多囊卵巢综合征患者血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA表达与疾病严重程度及预后的关系*

李 佩，穆 丹，陈利平，曹 阳

监利市人民医院妇产科，湖北监利 433300

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种复杂的妇科内分泌紊乱症候群，严重威胁女性身心和生殖健康[1]。大部分PCOS患者患病后肥胖程度增加可能会影响患者体内脂代谢、胰岛素抵抗等，进而影响病情进展[2]。性别决定区Y框蛋白9(SOX9)基因缺陷可能会导致机体发育不良[3]。WAN等[4]研究结果显示，SOX9表达水平在卵巢发育的前4个阶段保持稳定，在第三卵黄发生阶段下降。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对脂代谢调控具有重要作用[5]。石超逸等[6]研究表明，PPARγ在PCOS的发病机制中发挥着重要作用。此外，PPARγ可通过对SOX9进行负向调控参与胃癌的发展[7]。推测SOX9、PPARγ在PCOS病情进展中也可能发挥调控作用，然而目前关于SOX9、PPARγ在PCOS患者中的研究较少。因此，本研究通过初步探讨血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA与PCOS患者病情及预后的关系，以期为PCOS发病机制的进一步探究奠定基础。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年3月至2020年1月于本院住院治疗的102例PCOS患者作为PCOS组，年龄22～30岁，平均(26.09±3.17)岁；选取同期99例体检健康女性作为对照组，年龄22～30岁，平均(25.46±3.04)岁。根据出院后1年内患者是否不孕，将其分为预后良好组66例(出院后1年内怀孕)和预后不良组36例(出院后1年内不孕)。本研究经医院伦理委员会批准；所有研究对象均自愿参加，并签署知情同意书。

纳入标准：(1)PCOS患者符合《多囊卵巢综合征中国诊疗指南》中的诊断标准[8]；(2)临床资料齐全；(3)依从性好，且能顺利随访。排除标准：(1)近3个月服用过激素类药物者；(2)认知功能障碍或精神异常者；(3)伴肾功能不全等慢性系统疾病，或高血压、先天性心脏病等心血管疾病及内分泌疾病者；(4)伴有子宫内膜异位症、子宫畸形者；(5)无糖尿病家族史或伴有恶性肿瘤。

1.2仪器与试剂 RNA提取试剂盒(批号：TR205-50)购自北京天漠科技开发有限公司；荧光定量PCR试剂盒(SYBR Premix Ex Taq Ⅱ,批号：218076)购自德国QIAGEN公司；反转录试剂盒(批号：RP1105)购自上海振誉生物科技有限公司；荧光定量PCR参比染料(Rox reference dye,批号：7710005)购自杭州新景生物试剂开发有限公司。全自动生化分析仪(型号：Cobas 6000)购自瑞士罗氏公司；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)仪(型号：7500)购自美国Applied Biosystems公司。

1.3研究方法

1.3.1样品采集及保存 采集体检健康女性体检当天及PCOS患者入院第2天(纳入患者时均选择其月经周期第3～5 d)清晨空腹静脉血5 mL，3 000 r/min离心15 min后收集血清，置于-20℃保存待测。

1.3.2一般资料收集 查阅门诊及住院病历，收集患者入院时一般资料，包括年龄、体质量指数(BMI)。采用全自动生化分析仪检测空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平。

1.3.3血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA相对表达水平测定 采用RNA提取试剂盒提取血清总RNA，反转录试剂盒将RNA反转录得cDNA。采用qRT-PCR仪对SOX9、PPARγ及其内参GAPDH进行扩增。反应体系共20 μL：cDNA模板(50 ng/μL)2 μL，正反向引物(10 μM)各0.8 μL，SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×)10 μL，ddH2O 6 μL，Rox reference dye(50×)0.4 μL，引物由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成，引物序列见表1。反应条件：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，45个循环。每个样品重复3次，采用2-ΔΔCt法计算血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA相对表达水平。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.4病情类型[9]根据PCOS患者病情类型，将其分为：A型组[无排卵或稀发排卵(O)+雄激素水平升高的生化和临床表现(HA)+卵巢多囊样改变(P)]23例、B型组(O+HA)27例、C型组(HA+P)26例、D型组(O+P)26例。

2 结 果

2.1对照组与PCOS组一般资料比较 对照组与PCOS组年龄、E2、FSH、FPG比较差异无统计学意义(P>0.05)；PCOS组BMI、FINS、T均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 对照组与PCOS组一般资料比较

2.2对照组及不同病情类型PCOS患者血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA相对表达水平比较 对照组、A型组、B型组、C型组、D型组血清SOX9 mRNA相对表达水平依次降低，PPARγ mRNA相对表达水平依次升高，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 对照组及不同病情类型PCOS患者血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA相对表达水平比较

