血清miR-92a-1-5p及miR-92a-2-5p表达水平与老年卒中后抑郁的关系

刘贤秀，韩莎莎，姜艳平

(胶州中心医院康复医学科，山东 青岛 266300)

卒中是一种急性脑血管疾病，有部分患者在治疗后恢复期出现抑郁症[1]。据统计[2]，卒中后抑郁在卒中后1个月的发病率为30%～50%，严重影响患者神经功能恢复。微小核糖核酸-92a-1-5p(micro-ribonucleic acid-92a-1-5p，miR-92a-1-5p)和miR-92a-2-5p均是微小核糖核酸(micro-ribonucleic acid，miRNA)家族成员，有研究显示[3，4]，miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p在抑郁症患者外周血血清中存在异常表达。但血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达是否与卒中后患者合并抑郁的发生相关尚不清楚。鉴于此，本研究选取129例老年卒中患者和110名健康体检者探讨血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达与老年卒中后抑郁的关系，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择胶州中心医院2018年2月至2020年10月收治的129例老年卒中患者为研究组，另选取同期110名健康体检者为对照组。研究组男性84例，女性45例；年龄61～78(69.16±5.85)岁；体质量指数16.3～27.4(23.12±4.22)kg/m2；美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health stroke scale，NIHSS)评分9～15(12.26±1.71)分；卒中类型：出血性卒中18例，缺血性卒中111例；合并症：高血压47例，糖尿病58例，高脂血症29例；病变部位：枕叶11例，顶叶31例，颞叶17例，额叶33例，放射冠42例，基底节55例；左额病变41例，右额病变94例。对照组男性71例，女性39例，年龄61～77(68.82±5.81)岁；体质量指数18.6～24.8(22.79±4.92)kg/m2。2组患者性别、年龄、体质量指数等一般资料比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。

纳入标准：(1)研究组均符合卒中诊断标准[5]，且经头颅磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)或电子计算机断层扫描(computed tomography，CT)检查证实；(2)研究组均为首次发病、单侧病变，且NIHSS评分[6]>8分；(3)年龄>60岁；(4)均知情同意。

排除标准：(1)既往抑郁症史；(2)合并免疫系统、血液系统疾病；(3)失语、痴呆等无法配合检查者；(4)合并恶性肿瘤；(5)伴严重心、肝、肾、肺、内分泌等系统疾病。

1.2 方法

血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测，对照组于体检当天检测，研究组于入院后第2天、入院后1个月分别进行检测。2组患者均于清晨抽取空腹静脉血4 ml，采用Trizol法提取总RNA，以miRNA逆转录试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司，货号：MR101-01)将RNA逆转录为miRNA。反应条件为：37 ℃逆转录反应15 min，98 ℃逆转录酶失活反应5 min，产物于-20 ℃保存。采用TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]对miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p进行扩增。反应流程：95℃反应10 s，55℃反应30 s，72℃反应20 s，共进行40个循环。以U6为内参基因，采用2-△△Ct法计算miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p的相对表达量，其中△Ct=Ct(miRNA)-Ct(U6)。PCR反应引物序列详见表1。

表1 PCR反应引物序列

根据《脑卒中诊疗手册》中相关标准[7]，采用对应药物控制老年卒中患者的血脂、血糖、血压，并进行脑保护及适量的康复运动。治疗期间每隔7 d应用汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale-17，HAMD-17)[8]对患者进行评分，根据《中国卒中后抑郁障碍规范化诊疗指南》[9]中相关标准，对入院后1个月内合并抑郁的患者进行抗抑郁治疗。将入院后1个月内HAMD-17分数≥8分的患者记为合并抑郁患者，将HAMD-17分数<8分的患者记为未合并抑郁患者。

总结可能影响老年卒中患者合并抑郁的因素，记为自变量[10，11]，将老年卒中患者是否合并抑郁记为因变量。对老年卒中患者血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达与合并抑郁的关系进行分析。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 2组患者入院后血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达水平比较

研究组患者入院后第2天及入院后1个月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均明显高于对照组；研究组患者入院后1个月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均明显低于入院后第2天，差异均有统计学意义(P<0.05；表2)。

