强心药效。

附子；强心作用；配方颗粒；光化学比色传感器；质量评价；茜素红S；苯硼酸；去甲乌药碱；去甲猪毛菜碱；棍掌碱；肾上腺素

配方颗粒是中药饮片发展的一种新形式。目前，已有160个中药配方颗粒的国家标准颁布[1]，但大部分中药配方颗粒仍沿用现有中药饮片的评控体系，主要采用薄层、特征图谱、含量测定、浸出物等理化分析方法。这些检验指标虽具有一定的质控力，但与临床功效和安全性关联不紧密，难以评控中药配方颗粒的内在质量[2-3]。

附子为毛茛科乌头属植物乌头Debx.的子根加工品，因其对于各种急、慢性心衰疗效显著，被誉为“回阳救逆第一品药”，治病保命“药中四维”[4-5]。但由于含有双酯型生物碱等剧毒成分和不恰当的炮制、应用，时有关于附子中毒事件的报道[6-7]。附子配方颗粒主要以生附片、黑顺片、淡附片等饮片为原料，经工业化提取、浓缩、干燥、制粒而成。在提取过程中，附子剧毒成分大量降解，确保了用药安全，解决了因先煎带来的不便，且方便携带，调配灵活[8]。但由于不同厂家的饮片来源、生产制备、颗粒收率等方面的不同，市售附子配方颗粒的化学成分含量差异明显，尚未形成统一的国家质量标准，更缺少关联功效的整体质量评控方法。

课题组前期[9]建立了基于急性心衰大鼠血液流变学即时测定的附子强心活性评价方法，可真实客观地反映药物的药效强度，但技术难度高，可及性差，需消耗大量实验动物。LC-MS/MS虽能直接测定强心成分含量，但仪器的购置成本贵，检测速率较慢，且需使用多种对照品。

为寻找快速简便、关联功效的附子整体质量评控方法，课题组根据附子强心成分去甲乌药碱（higenamine，HI）、去甲猪毛菜碱（salsolinol，SA）、棍掌碱（coryneine，CO），构建了基于茜素红S（alizarin red S，ARS）-苯硼酸（phenylboronic acid，PA）光化学比色传感器的附子强心活性评价新方法。ARS与PA通过非共价键可逆性结合，含邻二酚羟基的物质与PA竞争性结合，指示剂被置换出来，产生指示剂颜色响应（原理如图1所示），具有价格低廉、操作简便、响应快速的特点。该方法实现了对不同批次生附片强心强度的区分[10]。

为进一步扩大该方法的应用范围，本实验以附子配方颗粒为研究对象，根据附子配方颗粒具有的药物浓度高、钙镁离子含量高等特点，优化改进供试品制备方法，对比光化学传感器检测结果与质谱测定结果的异同，并拟定附子配方颗粒的质量分级参考标准。

1 仪器与材料

1.1 仪器

EPSON Perfection V370 Photo全彩平板扫描仪，爱普生有限公司；KQ-500D E型超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司；Costar 96孔细胞培养板，美国康宁公司；pHS-3C型pH计，上海仪电科学仪器股份有限公司；Mili-Q型超纯水仪，美国Milipore公司；BSA 224SA型1/1万分析天平和BT25S型1/10万分析天平，德国Sartorius公司；L550型台式低速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；Agilent 6460C三重串联四极杆液质联用仪，美国Agilent公司，配有ESI离子源。

图1 IDA置换原理

1.2 试药

分析甲醇，批号2021032902，成都市科隆化学品有限公司；色谱乙腈，批号20032512，西格玛奥德里奇贸易有限公司；PA（批号C10492112）；ARS（批号1129L031），阿法埃莎化工有限公司；4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES），批号20200918，北京索莱宝科技有限公司；对照品HI（批号CHB210118，质量分数≥98%）、SA（批号CHB190104，质量分数≥98%）、棍掌碱（批号CHB180609，质量分数≥ 98%）均购于成都克洛玛生物科技有限公司；乙二胺四乙酸二钠（EDTA- 2Na，批号20190416）；无水亚硫酸钠（Na2SO3，批号015042101），成都市科龙化工试剂厂。

