中性粒细胞胞外诱捕网水平在脓毒症患儿病情评估中的临床应用价值

任冲 陈楠 陈宁

郑州大学附属儿童医院河南省儿童医院郑州儿童医院郑州市儿童感染与免疫重点实验室检验科，郑州 450000

脓毒症发病率较高，多是受烧伤、感染、大手术等因素影响，致使细菌侵袭，诱发机体组织感染所引发，可导致机体内多器官功能障碍，严重危害生命［1］。脓毒症来势凶险，其临床症状通常表现为心率增快、寒战、发热等，若未及时治疗，随病情进展，可逐渐增加治疗难度，且不利于预后［2-3］。随现代生物与分子生物学技术的逐渐发展，生物标志物逐渐跃入眼帘，在病情评估、预后判断中均具有重要作用。中性粒细胞为机体免疫系统重要防线，当机体遭受病原菌侵袭时，该细胞可于受损组织处快速聚集，并大量释放中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）捕获并杀灭病原菌。本研究选取郑州大学附属儿童医院53例脓毒症患儿和53列健康体检患儿，分析NETs水平在患儿病情评估中的应用价值，具体分析如下。

资料与方法

1、一般资料

本研究经郑州大学附属儿童医院伦理委员会审批通过，选取2019年10月至2021年6月郑州大学附属儿童医院脓毒症患儿53例作为脓毒症组，并以1∶1配比选取53例健康体检患儿作为健康组。健康组：男33例，女20例；年龄0.16～14.00（1.83±0.59）岁；体质量4～30（24.08±2.71）kg。脓毒症组：男29例，女24例；年龄0.16～14.00（2.07±0.68）岁；体质量4～30（23.14±2.57）kg；其中发病至入院时间4～32（5.72±0.83）d；病情程度：一般47例，严重6例。两组基线资料均衡可比（均P>0.05）。

2、选取标准

（1）纳入标准：①经实验室检查确诊为脓毒症；②伴有心率增快、寒战、发热等临床症状；③白细胞计数上升>12×109/L或减少<4×109/L；④呼吸频率>20次/min或动脉血二氧化碳分压<32 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；⑤心率>90次/min；⑥体温>38℃或<36℃。（2）排除标准：①携带人类免疫缺陷病毒（HIV）者；②长期应用放化疗等治疗者；③伴有自身免疫疾病或先天性免疫缺陷及遗传代谢性疾病；④严重心肝肾功能不全；⑤近期曾接受过免疫抑制或糖皮质激素治疗；⑥存在血液系统疾病。

3、方法

于清晨抽取两组4 ml外周静脉血，30 min内送检，采用离心机（型号：BY-320C，厂家：北京白洋医疗器械有限公司），离心半径为10 cm，3 000 r/min的速度离心10 min，分离血清，冷藏待检。借助RPMI1640培养基（货号：C22400500BT，厂家：美国Gibco公司）、胎牛血清（货号：10270-106，厂家：美国Gibco公司）等工具检测NETs水平。

4、观察指标

（1）比较两组研究对象的NETs水平。（2）比较不同病情程度脓毒症患儿的NETs水平。（3）比较脓毒症患儿不同时间点不同时期的NETs水平：入院第1天、第7天感染消散期组和感染期组患儿的NETs水平。（4）比较不同预后脓毒症患儿的NETs水平：统计脓毒症组存活者、死亡者NETs水平。（5）NETs不同时期及预后的相关性分析。

5、统计学方法

采用SPSS 22.0分析，计数资料采用χ2检验，计量资料符合正态分布，以（±s）表示，采用独立样本t检验，采用Spearman进行相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1、两组研究对象NETs水平的比较

脓毒症组患儿的NETs水平明显高于健康组［（42.41±4.34）%比（0.26±0.04）%］，差异有统计学意义（t=70.701，P<0.001）。

2、不同病情程度脓毒症患儿NETs水平的比较

6例脓毒症严重患儿的NETs水平明显高于47例一般患儿［（57.82±6.19）%比（40.11±4.08）%］，差异有统计学意义（t=9.429，P<0.001）。

3、脓毒症患儿不同时间点不同时期NETs水平的比较

入院第1天、入院第7天，感染期患儿NETs水平明显高于感染消散期，差异均有统计学意义（均P<0.001），见表1。

表1 脓毒症患儿不同时间点不同时期NETs水平的比较（%，±s）

表1 脓毒症患儿不同时间点不同时期NETs水平的比较（%，±s）

注：NETs为中性粒细胞胞外诱捕网

组别感染消散期感染期t值P值例数39 14入院第1天41.03±4.10 46.80±4.67 6.162<0.001入院第7天19.72±3.91 51.20±5.23 31.627<0.001

