盐酸头孢甲肟原料及制剂聚合物杂质的分析方法

王利沙

摘要：目的：分析盐酸头孢甲肟原料及制剂聚合物杂质的方法。方法：运用高浓度溶液降解法制备盐酸头孢甲肟降解溶液，用高效凝胶色谱法（TSK G2000 SWxl）、柱切换-LC/MS法为盐酸头孢甲肟降解溶液聚合物质杂质进行分离，并对结构进行鉴定，评判高效凝胶色谱法分离聚合物杂质的专属性。用Kromasil100-5C18型色谱柱，按水-乙腈-冰醋酸为流动相洗脱梯度，创建盐酸头孢甲肟聚合物的RP-HPLC剖析方法，借助二维色谱法、柱切换-LC/MS法分析专属性，剖析实际供试品。结果：盐酸头孢甲肟降解物判断为盐酸头孢甲肟脱第3位侧链二聚体水解物。高效凝胶色谱法对盐酸头孢甲肟聚合物杂质在分离时，容易遭受小分子杂质影响，定量准确性容易受到影响。RP-HPLC法对盐酸头孢甲肟聚合物杂质分析时，可测定盐酸头孢甲肟二聚体，具有优良的专属性。结论：高效凝胶色谱法无法科学质控盐酸头孢甲肟聚合物杂质，创建反相色谱法剖析盐酸头孢甲肟聚合物杂质具有优良的专属性，可用盐酸头孢甲肟降解溶液作为聚合物杂质系统适用性溶液。

关键词：盐酸头孢甲肟原料;制剂聚合物;杂质

【中图分类号】 R97 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）04--01

β-内酰胺类抗生素内源性聚合物杂质易诱发过敏反应，人们用药安全备受威胁，这类杂质会在运输、存储期间出现，药物安全备受影响，需对β-内酰胺类抗生素聚合物杂质科学控制。葡聚糖凝胶G10（G10）色谱法、高效液相色谱法（HPSEC法）等均可在聚合物杂质质控应用。聚合物分析技术发展下，聚合物质控理念渐渐由控制聚合物总量发展向精准控制指针性聚合物杂质，盐酸头孢甲肟是第三代半合成头孢菌素，主要用在治疗敏感菌引起的肝胆系统位置的感染[1]。我国药典最早采用G10凝胶色谱法开展聚合物杂质控制，收载该品种，聚合物杂质难以得到科学控制，未对其进行控制。葡聚糖凝胶G10系统可有效分析聚合物杂质，应用期间渐渐出柱效低下，分离时间长，分离度不佳，容易遭受药物辅料影响。HPSEC法即传统葡聚糖凝胶G10系统升级技术，科学解决G10色谱系统柱效低下，但是这种方式分离聚合物杂质峰受极性小分子杂质影响较大，测定的聚合物杂质含量较高，专属性受影响较大。RP-HPLC法主要是测定药物含量，研究要点是分析聚合物。前期研究发现：用RP-HPLC法对各类抗生素的聚合物杂质展开分析，了解不同药物指针性聚合物物质，创建RP-HPLC法对聚合物杂质进行分析[2]。本研究中，用二维液相色谱法（2D-HPLC）、柱切换（LC/MSn）法研究HPSEC法分离聚合物杂质的专属性。分析创建RP-HPLC法质控聚合物杂质，对聚合物整体的含量进行控制。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 HPSEC法

色谱柱：TSK-gel G2000SWxl;流动相：A相是磷酸盐缓冲液（pH 7.0），B相是乙腈，A-B（85：15）;流速0.8ml·min-1;检测波长：231nm;柱温：30℃;进样量：20μL。稀释溶液：流动相A;供试品溶液质量浓度：3.0mg·mL-1。聚合物杂质的分析采用HPSEC法。

1.2 RP-HPLC法

色谱柱：Kromasil 100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：A相是水-乙腈-冰醋酸（93：7：1.7），B相是冰醋酸-乙腈（100：17），梯度洗脱：0-10.0minA相是100.0%，10.0-40.0minA相降低为0%，50.0-60.0min A相保持100%。流速1.0mL·min-1。柱温：30℃;检测波长：254nm。用于对盐酸头孢甲肟原料、制剂指针性聚合物杂质进行剖析。

1.3 2D-HPLC法

色谱系統I和HPSEC法相同，色谱系统2与RP-HPLC法相同。切换程序：①设置切换阀为A位置，用色谱系统1分离供试品，用色谱系统2预平衡RP-C18色谱柱;②色谱系统1分离的目标杂质出峰后，设置切换饭为B位置。③用色谱系统2将柱子和定量环中目标杂质洗脱到第2根色谱柱，用色谱系统2分离分析。利用HPSEC系统分离弱保留值杂质于RP-HPLC色谱系统定位。