1.3 样品

23批附子配方颗粒（S1～S23）来源于全国5个不同厂家，样品信息见表1。

2 方法

2.1 |ΔG|值的测定

将缓冲溶液加入ARS-PA的反应体系后，平衡5 min，用平板扫描仪扫描反应“前”的图像。不同批次附子配方颗粒的供试品溶液加入反应体系，平衡5 min，反应完全后，取200 μL反应后的溶液于96孔板中，用平板扫描仪扫描，扫描反应“后”的图像。每个批次做3次平行实验，求取平均值。使用Adobe Photoshop CS 6.0软件获得反应前后图像中的绿色（）值，即为“前”和“后”，并进行差减，得到反应前后的变化值即|Δ|值（|Δ|＝|后－前|）。

2.2 供试品溶液制备方法的考察

2.2.1 超声时间的优化 准确称取的附子配方颗粒约0.5 g，加入10 mL甲醇，300 W、60 kHz超声提取15、30、45、60 min，对比不同超声时间提取的附子配方颗粒提取液加入前后的|Δ|值，优选最佳超声时间。结果|Δ|分别为9.50±0.00、9.17±0.57、9.83±0.57、9.83±0.57（＝3），超声时间对于配方颗粒的响应强度无明显的影响，因此，选取提取时间最短的15 min为最佳提取时间。

表1 样品信息

Table 1 Sample information

编号饮片类型批号厂家 S1黑顺片配方颗粒20095587江阴天江药业有限公司 S2黑顺片配方颗粒20104013江阴天江药业有限公司 S3黑顺片配方颗粒20099411江阴天江药业有限公司 S4黑顺片配方颗粒20088723江阴天江药业有限公司 S5黑顺片配方颗粒20085637江阴天江药业有限公司 S6黑顺片配方颗粒2101034安徽济人药业有限公司 S7淡附片配方颗粒0081579广东一方制药有限公司 S8黑顺片配方颗粒1808018安徽济人药业有限公司 S9黑顺片配方颗粒2007044安徽济人药业有限公司 S10黑顺片配方颗粒18019351北京康仁堂药业有限公司 S11黑顺片配方颗粒17010981北京康仁堂药业有限公司 S12黑顺片配方颗粒17026892北京康仁堂药业有限公司 S13黑顺片配方颗粒20035771北京康仁堂药业有限公司 S14黑顺片配方颗粒20008871北京康仁堂药业有限公司 S15黑顺片配方颗粒20008881北京康仁堂药业有限公司 S16淡附片配方颗粒0092391广东一方制药有限公司 S17淡附片配方颗粒0121871广东一方制药有限公司 S18生附片配方颗粒1905002W三九医药股份有限公司 S19生附片配方颗粒18054151江阴天江药业有限公司 S20生附片配方颗粒18063281江阴天江药业有限公司 S21生附片配方颗粒18072251江阴天江药业有限公司 S22生附片配方颗粒20092293江阴天江药业有限公司 S23黑顺片配方颗粒20035771北京康仁堂药业有限公司

2.2.2 料液比的优化 分别以1∶5、1∶10、1∶20、1∶30的料液比提取配方颗粒，超声15 min，对比不同料液比提取的附子配方颗粒提取液加入前后的|Δ|值，优选最佳液料比。结果|Δ|分别为3.00±0.00、5.75±0.50、10.17±0.57、10.17±0.57（＝3），当料液比为1∶5和1∶10时，附子配方颗粒的响应强度很弱，而当料液增比加至1∶20，响应强度增加，继续增加至1∶30后，响应强度不再增加，表明当料液比为1∶20时强心成分已能基本溶出，从节省时间、节约溶剂的角度，选取1∶20为最佳料液比。

2.2.3 附子配方颗粒提取液浓度的优化 pH调至8.0的附子配方颗粒提取液的颜色仍然偏深，为避免提取液颜色对于|Δ|造成干扰，分别用缓冲溶液将其稀释3、5、7、10倍，对比不同浓度的配方颗粒提取液加入前后|Δ|值，优选最佳的配方颗粒提取液浓度。结果|Δ|分别为10.00±0.00、6.00±0.00、5.60±0.55、2.40±0.89（＝3），附子配方颗粒提取液稀释3倍后溶液颜色很淡，将其加入反应体系后，传感器的响应强度很高。稀释至5、7倍时，传感器的响应强度急剧降低；继续稀释至10倍，传感器的响应强度很弱或几乎无响应，因此优选附子配方颗粒提取液稀释3倍后的浓度为最佳浓度。