4、不同预后脓毒症患儿NETs水平的比较

14例死亡者NETs水平明显高于39例存活者［（59.56±5.35）%比（33.56±3.46）%］，差异有统计学意义（t=20.723，

P<0.001）。

5、NETs不同时期及预后的相关性分析

Spearman分析结果显示，NETs水平和感染期、预后死亡呈明显的正相关（r=0.581、0.623，均P<0.001）。

讨 论

脓毒症是机体面对细菌所致感染反应失调所诱发的危急症，其发病机制尚未明了，涉及凝血功能、免疫功能障碍等多方面［4-5］。但主要是受病原微生物侵入影响，引发的机体细胞与体液免疫反应，逐渐产生抗炎与促炎反应，而当二者失衡时，致使若干介质大量生成，进而引发脓毒症，损伤器官功能［6-8］。脓毒症依据不同病情程度又可将其细分为脓毒性休克、严重脓毒症、脓毒症等。脓毒性休克主要是指在予以充足液体复苏后，持续性低血压症状仍无法有效纠正；严重脓毒症是指存在脓毒症的同时，同时伴有低血压、组织灌注不良、器官功能障碍等并发症；脓毒症则是指病原菌侵入所诱发的全身炎症反应综合征［9-11］。

在脓毒症进展期间，其病理基础主要为炎性反应。这些细胞因子并非单指一或几种，而是数量巨大的炎性细胞因子相互刺激，在其共同作用下所造成的炎性反应紊乱。而炎性反应可促使中性粒细胞激活，利用炎症介导、氧化应激等作用，于细胞外逐渐分泌出以DNA为骨架的网状结构，该种网状结构内富含多种抗菌蛋白，当这种网状结构成型后，可以网状或线状等形态，于中性粒细胞附近聚集或于循环中以棉絮状游离，利用所含抗菌蛋白对病原体进行灭杀，有效抵抗病原菌侵入，该结构在医学上被称之为NETs［12-14］。本研究针对脓毒症患儿均行NETs水平检测，结果显示，脓毒症组NETs水平明显高于健康组（P<0.05），且脓毒症严重患儿的NETs水平明显高于一般患儿（P<0.05），提示应用NETs水平检测可有效筛查出脓毒症患儿并可对其病情程度进行有效鉴别。NETs可利用物理屏障，降解病毒毒力因子，于DNA网状结构上镶嵌毒性颗粒蛋白，对病原体起到绑定作用，进而有效控制感染扩散情况，降低机体组织产生各种继发性损伤，对真菌、革兰阳性或阴性菌等均可起到同样效果［15-16］。

本研究数据，入院第1天、入院第7天，感染期患儿NETs水平明显高于感染消散期患儿（均P<0.05），表明NETs水平检测可鉴别不同时期患儿，明确患儿病情。同时，本研究数据，死亡者NETs水平明显高于存活者（P<0.05），证实NETs水平检测可用于判定预后情况。在脓毒症早期，NETs虽可限制病原菌增殖，对机体产生保护作用，但随病情进展，NETs释放较多，可对血小板聚集造成一定刺激，进而可启动凝血过程，引发弥散性血管内凝血，加重机体损伤。NETs对血管内皮造成的破坏，可增加血管通透性，进一步加重组织水平，对组织正常氧化造成严重影响，进而可促进器官功能衰竭，降低脓毒症患儿预后［17］。Spearman分析结果显示，NETs水平和感染期、预后呈明显的正相关（均P<0.05），可见NETs水平和不同时期、预后具有关联性。NETs是一把双刃剑，一方面在清除病原菌上存在关键作用，可有效延长患儿生存周期，但另一方面NETs所分泌的高迁移率族蛋白1，可诱导巨噬细胞走向凋亡，进而可影响其与中性粒细胞联系，促进炎性反应，加强组织损伤，诱导血栓生成，最终加重病情［18］。而依据脓毒症患儿治疗期间NETs水平高低变化，可在一定程度上反映患儿病情变化，为临床医生治疗脓毒症提供有力参考资料，丰富脓毒症研究数据。

综上所述，在脓毒症患儿治疗期间及时监测NETs水平可鉴别病情时期，依照NETs水平变化趋势可明确治疗方案的有效性，便于临床医生及时调整用药方案，提高临床疗效，且NETs水平检测还可对预后转归风险进行预判，予以个体化预防措施，应用价值较高。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突