侯敏娜,侯少平,杨枫玉,胡亚茹
(陕西国际商贸学院,陕西 咸阳 712046)
黄芪,又名绵芪,载于《神农本草经》,是人们熟知的一类药食同源植物,在我国山西、内蒙、东北、甘肃、陕西等地均有人工栽培[1-3],具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、排毒排脓等功效。黄芪含有多糖类、黄酮类、皂苷类、氨基酸、叶酸等化合物及硒、锌、铜等多种微量元素[1-2]。现代药理学研究[4-9]表明,黄芪有提高免疫力、抗菌、抗肿瘤、抗病毒等作用,而黄芪中的多糖、皂苷均有一定的补气作用,是其提高免疫力的主要成分。为阐明黄芪的补气药效物质基础,作者采用紫外可见分光光度法对山西、陕西和甘肃等3个产地的10批次蒙古黄芪中的补气主成分多糖和皂苷的含量进行分析比较,以期为黄芪药材基源考证奠定基础,为黄芪药材的深加工提供参考。
蒙古黄芪(产地:山西、陕西、甘肃),购于陕西省西安市,经陕西国际商贸学院中药教研室雷国莲教授鉴定为豆科植物蒙古黄芪属的干燥根。
葡萄糖对照品(批号100080-201811)、齐墩果酸对照品(批号110709-201206),中国药品生物制品鉴定所;香草醛,天津天力化学试剂有限公司;苯酚,天津河东区红岩试剂厂;所用试剂均为分析纯。
TU-1810型紫外可见分光光度计,北京普析;CP225D型电子分析天平,赛多利斯;MH-1000型电热套,北京科伟;KQ5200DE型数控超声波清洗器,昆山超声仪器有限公司;2500C型多功能粉碎机,永康艾泽拉电器有限公司;HG-9075L型立式鼓风干燥箱,北京亚太。
取蒙古黄芪药材,置于60 ℃恒温干燥箱中干燥,粉碎,过10目筛,密封,备用。
准确称取山西、陕西、甘肃等3个产地的蒙古黄芪粗粉各5.000 g,分别置于具塞锥形瓶中,加入60 mL纯水,在60 ℃下超声提取40 min,抽滤,滤液缓缓蒸发至干,于60 ℃恒温干燥箱中干燥,即得蒙古黄芪提取物,称重。
1.4.1 葡萄糖标准曲线的绘制[10]
准确称取5 mg葡萄糖对照品,置于50 mL容量瓶中,用纯水定容至刻度,得到浓度为0.1 mg·mL-1的葡萄糖标准溶液。分别移取0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL葡萄糖标准溶液于试管中,以纯水为空白对照;加入1 mL 5%苯酚溶液,摇匀;再加入5 mL浓硫酸,沸水浴加热30 min;迅速取出,冷却至室温;测定溶液在490 nm处的吸光度。以吸光度(A)为纵坐标、浓度(c)为横坐标,绘制葡萄糖标准曲线,拟合得回归方程A=170.3c+0.0149(R2=0.9993),在0.004~0.005 mg·mL-1浓度范围内,葡萄糖浓度与吸光度线性关系良好。
1.4.2 齐墩果酸标准曲线的绘制[11-12]
准确称取5 mg齐墩果酸对照品,置于50 mL容量瓶中,用纯水定容至刻度,得到浓度为0.1 mg·mL-1的齐墩果酸标准溶液。分别移取0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL齐墩果酸标准溶液于试管中,以纯水为空白对照;加入1 mL 8%香草醛溶液,摇匀;再加入5 mL浓硫酸,62 ℃水浴中保温20 min;迅速取出,冷却至室温;测定溶液在544 nm处的吸光度。以吸光度(A)为纵坐标、浓度(c)为横坐标,绘制齐墩果酸标准曲线,拟合得回归方程A=1.653c+0.0215(R2=0.9982),在0.004~0.005 mg·mL-1浓度范围内,齐墩果酸浓度与吸光度线性关系良好。
取蒙古黄芪提取物,用纯水配制样品溶液,按1.4方法测定样品溶液的吸光度,依据回归方程计算样品溶液中多糖/皂苷的浓度,按下式计算蒙古黄芪中多糖/皂苷的含量(Y,%)。
式中:c为样品溶液中多糖/皂苷的浓度,mg·mL-1;V为样品溶液的体积,mL;n为稀释倍数;m为蒙古黄芪提取物质量,mg。
山西、陕西、甘肃等3个产地的10批次蒙古黄芪中的多糖含量测定结果见表1。
由表1可知,3个产地10批次蒙古黄芪中的多糖含量大小顺序为:甘肃(31.34%)>陕西(30.96%)>山西(27.44%)。
表1 不同产地10批次蒙古黄芪中的多糖含量
山西、陕西、甘肃等3个产地的10批次蒙古黄芪中的皂苷含量测定结果见表2。
由表2可知,3个产地10批次蒙古黄芪中的皂苷含量大小顺序为:甘肃(47.57%)>山西(43.30%)>陕西(38.77%)。
表2 不同产地10批次蒙古黄芪中的皂苷含量
综上,甘肃蒙古黄芪中的多糖和皂苷含量均高于山西和陕西的,质量较好;山西蒙古黄芪中的皂苷含量高于陕西的,而陕西蒙古黄芪中的多糖含量高于山西的。这与蒙古黄芪药材的生长环境,包括土壤、气候、纬度、光照、水肥等多种因素有关,说明蒙古黄芪在甘肃能较好生长,能更好地发挥其补气功效。
对山西、陕西、甘肃等3个产地的蒙古黄芪补气主成分含量进行分析比较,不同产地10批次蒙古黄芪中的多糖含量大小为:甘肃(31.34%)>陕西(30.96%)>山西(27.44%),皂苷含量大小为:甘肃(47.57%)>山西(43.30%)>陕西(38.77%)。甘肃蒙古黄芪中的多糖和皂苷含量均最高,山西蒙古黄芪中的皂苷含量高于陕西的,而陕西蒙古黄芪中的多糖含量高于山西的。黄芪在甘肃能较好生长,能更好地发挥其补气功效。而蒙古黄芪中的多糖和皂苷除了补气功效外,还有抗氧化性、提高免疫力等[13-15]特殊活性。本研究为补气作用蒙古黄芪的产地优选以及药材深加工提供了参考。