分析水质对CA及生化免疫检测的影响

魏 晟

（福建中医药大学附属第二人民医院，福建 福州 350003）

水在检验分析过程中扮演着关键但又容易被忽视的角色，在临床生化分析等检测过程中，有时作为反应的媒质、载体，有时作为溶剂或稀释液。水质的好坏直接影响临床检验分析的结果，水质纯度影响因素贯穿整个检验分析过程。目前，各大医院的检验实验室大多采用独立的纯水供水系统，即根据反渗原理对民用自来水进行二次处理。本研究结合日常工作中遇到的案例，讨论分析水质分析故障。

1 Ca校准失败案例分析

1.1 故障描述

福建中医药大学附属第二人民医院新装机cobas c 311仪器，替换之前的生化仪器。水机为GN-RO-60反渗透去离子制水机，故障出现半月前换了新滤芯。在装机培训过程中执行项目校准时，Ca校准出现“Sens.E”报警。重复校准，问题依旧，其他项目校准通过，如图1所示。

图1 失败的Ca校准结果

1.2 问题分析和处理

查看校准结果，显示S1、S2吸光度差异过小，导致“Sens.E”报警，校准失败。与正常校准结果相比，S1和S2主副波长吸光度差值均明显偏高，但是主波长相差不大，S1为试剂+水，S2为c.f.a.s校准品（浓度为2.78 mmol/L）[1]。

首先，如果是校准品有问题，其他项目也会校准失败，因此可以初步排除。其次，考虑试剂本身是否有失效或污染的可能，但由于使用的是新开封试剂，试剂本身有问题的可能性不大[2]。最后怀疑科室系统水存在问题，于是对水质问题进行排查跟进。

1.3 寻根溯源

首先，检查水机制水情况。由于水机显示屏故障，无法读取系统水的电导率。其次，结合现场情况分析一切可能出现的原因，如加样系统、反应系统、试剂、操作、项目参数、校准品、系统水等。最后，分析校准结果。失败校准结果的吸光度S1和S2在﹣10 000以下，与正常校准结果相差很大，并且表现出两者差异过小的问题，说明反应体系存在干扰物质，导致S1和S2间吸光度变化过小，灵敏度下降。Ca检测试剂的反应原理：Ca2+与钙螯合剂（NM-BAPTA Tetrasodium Salt）在碱性条件下反应生成有色物质，在340 nm处有吸收峰，副波长376 nm，再加入乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）竞争结合Ca2+，使340 nm处的吸收减弱，检测340 nm波长的吸光度变化，达到检测Ca2+浓度的目的[3]。

如图2所示，罗氏的Ca项目为浓缩试剂，加入20 μL R1试剂后会打入160 μL系统水进行体积稀释，综合项目特性和校准结果读点分析，继续锁定外源性干扰物质对试剂造成了污染，导致试剂反应性下降。此时，最大的怀疑对象为系统水。

1.4 分析处理

验证系统水异常的猜测成为解决问题的关键，采集系统水样本，用离子检测仪器检测，同时使用娃哈哈纯净水作为对照样本进行检测，结果如图3所示。

图3 水质检测对比结果

结果显示，系统水的Ca2+浓度为0.28 mmol/L，几乎是娃哈哈的4倍。如果进一步证实该体系中存在高浓度的Ca2+，可以解释校准结果产生“Sens.E”报警的原因。为了验证这个猜想，根据项目加样量设计了系统水或娃哈哈纯净水分别与试剂发生反应的实验，如图4所示。

图4 Ca模拟仪器检测试剂混合实验

系统水与娃哈哈纯净水分别混合Ca试剂实验结果显示出明显的差异，由此可推测系统水Ca2+浓度超标，导致试剂在稀释步骤被污染，造成校准失败。需要注意的是，已验证过娃哈哈纯净水符合实验室生化用水质量要求。实验数据证明，罗氏Ca检测方法具有试剂稳定性好、不受mg2+干扰、不含有毒物质等特点，效果优于其他方法。浓缩试剂增加了试剂的测试数，避免频繁更换，便于操作。Ca检测的系统水占总反应体系的78.81%，所以对水质的要求比较高[4]。

最后进行水机检查。水机入水除沙管长时间未清洁导致泥沙过大，影响过滤效果，更换耗材并充分放出陈水后，再次执行Ca校准，结果通过，并对制水机显示器进行了维修。

2 部分生化项目失控

2.1 故障描述

据反映，质控时有3个项目失控，执行两点校准均失败，分别是甘油三酯（Triglyceride，TG）、总胆固醇（Total Cholesterol，CHOL）、尿酸（Uric Acid，UA）更换校准品，重新校准依然失败。其他项目质控正常，未进行校准。校准失败时提示“SENS.E”和“＞ABS”，怀疑试剂出现问题，鉴于前一天标本检测一切正常，建议检查试剂并尝试使用新试剂再次校准，结果并无改善。现场查看UA2校准结果，发现“＞ABS”报警。水空白和Cfas的吸光度均超过5万。查看校准记录发现，TG和CHOL也存在同样的问题。

分析反应过程，第一点水空白和第二点Cfas反应中均受到了干扰。检查这3个项目的试剂，分别与冰箱里的试剂做颜色比较，没有发现明显异常。考虑到试剂出现问题的可能性不大，初步怀疑反应过程中有干扰物质进入比色杯，进而产生影响。但反应杯里只有校准品和试剂，查看试剂参数（见表1～3），发现这3项均是浓缩试剂，通过系统水稀释后进行反应检测。

表1 cobas c 701/702测试定义

表2 cobas c 701/702测试定义

续表2

表3 cobas c 701/702分析仪—测试定义—血清、血浆

2.2 分析过程

寻找从试剂舱换下来的TG试剂做模拟实验，当样品杯子中为桶装纯净水与TG试剂的混合液时，对比杯子中为实验室系统水与TG试剂的混合液。等待10 s左右，对比杯子中的混合液变为明显的粉红色。

怀疑实验室系统水被污染，检测仪器终端和实验室蓄水桶电导率为38.0 μS/cm。前往水机房检测发现，实验室使用的去离子水由肾病科透析室提供，在检验科加装一个滤芯加强净化后使用[4]。检测透析室水质电导率为0.2 μS/cm，怀疑是检验科自加的滤芯有问题。实验室水质检测系统的水质只能代表过滤前的水质，对于过滤后的实验室用水水质情况并不了解，建议科室将水质监测装置安装在滤芯和蓄水桶之间，这样才能真正反映实验室用水的水质情况。

找到问题出现的原因后开始处理，短接滤芯，清洗蓄水桶和仪器水桶，做机械检查，更换仪器管路内陈旧水，清洗反应杯，重新校准并监测质控，一切正常。

2.3 拓展讨论

在分析问题的过程中又产生新的疑问点，因为C701试剂大部分是浓缩试剂，为什么仅这3个项目出现了问题？3个项目的反应原理如下。

（1）CHOL反应原理：

（2）TRIGL反应原理：

（3）UA2反应原理：

从反应原理不难看出，3个项目均为Trinder反应，检测特性是通过生成中间产物H2O2，与试剂中的4-氨基比林分别与不同的色素原物质（供氢体）在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺类显色物质。初步判断水中的干扰物质类似于H2O2物质[5]。但又有疑问产生：本实验室使用的HDL-C和LDL-C也是Trinder反应，为什么没有受到影响？通过查阅相关说明书后得知，因为HDL-C和LDL-C不是浓缩试剂，不需要系统水稀释使用。因此，建议科室对滤芯内物质做微生物培养，怀疑是乳酸菌类微生物产生了H2O2类物质。