弥漫大B细胞淋巴瘤中PIK3CA、PTEN的表达及临床病理学意义

马明福，崔文丽，王玻玮，李羿兴，张 巍

（新疆医科大学第一附属医院病理科,乌鲁木齐 830054）

弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤中的侵袭性亚型，约占非霍奇金淋巴瘤的33.3%[1]。它是一种异质性疾病，具有不同的组织学亚型。DLBCL的治疗通常采用利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙（R-CHOP）等常规化疗方案进行，但仍有相当一部分患者耐药或在治疗后出现复发情况。因此，为提高治愈率，需要寻找新的靶向治疗药物。磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α（PIK3CA）作为一种癌基因，可正向调节PI3K/Akt/mTOR信号通路，而该信号通路的激活参与多种恶性肿瘤的发生、发展，如结肠癌[2]、乳腺癌[3]、肺癌[4]及淋巴瘤[5]等。而10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）作为一种抑癌基因，可负向抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活，从而抑制恶性肿瘤的发生与发展。DLBCL依赖PI3K/Akt/mTOR信号通路阻断细胞凋亡，提示PI3K/Akt/mTOR信号通路在DLBCL的临床治疗干预中具有重要意义。而PIK3CA与PTEN是该信号通路的关键因子。因此，本研究以PIK3CA、PTEN作为切入点，通过免疫组织化学技术检测DLBCL中PIK3CA、PTEN蛋白质表达情况，并分析其与各临床病理指标及预后间的相关性，为DLBCL的治疗提供新的、可行的理论依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料选择2010年1月1日-2013年12月31日在新疆医科大学第一附属医院病理科首次诊断的82例DLBCL患者石蜡标本及完整的临床病理信息。纳入标准：首次诊断，术前未经任何治疗，具有完整的临床病理资料者。排除标准：存在中枢神经系统恶性淋巴瘤或其他影响生存期的恶性疾病患者；精神类疾病患者；临床资料不完整或术前经过治疗者，制片不佳无法判断免疫组织化学结果的。患者及家属已签署知情同意书。

1.2 试剂PIK3CA蛋白免疫组化试剂（PI3K p110α单克隆抗体，克隆号：C73F8），PTEN蛋白免疫组化试剂（克隆号：28H6），均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法

1.3.1 蛋白质水平检测按照免疫组织化学试剂盒链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法切片，置于65℃烤箱1 h，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，冲洗3次，置于3%过氧化氢溶液避光孵育10 min，PBS冲洗，抗原修复，依次加一抗，PBS洗净，加二抗，PBS洗净，DAB显色，苏木素复染，脱水，封片。

1.3.2 结果判定光镜下每张切片随机选择10个高倍视野观察100个细胞。将染色强度分为未着色计0分，淡黄色计1分，深黄色计2分，棕褐色计3分；阳性细胞百分比≤1 %为0分，1 %～20 %为1分，21%～50 %为2分，＞50%为3分。每张切片两个评分相乘结果≥4分判读为阳性，＜4分判读为阴性。采用双盲法，由两位高年资医师进行阅片，并取平均值。

1.4 生存分析以确诊当日为起始点进行电话随访，并收集患者生存信息。以患者死亡为终点事件，随访时间2020年12月31日截止，失访患者自失去联系当月起按截尾数据计算。

1.5 统计学处理所有数据采用SPSS23.0统计软件进行分析，计数资料以百分比（n/%）表示，采用χ2检验，生存分析采用Kaplan-Meier法。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 PIK3CA、PTEN蛋白表达情况免疫组织化学染色显示，PIK3CA在DLBCL中呈阳性表达时定位于细胞浆，阴性则不着色；而PTEN在DLBCL中阳性表达时定位于细胞核，阴性不着色，见图1。