2.3PCOS患者血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA与T、BMI、FINS水平的相关性 Pearson分析结果显示，PCOS患者血清SOX9 mRNA与PPARγ mRNA呈负相关(r=-0.649；P<0.001)；SOX9 mRNA与T、BMI、FINS呈负相关(r=-0.498,-0.512,-0.523，P<0.05)；PPARγ mRNA与T、BMI、FINS呈正相关(r=0.502、0.476、0.517，P<0.05)。见图1、表4。

表4 PCOS患者血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA与T、BMI、FINS水平的相关性

图1 PCOS患者血清SOX9 mRNA与PPARγ mRNA水平的相关性

2.4预后良好组与预后不良组血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA及T、BMI、FINS水平比较 预后不良组SOX9 mRNA相对表达水平显著低于预后良好组，PPARγ mRNA、T、BMI、FINS水平均显著高于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 预后良好组与预后不良组血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA及T、BMI、FINS水平比较

2.5影响PCOS预后的多因素Logistic回归分析 将PCOS患者是否不孕作为因变量，排除年龄、E2、FSH、FPG等混杂因素后，以SOX9 mRNA、PPARγ mRNA、T、BMI、FINS为自变量进行Logistic回归分析，结果显示PPARγ mRNA是影响PCOS患者不孕的独立危险因素(P<0.05)，SOX9 mRNA是影响PCOS患者不孕的保护因素(P<0.05)。见表6。

表6 影响PCOS预后的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

PCOS在育龄期妇女中较为常见，是引起不孕不育的主要原因之一，其主要病理特征是性激素分泌紊乱[10-11]。有研究表明，PCOS的主要病理机制是高雄性激素血症及胰岛素抵抗，但免疫功能异常、炎症因子激活、氧化应激等同样影响PCOS的病情进展[12]。PCOS造成的不孕等不良预后严重影响女性生殖功能，同时给患者和其家庭带来沉重的生理和心理负担[13]。深入了解PCOS病理机制对制订针对性治疗措施有重要作用。

SZCZUKO等[14]研究表明，PCOS患者因受肥胖等多种因素影响，机体内发生胰岛素抵抗，致使FINS分泌量增加。本研究中PCOS患者血清FINS水平高于健康女性，与SZCZUKO等[14]结果基本一致，均提示胰岛素抵抗在PCOS病情进展中发挥重要作用。SOX家族是一类核转录因子，与早期胚胎发育有关，在神经发生、软骨形成等众多发育过程中发挥重要作用[15-16]。SOX9在不同信号通路中可能呈现不同的生物调节作用[17]。PPARγ是PPAR家族在卵巢颗粒细胞中的重要表达亚型，对胰岛素-糖代谢稳态的调控具有重要作用[18-19]。PPARγ激活后可通过调控脂肪细胞因子或其下游因子的表达，进而影响脂肪细胞分化和内分泌功能[20]。CHEN等[21]研究结果显示，肝星状细胞中SOX9可以与PPARγ启动子的瘦蛋白反应区域中-2275周围的位点结合，同时抑制PPARγ的表达，表明SOX9与PPARγ间有互相调控的作用。本研究结果显示，PCOS患者血清SOX9 mRNA水平显著降低，PPARγ mRNA水平显著升高，二者变化趋势与病情严重程度相平行，且二者在PCOS患者中呈负相关。提示SOX9 mRNA、PPARγ mRNA可能分别通过低表达和高表达参与PCOS的发生、发展，推测PCOS患者病理状态下SOX9 mRNA水平降低后负靶向调节PPARγ mRNA，使其表达水平升高，PPARγ mRNA影响胰岛素信号通路及脂肪代谢相关因子的表达，导致患者体内发生胰岛素抵抗，影响PCOS病情进展。朱磊等[22]研究表明，低氧训练可通过影响大鼠肝脏微小RNA-27(miR-27)/PPARγ通路，调控其下游脂肪酸代谢相关基因，进而影响脂代谢水平。本研究结果中PCOS患者血清SOX9 mRNA、PPARγ mRNA与T、BMI、FINS均呈一定的相关性。进一步说明SOX9 mRNA、PPARγ mRNA在PCOS患者胰岛素抵抗中发挥重要作用。此外，PCOS预后不良患者SOX9 mRNA呈低水平，PPARγ mRNA、T、BMI、FINS呈高水平，且SOX9 mRNA、PPARγ mRNA是患者预后不良的影响因素。进一步提示SOX9 mRNA、PPARγ mRNA可能不仅通过胰岛素抵抗参与PCOS疾病的进展，还可能影响患者预后，造成不孕等情况发生。本研究受实验条件、地域等因素影响，需丰富样本量、纳入更多影响因素进一步深入研究，同时还需借助细胞及动物试验探索其具体作用机制。

综上所述，PCOS患者血清SOX9 mRNA表达水平降低，PPARγ mRNA表达水平升高，且随病情加重，其趋势变化更加明显，同时二者与患者预后也有一定的相关性。SOX9 mRNA、PPARγ mRNA可能影响PCOS的发生发展，且有可能成为PCOS辅助治疗的靶基因。