HPIP在子宫内膜癌中高表达及其在生存预后分析中的意义

王榆平 思美丽 孙小霞 郭玉琳

全世界女性癌症中发病率居于第6位的是子宫内膜癌，其中美国和欧洲等发达国家和地区的发病率最高。许多国家子宫内膜癌的发病率逐年增加，并且子宫内膜癌的5年生存率逐渐下降，目前还没有完善的子宫内膜癌筛查项目[1-3]。子宫内膜癌患者早期无明显症状，目前缺乏早期诊断特异性生物标记物。所以探讨新的生物标记物对子宫内膜癌早发现、早诊断和评估预后尤为重要。

造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白(Hematopoietic pre-B-cell leukemia transcription factor interacting protein，HPIP)最初是通过cDNA文库进行酵母双杂交筛选的，HPIP蛋白是一个近年来新发现的致癌基因，在人类许多恶性肿瘤中是重要的分子生物标志物，例如肺小细胞癌[4]、卵巢癌[5-6]、宫颈癌[7]、结直肠癌[8]、胃癌[9]、头颈部鳞癌[10]等。然而HPIP蛋白在子宫正常内膜组织、子宫内膜非典型增生组织和子宫内膜癌组织中的表达及临床研究仍较少。因此本研究检测HPIP在子宫正常内膜组织、子宫内膜非典型增生组织和子宫内膜癌组织中的表达情况，分析HPIP在子宫内膜癌组织中的表达程度与其临床病理特征及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 实验标本

收集2013年1月—2015年1月在榆林市第二医院因子宫肌瘤行子宫切除的子宫正常内膜组织样本26例；因异常子宫出血行诊刮病理证实子宫内膜非典型增生组织样本30例；诊断为子宫内膜癌的病理组织样本122例。所有诊断为子宫内膜癌的患者术前都没有接受过任何放化疗治疗，均第一次入院接受了手术治疗，术后根据病理情况给予放疗和化疗治疗。

122例病例均完成随访，随访时间从患者手术时间开始截止到2020年1月。无病生存期(Disease free survival，DFS)是从患者手术时间至疾病复发时间；总生存期(Overall survival，OS)是从患者手术时间至死亡或随访截止时间。手术病理分期和组织学分级采用2009年国际妇产科联盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO)分期标准执行。患者的临床特征和病理特征包括诊断年龄、组织学分级、病理类型、淋巴结转移、血清学CA125和FIGO分期。

1.2 实验试剂

抗PBXIP1抗体(ab84752)购自Abcam公司；PV-6001山羊抗兔IgG/HRP聚合物和二氨基联苯胺(DAB)显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 实验方法

采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(Strepavidin peroxidase，SP)免疫组化染色法检测HPIP在子宫正常内膜组织、子宫内膜非典型增生组织和子宫内膜癌组织中的表达情况，简要步骤如下：石蜡病理组织切片、脱蜡水化、洗片、阻断内源性过氧化物酶抗原修复、滴加一抗(稀释比例1∶200)完全覆盖组织，阴性对照滴加蒸馏水、滴加二抗(稀释比例1∶1)、DAB显色、苏木素复染、脱水干燥、中性树胶封片、烤干。

1.4 实验结果评价标准

全部染色组织切片由两位病理科主任医生在双盲法下独立判断。使用染色强度如下[6]：0(无染色)；1(弱染色)；2(中度染色)；3(强染色)。染色百分比评分如下：0(≤5%阳性细胞)；1(6%～25%阳性细胞)；2(26%～50%阳性细胞)；3(51%～75%阳性细胞)；4(>75%阳性细胞)。评分为两者分数相乘，对于HPIP的表达评分，采取评分0～2分为阴性，3～12分为阳性。

1.5 统计学分析

运用SPSS 26.0软件进行统计分析，子宫内膜癌患者的HPIP蛋白表达与临床病理资料的关系采用卡方检验和连续校正卡方检验。应用Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析子宫内膜癌患者HPIP蛋白表达情况及临床病理资料与DFS和OS的关联性预后，预后影响因素分析使用Cox回归分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPIP在子宫正常内膜组织、子宫内膜非典型增生组织和子宫内膜癌组织中的表达情况

免疫组化实验显示HPIP在子宫正常内膜组织、子宫内膜非典型增生组织和子宫内膜癌组织的表达位于细胞浆中，呈棕黄色(图1)。子宫正常内膜组织中HPIP的阳性表达率为11.54%(3/26)，子宫内膜非典型增生组织中HPIP的阳性表达率为16.67%(5/30)，子宫内膜癌组织中HPIP的阳性表达率为63.11%(77/122)，HPIP在子宫内膜癌组织中表达显著高于子宫正常内膜组织和子宫内膜非典型增生组织，差异有统计学意义(χ2=37.500，P<0.001)。