2.2.4 EDTA-2Na质量浓度的优化 与生附片不同的是，黑顺片、白附片中含有大量的Ca2+、Mg2+，可竞争性的与茜素红络合，进而形成紫色络合物。为排除Ca2+、Mg2+对实验结果的干扰，选用EDTA- 2Na进行络合。平行称取4份同一批附子配方颗粒约0.5 g，超声提取后置于80 ℃的水浴锅上挥干，分别用4 mL质量浓度分别为0.06、0.10、0.13、0.15 g/mL的EDTA-2Na溶液洗脱蒸发皿上的物质，然后再用缓冲溶液稀释3倍，即得供试品溶液。对比不同质量浓度EDTA-2Na溶液对|Δ|的影响，优选最佳的EDTA-2Na质量浓度。研究结果发现，质量浓度为0.06、0.10 g/mL的EDTA-2Na溶液无法完全除尽供试品中的Ca2+、Mg2+，指示剂仍显紫色。当质量浓度增加至0.13 g/mL时，溶液不再显紫色，继续增加至0.15 g/mL时，传感器的响应强度也不再增加，说明当EDTA-2Na质量浓度为0.13 g/mL时，Ca2+、Mg2+已基本除尽。因此，EDTA-2Na质量浓度优选为0.13 g/mL。

2.2.5 供试品溶液的制备 准确称取附子配方颗粒约0.5 g，加入10 mL甲醇，300 W、60 kHz超声提取15 min，8000 r/min离心（离心半径81 mm）10 min，将提取液全部转移至蒸发皿中，80 ℃挥干溶剂，4 mL 0.13 g/mL的EDTA-2Na洗脱蒸发皿上的物质，洗脱液12 000 r/min离心（离心半径81 mm）10 min，取上清液，0.3 mol/L NaOH调pH至8.0左右，用缓冲溶液稀释3倍，即得供试品溶液。所有实验均在10 mmol/L的缓冲溶液（pH 8.0）中进行。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度 将SA（2.5 mmol/L）对照品溶液，加入ARS（0.1 mmol/L）和PA（0.3mmol/L）的反应体系中，0 ℃条件下反应，平衡5 min，将200 μL反应后的溶液加入96孔板中，平行移取6份，获取反应前后的图像。结果表明6次测定的|Δ|的RSD值为2.43%，表明该方法的精密度很好。

2.3.2 稳定性 将附子配方颗粒（S4）制成供试品溶液，室温放置，分别于0、1、2、4、6、8、10和12 h后进行反应，获取每个时间点的|Δ|，计算得|Δ|的RSD值。结果表明|Δ|的RSD值为1.21%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.3.3 重复性 平行称取6份附子配方颗粒（S4）约0.5 g，制成供试品溶液，分别获取该6个平行批次的|Δ|，计算|Δ|的RSD值。6份供试品溶液的|Δ|的RSD值为3.07%，表明该方法的重复性良好。

2.3.4 专属性 配方颗粒中常含有乳糖、糊精等辅料，可能会对|Δ|产生一定的干扰。前期研究中发现2.5 mmol/L的SA可将ARS完全置换出来。糊精在水中的溶解度很低，将溶解至饱和的糊精和3 mmol/L的乳糖加入ARS-PA的反应体系中，观察颜色的变化，并获取其|Δ|值。将3 mmol/L的乳糖和部分溶解的糊精加入ARS-PA的反应体系后，颜色几乎没有变化，|Δ|均为0，乳糖和糊精对于|Δ|几乎没有影响。

2.4 光化学传感器检测结果与质谱检测结果的对比

2.4.1 色谱质谱条件 Phenomenex C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱：0～1 min，2%～20%乙腈；1～5 min，20%～50%乙腈；5～10 min，50%～75%乙腈；10～15 min，75%～100%乙腈；体积流量为0.45 mL/min；柱温25 ℃；进样量5 μL[11]。