表2 2组患者入院后血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达水平比较

2.2 抑郁组与无抑郁组患者入院后血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达水平比较

研究组患者入院后1个月内有49例合并抑郁(抑郁组)，80例患者未合并抑郁(无抑郁组)。

抑郁组患者入院后第2天和入院后1个月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均明显高于无抑郁组患者；2组患者入院后1个月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均明显低于入院后第2天，差异均有统计学意义(均P<0.05；表3)。

表3 抑郁组与无抑郁组患者入院后血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平比较

2.3 入院后第2天血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达水平与老年卒中后抑郁的关系

抑郁组患者女性占比、NIHSS评分、基底节病变占比、左额病变占比、文化程度为高中以上占比、家庭支持度、血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达水平均高于无抑郁组，差异均有统计学意义(P<0.05，表4)；logistic多元回归分析结果显示，上述因素均为老年卒中患者合并抑郁的危险因素(P<0.05；表5)。

表4 老年卒中后抑郁组和无抑郁组可能影响因素比较

表5 老年卒中后抑郁危险因素的多因素logistic回归分析

3 讨 论

卒中是老年人常见的一种疾病，发病机制较为复杂，加之老年患者常多种基础疾病共存，治疗较为棘手[12]。卒中后患者神经再生减少，大脑突触可塑性失凋，易发生抑郁症[13]。本研究中研究组入院1个月后合并抑郁的发生率为37.98%，稍高于倪婷等[14]报道的31.60%，这可能与本研究中观察对象机体差异有关。老年卒中后抑郁会增加卒中患者的致残率和死亡率，因此，积极探寻影响老年后抑郁的相关因素以指导临床防控工作，对改善老年卒中患者的预后意义重大。

本研究中研究组入院后第2天和入院后1个月，血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均明显高于对照组，且研究组入院后1个月二者表达水平均明显低于入院后第2天(P<0.05)，表明老年卒中患者血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平呈现高表达，且二者表达水平在治疗后降低。miRNA作为一类单链小分子非编码RNA，其性质稳定且对机体细胞的生长、发育、分化等反应极为灵敏，常作为诊断疾病的生物学标志物[15]。相关研究发现[16,17]，miR-92a在调控血管平滑肌细胞增殖和表性转化等方面均具有重要作用。miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p均是miR-92a基因家族的主要成员，当血管受损或血管平滑肌细胞受到生长因子刺激时，可促进细胞外调节蛋白激酶磷酸化增加，进而导致miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达上调，进一步促进脑微血管内皮细胞的损伤和脑微血管平滑肌细胞的增殖及迁移，加快脑微血管粥样硬化病变发展。

本研究中合并抑郁患者入院后第2天和入院后1个月的血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达水平均明显高于未合并抑郁患者，且logistic回归分析证实老年卒中患者入院后第2天二者表达水平均为老年卒中后抑郁的危险因素。miRNA转录后可调节基因表达，在神经元生成和大脑突触可塑性等方面具有重要作用，推测卒中可通过影响miRNA的表达调控抑郁[18]。miR-92a-1-5p是脑发育和神经元分化过程中的关键调节因子，与海马神经元发育及神经元活动变化有关，miR-92a-1-5p高表达可降低抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤2等神经元分化因子的表达，进而参与抑郁发生过程[19]。miR-92a-2-5p可调控细胞脑微血管内皮细胞增殖、分化等多种生命活动，抑制miR-92a-2-5p可调节内皮细胞增殖[20]，进而缓解因缺血缺氧导致的脑微血管内皮细胞死亡，维持海马结构重建，从而改善记忆及认知功能。因此血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平越高，其促进脑微血管内皮细胞死亡的作用越强烈，对患者记忆及认知功能的损害越明显，抑郁程度就越严重，老年卒中后抑郁风险就越大。

本研究结果显示，女性、NIHSS评分升高、基底节病变、左额病变、文化程度为高中以上、家庭支持度降低也均是老年卒中后抑郁的危险因素，与既往报道相符[21-23]，提示应积极控制上述因素以降低老年卒中后抑郁的发生风险。

综上所述，老年卒中患者血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达高，且二者表达在老年卒中后抑郁患者中更高，二者同女性、NIHSS评分升高等也均为老年卒中后抑郁的危险因素。