上皮性卵巢癌组织中MUC1、BDNF的表达及意义

李娅茹，林 萍

河北省衡水市人民医院妇科，河北衡水 053000

有流行病学调查显示，在妇科肿瘤性疾病中，上皮性卵巢癌患者的5年生存率仅达到30%左右[1]。上皮性卵巢癌的发病较为隐匿，往往在患者确诊为上皮性卵巢癌时，疾病已经进展至中晚期或发生转移。目前对于上皮性卵巢癌的诊断方法还未形成统一的标准[2]。有研究报道显示，上皮性卵巢癌患者的进展与多种分子以及遗传变化相关[3]。已有的研究显示，上皮性卵巢癌的进展与基因组的结构、生长因子受体以及抑癌基因的平衡相关[4]。黏蛋白1(MUC1)水平在多种腺癌中都明显升高，其主要由高度糖基化及非糖基化的区域性蛋白质形成，在正常的细胞中，MUC1含有大量的糖基化片段，而在肿瘤细胞中，由于细胞表面的免疫抗原表位支链覆盖，所以在肿瘤细胞中MUC1水平明显上升[5]。脑源性神经营养因子(BDNF)主要存在于神经系统中，该蛋白的异常表达可进一步激活磷脂酰肌醇-3激酶信号通路，促进肿瘤细胞的恶性增殖以及对周边组织的浸润[6]。本研究主要研究上皮性卵巢癌组织中MUC1、BDNF mRNA表达水平与患者预后的相关性，为上皮性卵巢癌的临床治疗以及效果评估提供科学依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 采用前瞻性研究的方法，以2015年9月至2017年12月在本院进行诊断并治疗的62例上皮性卵巢癌患者作为研究对象。患者年龄30～64岁，平均(43.52±2.44)岁；平均体质量指数为(24.56±2.55)kg/m2；病理类型：黏液性癌23例，浆液性癌症39例；分化程度：低分化22例，中分化26例，高分化14例；国际妇产科协会(FIGO)分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期患者29例。所有研究对象均签署知情同意书，并经医院伦理委员会论证通过。

纳入标准：(1)符合上皮性卵巢癌诊断标准[7]；(2)预计生存时间>6个月；(3)KPS[6]评分均≥70分；(4)入组后，所有患者均进行手术治疗。排除标准：(1)心、肝、肾功能严重不全者；(2)存在交流障碍的患者。采用门诊复查或电话形式对患者进行3年随访，截止时间为死亡或随访结束。

1.2方法 取患者的病灶部位以及癌旁组织进行匀浆处理后，以Trizol法进行总RNA提取，然后进行反转录反应合成cDNA，采用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR法进行扩增，检测癌组织和癌旁组织中MUC1和BNDF的mRNA表达水平。MUC1上游引物：5′-CCCACCAATTTCTCGGACACT-3′，MUC1下游引物：5′-CAGTTCAGGATCCCCGCTATC-3′;BDNF上游引物：5′-TACATCTGGCTACTGGGTGTCGTATC-3′，BDNF下游引物：5′-TCGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′;以GAPDH作为内参基因，GAPDH上游引物：5′-TCATGGGTGTGAACCATGAGAA-3′，GAPDH下游引物：5′-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3′。使用2-ΔΔCt计算MUC1、BDNF mRNA的相对表达量。

2 结 果

2.1癌组织和癌旁组织MUC1、BDNF mRNA表达水平比较 癌组织的MUC1、BDNF mRNA表达水平均高于癌旁组织(P<0.05)。见表1。

表1 癌组织和癌旁组织的MUC1、BDNF mRNA表达水平比较

2.2不同临床病理特征患者癌组织MUC1、BDNF mRNA表达水平比较 不同年龄上皮性卵巢癌患者癌组织的MUC1、BDNF mRNA表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。病理类型为浆液性癌的患者癌组织中MUC1、BDNF mRNA表达水平明显高于黏液性癌患者(P<0.05)；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期的患者癌组织中MUC1、BDNF mRNA表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)；低分化程度的患者癌组织中MUC1、BDNF mRNA水平明显高于中、高分化的患者(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床病理特征患者癌组织TMUC1、BDNF mRNA水平比较

