葫芦药材质量标准研究

●侯文欣 魏红立 徐利亚 孟宪磊 吕勤芝（邢台市食品药品检验所 河北 邢台 054000）

葫芦为葫芦科植物瓢葫芦Lagenaria Siceraria（Molina）Standl.var.depressa（Ser.）Hara，药用部分是干燥果皮[1]，具有利水、通淋、消肿的功效，用于面目浮肿、大腹水肿等症，常与猪苓、茯苓、泽泻等药同用[2-4]。2013年，河北省食品药品监督管理局修订2003 年版《河北省中药饮片炮制规范》，将葫芦列为新增补药材品种。

葫芦含有莽草酸，测定其含量，并按照《中国药典》（2020年版）四部通则方法测定水分、总灰分，以期为有效控制该药材质量提供依据。

1 材料

1.1 仪器

高效液相系统（Waters e2695，美国waters公司），电子天平（METTLER TOLEDO MS205DU，瑞士梅特勒－托利多集团），超声仪（KQ-600DE，昆山市超声仪器有限公司），显微镜（BX53 OLYMPUS），电热恒温干燥箱（202-1，北京市永光明医疗仪器有限公司），箱式电阻炉（SX-4-10，北京市永光明医疗仪器有限公司），色谱柱（Agilent ZORBAX SB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm）。

1.2 供试材料及试剂

莽草酸（批号：130067-201508，上海奈启生物科技有限公司），葫芦对照药材（201509，上海奈启生物科技有限公司），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。共收集了10批葫芦样品，经河北省药品检验研究院鉴定均为葫芦。具体信息，见表1。

2 方法

2.1 性状

检查10组样本，并参考《中国药典》（1977年版）、《山东省中药材标准》（2002年版）等材料的描绘作出叙述[1，4]。

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1 样品溶液的制备取样品粉末2.5 g，加乙醇20 mL，超声处理15 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照药材溶液的制备取葫芦对照药材2 g， 同法制成对照药材溶液。

2.2.3 薄层色谱方法按照《中国药典》（2020年版）薄层色谱法（通则0502）实验。吸取上述2种溶液各5μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.3 水分和总灰分测定

2.3.1 水分本研究增加了葫芦水分检查，按《中国药典》（2020年版）四部通则0832第二法进行测定。

2.3.2 总灰分为了控制可能带入的泥沙等杂质，确保药材质量，本研究增加了灰分检查，按《中国药典》（2020年版）四部通则2302进行测定。

2.4 莽草酸含量测定

莽草酸是自然界中存在的一种重要的有机酸，具有较好的抗炎、镇痛作用。莽草酸为治疗禽流感特效药物“达菲”的重要原料，也是一些抗病毒和抗癌药物的中间体。有报道称葫芦含有莽草酸、葫芦素B，但经试验未从葫芦中提取出葫芦素B，所以选择测定莽草酸[5-13]。

2.4.1 色谱条件及系统适应性试验色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-1%磷酸溶液（3∶97）；检测波长：210 nm；柱温30℃，理论板数按莽草酸峰计不得少于3000。

2.4.2 对照品溶液的制备精密称取莽草酸对照品（批号：130067—201508，上海奈启生物科技有限公司）9.78 mg，置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为储备液。再精密吸取5 mL置于10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，制成1 mL含48.9 µg莽草酸的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备取样品粉末（过三号筛）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水100 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率600 W，频率40 kHz）60 min，放冷再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液50 mL，蒸至近干，转移至5 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀即得。

2.4.4 专属性考察分别取对照品溶液和供试品溶液各10 µL在“2.4.1”项色谱条件 下进样测定，记录色谱图，结果见图1。进行了峰纯度测试，结果见图2。结果显示，样品色谱峰的保留时间与对照品一致，分离度＞1.5，而且达到基线分离，表明该方法专属性良好。

图1 莽草酸对照品（A）和样品（B）HPLC色谱图

图2 莽草酸对照品（C）和样品（D）峰纯度图

2.4.5 线性关系考察精密吸取“2.4.2”项对照品溶液1，2，5，10，15，20 μL，分别按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。在“2.4.1”项色谱条件下进样测定。以色谱峰峰面积Y为纵坐标，以对照品浓度X（μg）为横坐标，进行线性回归，得线性方程：Y=2.995×106X-1.038×105，R2=0.999 99，在0.0489～0.9780 μg范围内线性关系良好。

2.4.6 精密度试验精密吸取“2.4.2”项对照品溶液10 μL，在“2.4.1”色谱条件下连续进样6次，莽草酸色谱峰面积的RSD值为0.21%。表明用该方法测定莽草酸精密度良好。

2.4.7 稳定性试验取药材粉末（1号）约1.0 g，精密称定，按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h在“2.4.1”色谱条件下进样，计算出莽草酸色谱峰面积的RSD为0.1%。表明样品溶液在24 h内稳定。

2.4.8 重复性试验称取葫芦药材粉末（1号）6份，各约1 g，精密称定，按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液，在“2.4.1”色谱条件下进样测定，结果莽草酸含量RSD为0.58%。表明本方法重复性良好，适用于葫芦中莽草酸的提取及含量的测定。

2.4.9 加样回收试验取已知含莽草酸为0.053% 的样品粉末6份，各约0.5 g，精密称定。精密称取莽草酸对照品9.78 mg置于100 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，作为标加溶液，分别精密吸取2 mL此溶液置上述6个锥形瓶中。按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液，进行测定，计算回收率，见表2。

表2 莽草酸回收率

3 结果

3.1 性状

本品呈瓢状，多碎成不规则的块状，厚0.5～1.5 cm。外表面黄棕色，较光滑；内表面黄白色或灰黄色，松软。体轻，质硬，断面黄白色。气微，味淡[1，4]。结果10组样品性状均合格。

3.2 薄层色谱

按照薄层色谱条件试验，10批样品薄层色谱图，见图3。

图 3 10批样品薄层色谱图

3.3 水分和总灰分测定

水分和总灰分测定结果，见表3。

表3 葫芦水分、总灰分测定结果 单位：%

3.4 样品莽草酸含量测定

取各批样品粉末 0.2 g，按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液，每个样品平行做2份，并按“2.4.1”色谱条件进行测定，以干燥品计算各供试品中莽草酸的含量，结果见表4。

表4 莽草酸含量测定结果

4 结论与讨论

通过采用薄层色谱法对葫芦饮片进行定性分析，根据药典方法测定葫芦中水分、灰分含量，采用HPLC法测定莽草酸含量。结果表明，葫芦饮片薄层色谱斑点清晰明显，10批葫芦样品的水分含量为7.2%～9.4%，总灰分含量为3.8%～10.0%,莽草酸含量为0.002%～0.043%。

依据上述试验结果， 建议增加水分、总灰分检查项、薄层色谱鉴别、含量测定项，评价葫芦饮片的质量标准；增加水分不得超过 12.0%，总灰分不得超过12.0%，按干燥品计算含莽草酸不得少于0.010%这三项检测指标，以期为葫芦药材质量标准的制定及资源的开发利用提供依据。