1.4 柱切换-LC/MSn法

色谱系统5，与RP-HPLC色谱系统。柱温30℃，流速0.5mL·min-1。切换阀：六通阀A、B;切换用定量环体积：500μL。因创建的聚合物分析用RP-HPLC法用流动相所含的缓冲盐为挥发性缓冲盐，直接用在LC/MS剖析，直接用于弱保留值杂质的脱盐处理，开展质谱定性分析。

1.5 溶液配制

盐酸头孢甲肟降解溶液：精密称取盐酸头孢甲肟原料约75mg，放置在25mL量瓶中，加入0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液2mL溶解后，用水稀释至刻度，摇晃均匀，室温下置放12h，即大约3mg·mL-1。

盐酸头孢甲肟原料供试品溶液：精密称取盐酸头孢甲肟原料约75mg，放置在25mg量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇晃均匀，制成质量浓度3mg·mL-1溶液。

盐酸头孢甲肟原料对照溶液：精密量取盐酸头孢甲肟原料供试品溶液1mL，放置在100mL量瓶中，用水稀释到刻度，摇晃均匀，制成质量浓度为30μL·mL-1溶液。

注射用盐酸头孢甲肟溶液：精密称取注射用盐酸头孢甲肟适量（相当于盐酸头孢甲肟75mg），放置在25mg量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇晃均匀，制成质量浓度为3mg·mL-1溶液。

注射盐酸头孢甲肟对照溶液：精密量取注射用盐酸头孢甲肟供试品溶液1mL，放置100mL量瓶内，用水稀释到刻度，摇晃均匀，制成质量浓度为30μg·mL-1溶液。

2 结果

2.1 高效凝胶色谱法分离杂质

盐酸头孢甲肟降解溶液，用HPSEC法進行分析，结果在盐酸头孢甲肟主峰前分离获取弱保留值杂质HPSEC，后用柱切换-LC/MS法推动各组分化学结构，推定杂质结构，杂质归属见表1。

2.2 HPSEC-1

用柱切换-LC/MS法于弱保留值杂质HPSEC-1中分离取得2个未知杂质，命名为HPSEC-1a、HPSEC-1b。

3 讨论

柱切换-LC/MS法剖析头孢甲肟降解溶液数据得出：盐酸头孢甲肟降解溶液中所含有的各结构位置小分子杂质，未出现三聚体与较高聚合态杂质。聚合物杂质均与头孢甲肟主峰前出来，表示HPSEC法可分离聚合物杂质，但降解浓溶液中存在小分子，HPSEC色谱系统难以科学分离聚合物，聚合物杂质的含量准确性会受到影响[3]。所以，HPSEC法剖析聚合物杂质方式专属性差。

用RP-HPLC法对盐酸头孢甲肟原料和注射剂的聚合物含量的分析，用头孢甲肟脱四氮唑二聚体充当指针性聚合物杂质，采用对照法对聚合物的含量进行计算，数据展现，盐酸头孢甲肟原料聚合物含量为0.08%，制剂聚合物含量为0.16%，明显比HPSEC法低，两者差异是因HPSEC法分离的弱保留值杂质中含有小分子杂质导致，可能和其他不同原理技术定量有关系，需逐步证明[4-5]。

综上所述，本研究采用不同方法等现代色谱分析方式建立聚合物的测定方法，结果表明HPSEC法对盐酸头孢甲肟原料和制剂聚合物杂质分析专属性不佳，RP-HPLC 法对盐酸头孢甲肟聚合物杂质分析灵敏度较高，且具有较强专属性，可科学质控聚合物。

参考文献：

[1]夏佳，席时东.UPLC测定盐酸头孢甲肟原料药及注射剂的有关物质[J].中国现代应用药学，2019，36（22）：2769-2772.

[2]李进姚.盐酸头孢甲肟原料及制剂的聚合物杂质分析[J].药物分析杂志，2021， 41（1）：11.

[3]刘玲，陈博，刘曈.盐酸头孢甲肟无菌粉结晶工艺优化[J].化学与生物工程，2018， 35（8）：3.

[4]董晓松.呋喃妥因联合头孢甲肟治疗儿童复发性尿路感染的临床研究[J].现代药物与临床，2021，36（9）：1940-1943.

[5]夏佳，席时东.UPLC测定盐酸头孢甲肟原料药及注射剂的有关物质[J].中国现代应用药学，2019，36（22）：2769-2772.

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