COX-2、VEGF-c及ERK在舌鳞癌中的表达与病理特征、预后的关系

刘 霞，李 强，陈 勇，赵淑娟，郭荣珍，史炳霞，陈巧力，南桂英，孟召霞，张 冉，张 静

舌癌是口腔最常见的恶性肿瘤，以鳞癌居多。该肿瘤生长速度快、浸润性强、恶性程度高，且淋巴结转移率高，预后较差[1]。环氧化酶(COX)是一种限速酶，包括COX-1与COX-2两个亚型。目前多项研究显示，COX-2除在炎症中发挥重要作用外，还参与了恶性肿瘤的发生、发展[2-3]。血管内皮生长因子-c(VEGF-c)是血管内皮因子重要家族成员之一，在肿瘤淋巴转移中起重要作用，且COX-2在促肿瘤进展过程中，与VEGF-c存在密切联系[4]。胞外信号调节激酶(ERK)是一种保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可通过磷酸化活化转录因子而调控特定基因表达，进而诱导细胞增殖、分化等，并参与细胞的恶性进展程度[5]。为进一步研究COX-2、VEGF-c及ERK与舌鳞癌发展关系，本研究检测了舌鳞癌及癌旁正常组织中上述因子的表达情况，并分析其与舌鳞癌病理特征、预后的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料 收集本院2017年6月—2019年6月收治且经病理确诊的舌鳞癌手术切除标本95例，其中男58例，女37例，年龄32～81(58.24±9.45)岁。病理分期：Ⅰ～Ⅱ期57例，Ⅲ～Ⅳ期38例；淋巴结转移者24例；肿瘤分化程度：高分化39例，中低分化56例。另选取距肿瘤边缘3 cm以上的正常组织作为对照组。

1.2试剂 鼠抗人COX-2、VEGF-c单克隆抗体、ERK多克隆抗体，均由美国Santa Cruz公司提供。链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)免疫组化试剂盒、DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。标本均在手术后立即采集，用10%甲醛溶液固定后，常规脱水石蜡包埋。根据SP染色法对COX-2、VEGF-c及ERK蛋白进行检测，检测过程严格按照说明书进行。一抗阴性对照使用PBS代替。

1.3结果判断标准 COX-2、ERK阳性染色部位定位于细胞浆，VEGF-c定位于细胞核。0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为黄褐色；每张切片取5个高倍视野，无阳性细胞为0分；阳性细胞<10%为1分，阳性细胞10%～50%为2分，阳性细胞50%～75%为3分,阳性细胞≥75%为4分。两类分数相乘总分<3分为阴性。

1.4观察指标 比较2组COX-2、VEGF-c及ERK表达情况及与舌鳞癌临床病理特征的关系。术后对患者进行2年随访，分析生存情况及COX-2、VEGF-c、ERK表达与术后生存时间的关系和患者预后的危险因素。

2 结果

2.1COX-2、VEGF-c及ERK表达情况 舌鳞癌组COX-2、VEGF-c及ERK阳性表达率均显著高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 2组COX-2、VEGF-c及ERK表达情况比较[例(%)]

2.2COX-2、VEGF-c及ERK表达与舌鳞癌病理特征的关系 舌鳞癌有淋巴结转移者COX-2、VEGF-c及ERK阳性表达率显著高于无淋巴结转移者，且病理分期Ⅲ～Ⅳ期者COX-2、VEGF-c阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期者，中低分化者VEGF-c阳性表达率高于高分化者(P<0.01)。见表2。

表2 COX-2、VEGF-c及ERK表达与舌鳞癌病理特征的关系[例(%)]

2.3COX-2、VEGF-c及ERK表达与术后生存的关系 术后对患者进行2年随访。COX-2、VEGF-c及ERK阳性表达患者的2年生存率低于COX-2、VEGF-c及ERK阴性表达者(P<0.05)。见表3。Keplan-meier生存曲线分析显示，COX-2、VEGF-c及ERK阴性表达者生存期较长。见图1～3。

图1 COX-2阳性和阴性表达舌鳞癌患者生存分析

表3 COX-2、VEGF-c及ERK表达与舌鳞癌术后生存的关系[例(%)]

2.4影响舌鳞癌患者预后的多因素Logistic回归分析 肿瘤中低分化、病理分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移及COX-2、VEGF-c、ERK阳性表达是舌鳞癌患者预后的危险因素(P<0.05，P<0.01)。见表4。

表4 影响舌鳞癌患者预后的多因素Logistic回归分析

图2 VEGF-c阳性和阴性表达舌鳞癌患者生存分析

图3 ERK阳性和阴性表达舌鳞癌患者生存分析

3 讨论

舌癌是一种恶性程度较高的口腔肿瘤，占口腔癌30%～50%[6]。目前临床主要根据患者年龄、组织分化程度、浸润深度等因素对患者预后进行评估，但通过上述因素评估舌鳞癌生物学行为存在一定局限性，需从分子水平方面进一步探讨[7-8]。

COX-2属于一种诱导酶,组织损伤或有炎症的情况下，其表达水平会升高[9]。赵文等[10]发现，COX-2水平高低与恶性肿瘤侵袭性、淋巴结转移等关系密切。目前有关COX-2在肿瘤进展过程中的作用机制尚不明确，但认为可能有以下几种原因：可激活致癌物；可诱导、促进肿瘤发生与生长，抑制肿瘤细胞凋亡；促进内皮细胞的新生、迁移及刺激肿瘤血管生成等[11]。COX-2还可促进VEGF-c、TGF-1等因子的生成。

VEGF-c是近年来发现的介导肿瘤淋巴管生成及淋巴结转移的重要因子[12]。已有多项研究表明，VEGF-c与卵巢癌、胰腺癌及乳腺癌等多种恶性疾病的淋巴结转移、预后有着密切的相关性[13]。既往研究表明，多种恶性肿瘤中可检测到ERK的活化[14]。激活的ERK可促进细胞靶蛋白磷酸化，且持续激活的ERK可进入细胞核，激活或灭活其他信号转导通路的关键效应分子及重要的转录因子，调节细胞周期相关因子与凋亡因子的表达，参与细胞生长、分化及凋亡等过程。在口腔癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中ERK高表达[15]。本研究结果显示，舌鳞癌组织中COX-2、VEGF-c及ERK阳性表达率高于癌旁正常组织，并与肿瘤病理分期、淋巴结转移、组织分化程度关系密切，提示COX-2、VEGF-c及ERK表达与舌鳞癌发展有关。在预后方面，COX-2、VEGF-c及ERK阳性表达者2年生存率均低于阴性表达者，且COX-2、VEGF-c及ERK阳性表达是舌鳞癌患者预后的危险因素。表明COX-2、VEGF-c及ERK表达水平均与患者术后生存期及预后呈负相关。推测可能是由于COX-2、VEGF-c及ERK过度表达刺激微淋巴管生成，癌细胞通过脉管间隙侵入脉管系统而导致淋巴结转移，影响患者预后[16]。

综上所述，COX-2、VEGF-c及ERK在舌鳞癌中阳性表达率高，其表达水平与肿瘤病理分期、淋巴结转移、组织分化程度密切相关；同时COX-2、VEGF-c及ERK是舌鳞癌患者预后的危险因素，临床可通过检测上述蛋白表达情况对患者预后进行评估。