图1 PIK3CA、PTEN的免疫组织化学染色切片图（×200）

2.2 PIK3CA、PTEN与各病例参数的相关性结果PIK3CA、PTEN在DLBCL中阳性表达率分别为90.2%（74/82）、11.0%（9/82）。PIK3CA蛋白与肿瘤物直径、临床分期有关，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。PTEN蛋白质在DLBCL中的缺失率为11.0%（9/82），与其他临床病理指标未发现明显相关性（P＞0.05），见表2。PIK3CA蛋白阳性表达与PTEN蛋白阳性表达有关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 PIK3CA在DLBCL中临床相关病理参数分析/n(%)

表2 PTEN在DLBCL中临床病理参数分析/n(%)

续表

2.3 PIK3CA、PTEN生存分析结果PIK3CA阳性表达患者中位总生存时间（OS）为20个月，阴性表达患者OS为22个月，两者间未发现显著相关性（P=0.492）；PTEN阳性表达患者中位总生存时间（OS）为21个月，阴性表达患者OS为23个月，未发现明显相关性（P=0.342）；PIK3CA和PTEN的表达水平与患者预后无相关性（P＞0.05），见图2。

图2 PIK3CA、PTEN生存分析图

续表

3 讨论

弥漫大B细胞淋巴瘤是最常见的非霍奇金淋巴瘤，表现为单个或多个淋巴结内或结外部位快速增长的肿块，其在临床表现、分子遗传学、疗效及预后等方面不尽相同，是一个异质性的肿瘤。尽管近年来对DLBCL治疗相关的研究较多，且疗效较好，但目前使用的标准治疗方法5年总生存率仅为60%～70%[6]，故基于DLBCL的分子机制的精准医学治疗，对提高预后效果具有重要意义。

PIK3CA位于3q26.3染色体上，是由1 068个氨基酸组成的124 kDa的蛋白质。PIK3CA是PI3K/Akt/mTOR信号通路的关键下游蛋白激酶，在恶性肿瘤细胞增殖、分解代谢、细胞黏附及凋亡中发挥重要作用。既往研究表明，PIK3CA作为胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）的亚基，在许多恶性肿瘤中发生突变，是激活PI3K/Akt/mTOR信号通路的主要机制[7]。而PTEN位于10q23染色体上，在多数恶性肿瘤中，该区域经常发生杂合性缺失。它是一种兼具蛋白质和脂质磷酸酶活性的双磷酸酶，最初被发现是一种具有细胞生长与生存调节功能的肿瘤抑制因子。之后有研究证实，PTEN是PI3K/Akt/mTOR信号通路的负调控因子，在抑制肿瘤的发生与发展中起着重要作用[8]。Cui等[9]通过对199例DLBCL的组织芯片进行免疫组织化学检测结果表明，PIK3CA在DLBCL中广泛表达，支持PIK3CA在DLBCL中的致癌特性。Alowiri等[10]研究发现，PIK3CA mRNA表达较非肿瘤组织显著升高(P＜0.001,Z=5.700)，而本研究中PIK3CA阳性表达率为90.2%（74/82），在大部分DLBCL中表达，这说明PIK3CA的表达可能与DLBCL的发生、发展有关。同时本研究结果显示，PIK3CA蛋白表达与肿瘤物直径、临床分期有关，其中肿瘤物直径≤4 cm、临床分期Ⅲ～Ⅳ期的阳性表达率较高，提示PIK3CA的表达在DLBCL肿瘤直径、疾病晚期方面存在差异。而PTEN在DLBCL中的阳性表达率为11.0%（9/82），与各临床病理指标之间未发现相关性，说明PTEN蛋白缺失在DLBCL发生、发展中可能是一个独立因素，或因病例较少所致，故PTEN蛋白与DLBCL发生、发展相关性有待扩大样本量进一步研究。Gehringer等[11]发现，PTEN在伯基特淋巴瘤中抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活性的作用相同，进一步验证了本研究中PIK3CA蛋白表达与PTEN蛋白表达有关（P＜0.05）这一实验结果。

综上所述，PIK3CA、PTEN表达与DLBCL的发生、发展相关，但两者在肿瘤组织中的具体作用机制仍需进一步深入研究与探索，以期为DLBCL的靶向治疗提供新的理论依据。