离子色谱法测定黄花草木犀中Cl-、NO-3和SO24-的含量*

展建丽，姜 珊，陈穆芝，田树革

（1.新疆师范大学 化学化工学院，新疆 乌鲁木齐830017；2.新疆医科大学 中医学院，新疆 乌鲁木齐830011；3.浙江中医药大学附属第二医院 风湿免疫科，浙江 杭州310005）

草木犀是一年生或两年生草木犀属植物，《藏药标准》、《欧洲药典（第5 部）》中均记载草木犀为豆科植物黄花草木犀[Melilotusofficinalis（Linn.）Pall.]，又被称作野苜蓿，辟汉草。黄花草木犀是草木犀的一种，大多生长在我国西北、华南、东北等地，其具有重要的农用价值和药用价值。在农用方面，黄花草木犀耐盐碱，耐旱，抗寒，抗风沙，贫瘠地方也能生长，生命力非常顽强[1]，在国内早期黄花草木犀大多作为饲料和肥料使用，它的根系极其发达，与大豆植物相似，营养价值与大豆类似，是牧民首选的饲料[2]。在药用方面，黄花草木犀其性味苦、凉，具有清热解毒、消炎、抗炎、镇痛、抑菌、抗肿瘤、改变急性脑缺血等药效[3,4]，用于脾脏病、绞肠痧、白喉、乳蛾等治疗[5]，在国外其药用价值得到较好的开发。日本开发的草木犀流浸片（香豆素酸）已上市使用，黄花草木犀的药用价值有良好的开发应用前景。

黄花草木犀在实际使用过程中大多考虑活性成分，无机阴离子很少被考虑，但无机阴离子在中药考察中也很重要。Cl-能调节植物气孔，维持植物体内pH 平衡，使植物健康生长，NO-3为植物提供氮元素，是蛋白质合成的必要元素，SO24-对植物体内的微生物有抑制作用，为全面分析药品，分析测定无机阴离子可以为全面考察药材的质量价值提供参考。如用离子色谱法测植物、药品和肉制品中的无机阴离子[6-8]。采用离子色谱法快速、便捷、并可同时检测多种阴离子，适用于批量较多的样品检测，为离子检测工作节省大量时间。

本实验采用超声法提取黄花草木犀，用离子色谱法对全草、茎、叶、花4 个不同生长部位同时进行阴离子测定，为黄花草木犀的开发提供基础研究。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

DIONEX ASI 型离子色谱仪（赛默飞世尔（上海） 仪器有限公司）；DIONEX AS22 型离子色谱柱；ME204E 型电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；KQ5200DE 型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

去离子水，KNO3、K2SO4以及KCl 试剂均为分析纯。

1.2 标准溶液的制备

参照国标HJ84-2016，准确称取1.6485g NaCl、1.4792g 无水Na2SO4、1.6304g KNO3分别溶于水中，分别移入1000mL 容量瓶，用水稀释定容至标线，混匀。移转入聚乙烯瓶中贮存。精确移取100mL NaNO3标准储备液、200mL K2SO4标准储备液、200mL KCl标准储备液于1000mL 聚四氟乙烯容量瓶中，加水定容至刻度线，配制100mg·L-1的NO-3、200mg·L-1的SO24-、200mg·L-1的Cl-的混合标准使用液；准确移取1.00、2.00、5.00、10.0、20.0mL 的混合标准使用液至100mL 容量瓶中，加水稀释定容至刻度线，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的Cl-系列溶液；准确移取0.50、1.00、2.50、5.0、10.0mL 的混合标准使用液至100mL 容量瓶中，加水稀释定容至刻度线，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的NO-3系列溶液；准确移取0.50、1.00、2.50、5.00、10.00mL 的混合标准使用液至100mL 容量瓶中，加水稀释定容至刻度线，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的SO24-系列溶液。

1.3 样品溶液制备

参照文献[11-13]制备检测含量，将新鲜的黄花草木犀清洗干净，再用纯水冲洗3 次，置于通风室内阴干，使用电动粉碎机将黄花草木犀的根、茎、叶和全草分别粉碎，将粉碎后的样品过筛（80 目）备用。称取1.00g 样品于50mL 锥形瓶中，加入35mL 去离子水，混匀。超声提取20min，过滤，转移至50mL 的容量瓶中，用去离子水定容至刻度线，混匀，用0.22μm滤膜过滤，离子色谱仪测定。表1 为阴离子色谱峰参考保留时间。

表1 阴离子保留时间Tab.1 Anion retention time

1.4 色谱条件

色谱柱DionexIonPacAS22 型色谱柱（4×250mm）；淋洗条件：采用1.5mmol·L-1的Na2CO3和1.5mmol·L-1的NaHCO3混合溶液；洗脱条件：等度洗脱0～20min；流速：1.2mL·min-1；进样体积：10μL；柱温：室温；抑制性电导检测器。

2 结果与讨论

2.1 离子色谱图

3 种离子混标溶液色谱图见图1；3 种离子全草溶液色谱图见图2。

图1 离子混标色谱图Fig.1 Ionmixed standard chromatogram

图2 样品色谱图Fig.2 Chromatogram of sample

2.2 线性关系和方法检出限

分别吸取不同浓度的离子标准溶液，依次进样测定，以离子峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制3 种阴离子的标准曲线，得出其线性方程、相关系数、检出限，结果见表2。

由表2 可以看出，3 种阴离子测定均在线性范围内，离子色谱法测定黄花草木犀的3 种阴离子具有良好的线性相关性，其线性相关系数分别为0.9993，0.9995，0.9991。

表2 方法线性范围和检出限Tab.2 Results of coefficient and detection limit

2.3 样品的稳定性实验

称取1.0g 药品，按“1.4 项下”方法提取样品，相同色谱条件，测样时间1、2、3、4、5、6h 分别进行测定，结果显示，Cl-、NO-3、SO24-的峰面积RSD 值均小于5%，表明样品在6h 内稳定性良好。

2.4 样品的精密度实验

称取1.00g 药品，将药品“按1.2”色谱条件连续平行测定6 次，样品中Cl-、NO-3、SO24-的峰面积RSD值分别为2.00%、3.89%、2.14%，表明仪器精密度良好，结果见表3。

表3 样品含量精密度实验Tab.3 Precision test of sample content

2.5 样品的加标回收率

称取3 份黄花草木犀样品2.0g，按“1.4 项下”实验方法样品溶液制备，分别加入Cl-、NO-3、SO24-的混标溶液，回收率在90.00%～105.00%之间，RSD 为1.7%，结果见表4。

表4 样品加标回收率实验Tab.4 Recovery of samples with added standard

2.6 样品不同生长部位的离子含量测定

分别称取对不同生长部位的黄花草木犀2.0g，按“1.4 项下”方法制备样品溶液，微滤膜过滤后，测全草、茎、叶、花的Cl-、NO-3、SO24-含量，结果见表5。

由表5 可见，叶的Cl-、NO-3、SO24-含量最高，全草和茎的Cl-、NO-3、SO24-含量比较低。

表5 黄花草木犀不同部位的离子含量Tab.5 Ion content of different parts of herba botanica

3 结论

本实验采用超声法提取黄花草木犀，操作简便，提取率高，采用离子色谱法测定黄花草木犀中的Cl-，NO-3和SO24-的含量。应用DionexIonPacAS22 型色谱柱适合快速分析常规离子，短时间内能快速实现简单基质的离子分离和无机阴离子的等度分析。抑制性电导检测器，该方法灵敏度高，快速、简洁、分离效果好，16min 内完成分析，可以用于该药品的批量检测。