质谱采用ESI源，正离子模式检测；脱溶剂温度300 ℃；脱溶剂气N2体积流量11 L/min；雾化器压力15 psi（1 psi＝6.895 kPa）；毛细管电压4000 V；扫描方式为多反应检测（MRM）；3个待测化合物优化后的离子对、碎裂电压和碰撞能量见表2。

表2 附子配方颗粒中3种生物碱的质谱数据

Table 2 Mass spectrum data of three alkaloids in Fuzi formula granules

名称m/z碎裂电压/V碰撞能量/eV HI279.1/106.910020 SA179.9/116.910520 CO196.1/13716020

2.4.2 对照品溶液的配制 分别称取各对照品适量，精密称定，用甲醇配制成含HI、CO、SA的质量浓度分别为1.07、1.03、1.07 μg/mL的对照品储备液。

2.4.3 供试品溶液的配制 精密称取附子配方颗粒粉末约0.1 g，分别置于量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，超声提取30 min，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4.4 测定结果 按上述色谱与质谱条件进样，进行LC-MS/MS分析，测定样品中3种生物碱的含量，每个样品平行测定3份。23批附子配方颗粒的含量测定结果见表3。HI是活性较强的强心成分，但23批附子配方颗粒中HI的含量均很低，含量最高仅为1.64 μg/g，最低为0.27 μg/g，相差6倍。SA、CO是强心活性相对较弱的成分，不同产家、不同原料、不同批次的配方颗粒含量波动较大，CO含量从81.62～6 844.412 μg/g，相差83.85倍；SA含量最高为470.09 μg/g，最低为2.19 μg/g，相差214.17倍。观察发现，生附片配方颗粒中强心成分的含总量普遍较高，最高为6 928.27 μg/g。这是由于生附片未经过反复的水洗、浸漂、蒸煮处理，强心的水溶性生物碱保留较为充分。在收集的23批附子配方颗粒中，有15批是以黑顺片为原料制成的，由于黑顺片的原料、加工工艺、加工设备不同，致使不同厂家、不同批次的黑顺片配方颗粒强心成分的总含量差异巨大，最高为5 429.69 μg/g，最低为201.08 μg/g，相差近27倍。3批淡附片配方颗粒的强心成分的总含量均小于300 μg/g。推测这可能是因为淡附片由盐附子漂胆，与甘草、黑豆煮至透心后，切片干燥后制成，水处理环节过多，导致大量的水溶性生物碱流失，强心成分总含量总体偏低。23批附子配方颗粒的光化学传感器检测结果见表3。23批样品的|Δ|差异显著，最高为12.5，最低为0。生附片配方颗粒的|Δ|普遍较大，最高为12.5；淡附片的|Δ|较小，均接近于0；15批黑顺片配方颗粒的|Δ|差别很大，从0.5～11.6。对比23批样品的光化学传感器检测结果与质谱检测结果可发现，附子配方颗粒的强心成分总含量越高，|Δ|越大。

表3 附子配方颗粒中3种化合物的含量测定结果(n = 3)

Table 3 Determination results of three compounds in Fuzi formula granules (n = 3)

编号质量分数/(μg∙g−1)|ΔG| HICOSAHI＋CO＋SA 10.543 322.80125.353 448.697.13 21.645 167.38260.685 429.7011.60 30.53693.5320.11714.161.00 41.204 872.01257.695 130.909.00 50.661 093.2326.501 120.391.20 60.912 264.29371.912 637.115.75 70.4481.622.1984.260.50 80.34164.6036.14201.080.50 90.973 041.24470.093 512.308.75 100.992 421.33169.432 591.756.00 111.183 522.49128.793 652.457.83 121.003 538.40191.203 730.619.42 131.372 240.20268.922 510.503.75 141.352 433.56246.872 681.785.17 151.432 535.58270.082 807.095.00 160.27125.342.22127.830.25 170.52252.6036.64289.760.00 181.042 372.09227.552 600.688.20 191.346 484.6872.406 558.4211.20 201.636 844.4282.236 928.2712.50 211.536 656.6365.576 723.7412.00 221.185 260.8150.355 312.3411.25 231.632 401.69327.952 731.275.00