图1 HPIP在子宫正常内膜组织、子宫内膜非典型增生组织和子宫内膜癌组织中的免疫组化结果Figure 1 The expression of HPIP in normal endometrial, endometrial atypical hyperlasia and endometrial cancer tissuesNote：A and B.The low expression of HPIP in normal endometrial tissues(200× & 400×)；C and D.The low expression of HPIP in endometrial atypical hyperplasia tissues(200× & 400×)；E and F.The high expression of HPIP in endometrial cancer tissues(200× & 400×).

2.2 HPIP在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理特征的关系

HPIP蛋白在子宫内膜癌组织中的表达与其患者的年龄、血清学CA125、病理类型无关(P>0.05)，而与FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移，复发有关(P<0.05)(表1)。

表1 HPIP在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理特征的关系

2.3 子宫内膜癌患者临床病理特征及HPIP的表达与DFS和OS的关系

应用Kaplan-Meier单因素生存分析显示患者FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移、HPIP的表达高低与患者的DFS和OS有关(P<0.001)(表2，图2)。

2.4 子宫内膜癌患者DFS和OS的影响因素分析

多因素Cox回归分析结果示FIGO分期、淋巴结转移、HPIP的表达是子宫内膜癌患者FDS和OS的独立影响因素(P<0.05)(表3)。

表3 子宫内膜癌患者DFS和OS的影响因素分析

3 讨论

迄今为止，有研究已经证实HPIP蛋白与癌细胞的增殖、迁移、浸润和转移有显著关系[11-12]。通过抑制凋亡和细胞周期进程的活化，伴随细胞凋亡和细胞周期调节的表达变化来促进细胞生长[13]。HPIP可以促进癌细胞的迁移、浸润和卵巢癌细胞的上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)，并在这些细胞中通过磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B，AKT)途径激活诱导细胞的EMT[5]。研究还发现HPIP与有丝分裂纺锤体有关，它的消耗导致形成多个有丝分裂纺锤体和染色体异常，导致缺陷胞质的分裂，并延迟有丝分裂的结束，HPIP在G2/M过渡过程中主要维持细胞周期蛋白B1的时间稳定性从而控制有丝分裂和细胞分裂[12]。

雌激素受体相互作用的蛋白HPIP可能通过丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)和AKT信号通路激活增加雌激素反应性基因的表达[14]。阻断HPIP的表达可以显著降低人类肝癌细胞系锚着依赖性和增殖，HPIP蛋白通过激活肝癌细胞中的G2/M点，来调节癌细胞增殖，敲除HPIP蛋白能抑制癌细胞的生长，证明其可能成为肝癌基因治疗的有效靶点[15]。有研究表明，通过miR-148A微小靶向降低HPIP的表达，能降低肝癌细胞的生长、浸润和转移[16-17]。研究证实通过抑制HPIP调节的PI3K/AKT信号通路从而抑制头颈部鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭[10]。Wang等[18]研究显示HPIP蛋白的敲除显著抑制甲状腺癌细胞的EMT、增殖、迁移，HPIP蛋白的敲除也降低了裸鼠的甲状腺瘤的生长。

本研究探讨HPIP蛋白在子宫正常内膜组织、子宫内膜非典型增生组织和子宫内膜癌组织中的表达情况与其临床病理资料之间的关系。免疫组化方法结果显示，HPIP蛋白在子宫正常内膜组织和子宫内膜非典型增生组织中的表达显著低于子宫内膜癌中的表达。HPIP在子宫内膜癌组织中的表达与其患者FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移有关。但是HPIP的表达与患者的年龄、病理类型、血清学CA125无关。本研究采用Kaplan-Meier生存曲线分析示子宫内膜癌患者中HPIP高表达比HPIP低表达有较差的DFS和OS。这些结果证实HPIP能促进子宫内膜癌疾病的进展，HPIP很可能成为子宫内膜癌治疗的潜在靶基因。

综上所述，HPIP在子宫内膜癌中高表达，并与临床病理特征及预后密切相关。HPIP可能促进子宫内膜癌的发生发展，成为治疗子宫内膜癌的潜在靶点。由于本研究患者的病例数量少，并且患者的预后随访时间较短。因此，需要一个大的样本量来设计，研究HPIP蛋白对子宫内膜患者的诊断及预后的影响及在子宫内膜癌中促进癌症发展机制。