续表2 不同临床病理特征患者癌组织TMUC1、BDNF mRNA水平比较

2.3不同预后患者癌组织MUC1、BDNF mRNA表达水平比较 随访结束后，生存组42例，死亡组20例，生存组患者癌组织MUC1、BDNF mRNA表达水平均明显低于死亡组(P<0.05)。见表3。

表3 不同预后患者癌组织MUC1、BDNF mRNA表达水平比较

2.4相关性分析 上皮性卵巢癌组织MUC1、BDNF mRNA表达水平与患者生存情况呈负相关(r=-0.689、-0.551，P<0.05)，与病理类型由黏液性癌变为浆液性癌呈正相关(r=0.581、0.462，P<0.05)，与FIGO分期呈正相关(r=0.470、0.774，P<0.05)，与癌组织分化程度呈负相关(r=-0.592、-0.513，P<0.05)。见表4。

表4 癌组织中MUC1、BDNF mRNA水平与患者临床病理特征、预后的相关性分析

3 讨 论

上皮性卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，在妇科恶性肿瘤的发病率中，上皮性卵巢癌位列第3[8]。在临床诊疗过程中，上皮性卵巢癌因其较高的病死率和发病率，已经成为临床医师共同关注的焦点。目前对于上皮性卵巢癌的发病机制尚不明确，多数患者在明确诊断时已处于中晚期，这也是造成上皮性卵巢癌患者病死率较高的原因之一[8]。目前在上皮性卵巢癌的治疗中，化疗是主要的辅助性手段，但有严重的不良反应，所以临床对于靶向治疗药物的研发具有重要的意义[9]。有研究显示，在上皮性卵巢癌患者的治疗中，MUC1可作为重要的靶向治疗点[10]。BDNF主要存在于机体的神经系统中，BDNF 异常高表达能够通过激活磷脂酰肌醇-3 激酶信号通路，进而促进肿瘤细胞的恶性增殖以及向周边组织的浸润[11]。

本研究显示，与癌旁组织相比，上皮性卵巢癌患者癌组织的MUC1、BDNF mRNA表达水平均升高(P<0.05)。有分析认为，随着患者BDNF mRNA表达水平的升高，BDNF/TrkB 信号通路呈现明显的过度活化，从而增强肿瘤细胞的增殖能力[12-13]。也有研究显示，BDNF可通过对钙离子依赖性酪氨酸激酶的磷酸化，促进钙离子的流动性，进一步促进肿瘤细胞的进展[14]。闫洪亮等[15]通过下调上皮性卵巢癌组织的BDNF基因表达，降低了Akt磷酸化水平，进而促进人上皮性卵巢癌 OV2008 细胞凋亡和侵袭能力减弱。有研究报道显示，MUC1可通过与核因子-κB结合，促进细胞程式死亡-配体1(PDL1)水平的升高，在一定程度上增强了免疫逃逸机制，从而促进肿瘤细胞的增殖[16]。在直肠癌患者的治疗中，通过对患者的MUC1靶向抑制性作用，可抑制肿瘤细胞的增生[17]。李程程等[18]对上皮性卵巢癌患者的MUC1水平进行了分析，发现随着疾病的进展，患者的MUC1水平呈现明显上升趋势，并且与卵巢癌细胞的黏附性相关。在本研究中，上皮性卵巢癌组织MUC1、BDNF mRNA表达水平比较，死亡组高于生存组(P<0.05)，病理类型为浆液性癌的患者高于黏液性癌患者(P<0.05)，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期的患者高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，低分化程度的患者高于中、高分化程度患者(P<0.05)，这均与上述研究相互印证。

本研究相关性分析显示，上皮性卵巢癌患者癌组织MUC1、BDNF mRNA表达水平与患者生存情况呈负相关(r<0，P<0.05)，与病理类型由黏液性癌变为浆液性癌呈正相关(r>0，P<0.05)，与FIGO分期等级呈正相关(r>0，P<0.05)，与分化程度呈负相关(r<0，P<0.05)，提示分析上皮性卵巢癌组织的MUC1、BDNF mRNA表达水平对于患者预后判断具有积极的意义。但是本研究存在一定的局限性，即样本量少，有待日后采集更大样本量进行分析。

综上所述，上皮性卵巢癌组织中MUC1、BDNF mRNA表达水平与患者生存情况、病理类型、FIGO分期及分化程度密切相关，可为评估患者治疗效果及疾病进展提供重要依据。