2.5 一致性和相关性分析

使用Origin 2019和SPSS 26.0软件分别对传感器阵列的|Δ|和3种强心成分总含量进行一致性和简单的线性相关性分析，验证该方法的科学性和准确性。为了验证该传感器评价附子配方颗粒强心作用的科学性，比较3种强心成分总含量与|Δ|值的一致性，如图2-A所示。气泡面积代表强心成分总含量的高低，气泡越大，强心成分的总含量越高。从气泡大小的排列顺序来看，强心成分的总含量排序与|Δ|总体上基本一致，除S10、S15、S18、S19稍有偏差。随后，为了进一步判断该传感器评价附子配方颗粒强心作用的准确性，本研究对|Δ|与强心成分的总含量进行了相关性分析。从图2-B可以看出，|Δ|与强心成分的总含量呈现显著的线性相关，其相关系数（）高达0.96，相关性方程为＝0.001 9＋0.360 1。将|Δ|值代入相关性方程后，便可预测其强心成分的总含量。本研究建立的ARS-PA光化学比色传感器可有效地评价附子配方颗粒的品质，反映其强心作用的强弱。

图2 强心成分总含量与|ΔG|的一致性评价(A) 和相关性分析(B)

2.6 附子配方颗粒的质量评价标准初步研究

强心是附子的主要药理作用，受药材来源、制剂工艺、产品规格等因素的影响[12-14]，不同批次、不同产家、不同类型的附子配方颗粒含强心成分的总含量存在着显著的差异。反应后的颜色与强心成分的总含量密切相关，因此可通过颜色快速评定附子配方颗粒质量优劣。根据23批样品反应后的颜色，构建附子配方颗粒质量评价比色卡及其对应的|Δ|和强心成分总含量的范围。

本实验依据颜色的差异，制作附子配方颗粒比色卡，便于后续的分级评定。如图3所示，强心作用较弱的附子配方颗粒反应后的颜色为橙黄色；强心作用中等的附子配方颗粒反应后的颜色偏红；强心作用较强的附子配方颗粒反应后的颜色为紫红色。此外本实验通过制作的附子配方颗粒比色卡对收集的23批附子配方颗粒进行初步分级评定，结果表明这批样品中强心作用较强的有5批，强心作用中等12批，强心作用弱的有6批。

图3 附子配方颗粒质量评价比色卡

3 讨论

含邻二酚羟基结构的化合物不太稳定[15]，易被氧化，因此附子配方颗粒提取液若放置过久，强心活性物质将会被氧化，溶液颜色加深，对|Δ|值产生影响。供试品的稳定性考察结果表明，样品在 12 h内是稳定的，但12～24 h溶液的颜色及响应强度均发生一定的变化。考虑到有时样品溶液制备后无法在12 h内将其检测完成，为提高供试品的稳定性，在EDTA-2Na缓冲溶液中加入抗氧化剂（0.1%无水Na2SO3），考察1、6、12、24 h稳定性，结果表明加入抗氧化剂后供试品可在24 h内依旧能保持稳定。因此，有时为提高供试品的稳定性可考虑在其中加入0.1%无水Na2SO3。

附子产鲜季节产量大，如不及时采挖处理，1周时间就会大量腐烂，因此需通过泡胆工艺防腐[16-17]。泡胆用的胆巴水由MgCl2、CaSO4、CaCl2、NaCl高浓度混合溶液组成[18-19]。自清朝后期以来，在四川江油地区，形成了“泡胆-退胆-煮制-剥皮-切片-蒸制（火烤）”的主流工艺[20]。部分商家为谋取个人利益，故意退胆不净，致使黑顺片、淡附片中仍然残留着大量的Ca2+、Mg2+，其会与ARS络合，进而形成紫色络合物，严重干扰实验结果。因此，附子配方颗粒在供试品的制备过程中需加入一定量的EDTA-2Na，络合去除金属离子。

