高效液相色谱法测定3-巯基丙酸中硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的含量

贾玉荣，张建超，尤昆，贾玉静

（江苏正大清江制药有限公司，江苏南京 210033）

巯基丙酸是一种有机物，化学式为C3H6O2S，为透明液体，有强烈的硫化物气味，有臭味、有毒。该物质为药品芬那露的中间体，可用作聚氯乙烯的稳定剂[1]，也有企业将其作为合成舒更葡糖钠原料药的起始物料进行研究。

目前的文献报道[1-4]主要是关于3-巯基丙酸制备与合成工艺，对于其杂质检测方法的研究，可供参考的文献较少[5-6]，且操作烦琐，不够简便快速。

本文建立了高效液相色谱法检测3-巯基丙酸中的杂质的方法，并进行了相应的方法学验证，该方法简便快速，灵敏度高，可为3-巯基丙酸的质量优化提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

UltiMate 3000高效液相色谱仪，美国Thermo Fisher公司；XS-205DU电子天平，梅特勒-托利多集团。

硫代乳酸，批号：ICWDM-LM，含量95.72%，梯希爱（上海）化成工业发展有限公司；3,3-二硫代二丙酸，批号：IP85H-QM，含量99.03%，梯希爱（上海）化成工业发展有限公司；巯基乙酸，批号：HB190009，含量91.96%，安耐吉公司；乙腈，色谱纯，默克公司；磷酸，色谱纯，阿拉丁公司；纯化水，杭州娃哈哈有限公司；3-巯基丙酸样品，山东潍坊精细化工有限公司。

1.2 色谱条件

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，如 Thermo BDS Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相A：0.1%磷酸水溶液；流动相B：乙腈；梯度洗脱程序见表1；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；波长：200 nm；进样量：10 μL；进样盘控温：10 ℃。

表1 梯度洗脱程序

1.3 溶液制备

1.3.1 空白溶液

乙腈-0.1%磷酸水溶液（1∶1）。

1.3.2 供试品溶液

取3-巯基丙酸约40 mg，精密称定，置20 mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

1.3.3 对照溶液

取上述供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

1.3.4 对照品溶液

取巯基乙酸、3,3-二硫代二丙酸各10 mg，精密称定，分别置不同100 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

1.3.5 系统适用性溶液

取巯基乙酸对照品40 mg，精密称定，置20 mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为巯基乙酸对照品储备液。

取3,3-二硫代二丙酸对照品80 mg，硫代乳酸对照品12 mg，精密称定，置同一个100 mL量瓶中，加溶剂溶解，再精密量取巯基乙酸对照品储备液1 mL，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品混合储备液。

取3-巯基丙酸对照品200 mg，置100 mL量瓶，再取对照品混合储备液1 mL，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

2 结果与分析

2.1 溶剂和浓度的选择

硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸在水中的溶解度较好，在乙腈中微溶，而3-巯基丙酸在水中和乙腈中的溶解度均较好，由于流动相中添加了磷酸作为pH调节剂，为了减少溶剂效应的影响，因此选择乙腈-0.1%的磷酸溶液按照1∶1的比例混合后作为溶剂。硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的紫外吸收均较弱，因此选择末端吸收200 nm作为检测波长，在该波长条件下，当供试品溶液为2.0 mg/mL时，硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的检测限均为0.01%，方法灵敏度好。

2.2 色谱条件的选择

硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸均显酸性，在常规的甲醇-水、乙腈-水体系下，峰型较差，均有比较明显的拖尾，因此在流动相中加入适当的酸作为扫尾剂，可明显改善峰型；对比了甲酸、乙酸及磷酸，结果显示，在磷酸条件下，峰型最好，响应最高；考察了不同比例的磷酸（0.05%、0.10%、0.20%），最终确定磷酸的比例为0.10%时，可满足要求。各目标分析物峰形尖锐，分离度良好（图1）。

图1 最优色谱条件下样品图谱

2.3 专属性

分别按“1.3”配制专属性-空白溶剂［乙腈-0.1%磷酸水溶液（1∶1）］、专属性-对照品溶液（硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸）、专属性-供试品溶液和专属性-系统适用性溶液。按“1.2”项下分析方法进行测定。结果显示溶剂和供试品溶液不影响硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的检测，该方法专属性良好。

2.4 检测限及定量限

取“1.3.4”项下的对照品溶液逐级稀释，根据信噪比S/N=3计算检出限；根据信噪比S/N=10计算定量限；按“1.2”项下分析方法测定，测得硫代乳酸的定量限浓度为0.7900 μg/mL，3,3-二硫代二丙酸的定量限浓度为0.3249 μg/mL；硫代乳酸的检测限浓度为0.2528 μg/mL，3,3-二硫代二丙酸的检测限浓度为0.1624 μg/mL；表明本方法的灵敏度较好。

2.5 线性试验

取硫代乳酸对照品溶液稀释制成0.75 μg/mL、1.20μg/mL、1.50 μg/mL、2.25 μg/mL 和 3.00 μg/mL的溶液，3,3-二硫代二丙酸对照品溶液稀释制成4.0 μg/mL、6.4 μg/mL、8.0 μg/mL、12.0 μg/mL 和16.0 μg/mL的溶液，照上述“1.2”分析方法分析测定。

以待测物浓度（μg/mL）为横坐标，待测物峰面积为纵坐标，按最小二乘法进行线性回归。得到硫代乳酸在0.756～3.025 μg/mL浓度范围内线性良好，线性方程为y=7.0696x+0.0398（r=0.9998，n=5）；3,3-二硫代二丙酸在0.322～16.086 μg/mL浓度范围内线性良好，线性方程为y=6.5076x+0.134 9（r=0.9997，n=5）。

2.6 重复性试验

按“1.3”项下制备空白溶液、供试品溶液、对照溶液及系统适用性溶液，其中供试品溶液及对照溶液制备6份，按“1.2”分析方法测定，结果表明6份供试品溶液中均未检出硫代乳酸，3,3-二硫代二丙酸和总杂含量的RSD分别为1.5%和1.6%，表明本测定方法的重复性良好，见表2。

表2 重复性试验结果

2.7 准确度试验

按照“1.3”分别配制含硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸50%、100%、150%的供试品（加标）溶液，各配制3份。采用“1.2”分析方法测定。试验结果表明，各杂质加标回收率均在90.0%～110.0%，方法的准确度良好，见表3、表4。

表3 硫代乳酸准确度试验结果

表4 3,3-二硫代二丙酸准确度试验结果

2.8 样品测定

取3批3-巯基丙酸样品，按“1.3”项下制备供试品溶液和对照溶液，按“1.2”项下分析方法测定，结果如表5所示。

表5 硫代乳酸及3,3-二硫代二丙酸检测结果

3 结论

本文以硫代乳酸及3,3-二硫代二丙酸为研究对象，建立了3-巯基丙酸中杂质含量的高效液相分析方法。该方法具有专属性强、准确快速、灵敏度高等优点，符合定量分析要求，可用于实验室和工业化生产质量控制分析。