LC-MS/MS是鉴别附子强心活性成分常用的方法，但其依赖昂贵仪器、分析成本高、需要专业人员、操作复杂、不便于在基层单位使用。相较于LC-MS/MS等大型分析设备，该方法大大缩减了分析成本：无需专业设备、无需昂贵的对照品、无需专业的操作人员；节省时间，虽然该方法供试品制备时间略长，但|Δ|值测定时间短，扫描1次仅需几秒，整体所需时间较LC-MS/MS有所减少，如1个样品从制样到显色需大约1.8 h，而LC-MS/MS测定该3种成分需要2.25 h左右。该方法作为现有方法的重要补充，可整体性的评价附子配方颗粒的强心作用，可为附子配方颗粒质量标准完善提供了重要的技术支撑。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Establishment of cardiotonic activity evaluation method of Fuzi formula granules based on alizarin red S-phenylboronic acid photochemical colorimetric sensor

CHEN Lu-meng1, LIU Hui1, HE Ya-nan1, LUO Chuan-hong1, JIA Ming-yan1, ZHOU Yong-feng1, YANG Jing-ping2, TAN Peng3, YANG Ming4, ZHANG Ding-kun1

1. State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China 2. Sichuan Xingshengyuan Pharmaceutical Co., Ltd., Chengdu 621700, China 3. State Key Laboratory of Biological Evaluation of TCM Quality, National Administration of TCM, Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences, Chengdu 610041, China 4. Key Laboratory of Modern Preparation of TCM, Ministry of Education, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330004, China

Based on the similar structure of adrenaline shared by higenamine, salsolinol and coryneine, a photochemical colorimetric sensor based on the displacement reaction of-diphenol hydroxyl group and alizarin red S-phenylboric acid system was proposed to evaluate the cardiotonic effect of Fuzi () formula granules as a whole.Taking the response intensity of the sensor as the evaluation index, the preparation conditions of test samples such as ultrasonic extraction time, solid-liquid ratio, extraction solution concentration and EDTA-2Na concentration were optimized; then the precision, repeatability and stability of the method were investigated; The |Δ| value (is green, |Δ| = |after－before|) of each sample was obtained by response values determination of 23 batches of Fuzi formula granules; at the same time, the contents of three alkaloids in Fuzi formula granules were determined by LC-MS/MS. The correlation between |Δ| and the total content of cardiac components was analyzed.The preparation method of the test article was preferably as follows: take 0.5 g of Fuzi formula granular powder, add 10 mL of methanol, and ultrasonic at 300 W and 60 kHz for 15 min, put the supernatant in an evaporating dish, volatilize it at 80 ℃, elute the substance on the evaporating dish with 4 mL of 0.13 g/mL EDTA-2Na solution, centrifuge, take the supernatant, adjust the pH to 8.0, and dilute the buffer solution three times; The methodological investigation showed that the method had good precision, repeatability and stability. The total content of cardiac components in 23 batches of samples varied greatly, 127.83—6 928.27 μg/g; The range of |Δ| was 0—12.5, and the correlation coefficient () was as high as 0.96, indicating that the total content of cardiac components was highly correlated with |Δ|.The method is scientific and accurate, and can evaluate the cardiotonic effect of Fuzi formula granules as a whole.

; cardiotonic action; formula granules; photochemical colorimetric sensor; quality evaluation; alizarin red S; phenylboronic acid; higenamine; salsolinol; coryneine; adrenaline

R283.6

A

0253 - 2670(2022)06 - 1761 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.06.018

2021-10-26

四川省中医药管理局科学技术研究专项（2021MS016）；国家自然科学基金青年科学基金项目（82003907）；四川省中医药管理局中医药重点学科建设项目（川中医药函[2020]84号）；四川省重点研发项目（2022YFS0429）

陈露梦，女，硕士研究生，研究方向为中药炮制新技术。E-mail: 491145843@qq.com

杨 明，男，教授，博士生导师，研究方向为中药炮制与制剂。E-mail: yangming16@126.com

张定堃，男，博士，副教授，研究方向为中药制药与品质评价新技术。E-mail: zhangdingkun@cdutcm.edu.cn

[责任编辑 郑礼胜]