犬种布鲁氏菌病的诊治

梁 琴，李 媛

（广西壮族自治区北海市动物疫病预防控制中心，广西 北海 536000）

犬种布鲁氏菌病为临床及畜牧业常见传染病，尽管近年来我国对传染病的防控能力有很大提升，但随着人民生活水平提高，城镇家庭饲养宠物犬增加，犬种布鲁氏菌病的隐患增大，需尽早发现、诊断和治疗。目前对该病的诊断，常见诊断方法有全乳环状试验（MRT）、补体结合试验（CET）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析检测技术（GICA）及病原学诊断中的分子生物学检测等。在对该病的治疗中，患病动物多以抗生素治疗为主，配合按时更换消毒剂。在对人犬种布鲁氏菌病治疗中，目前对中医药联合治疗关注度逐渐提升，为该病治疗提供新思路。

1 研究背景

1.1 犬种布鲁氏菌病概述

犬种布鲁氏菌病，为布鲁氏杆菌引发的传染性疾病，病原菌侵入人体后，定居于局部淋巴结，通过在淋巴结组织中增殖而进入血液传播，引发全身感染性疾病，包括菌血症和毒血症等。病犬临床特征中，公犬主要表现为阴囊水肿、附睾炎、睾丸炎、前列腺炎症状，甚至出现精子异常症状。布鲁氏杆菌对怀孕子宫适应性较强，母犬感染后，主要表现为持续排出黄色或黄褐色阴道分泌物，妊娠45～55 d 流产、产出死胎等症状。骨关节为最常见损伤部位，出现椎间盘炎、关节炎等症状，并伴关节疼痛、肿胀、活动障碍等症状。全身症状中，可见淋巴结、脾、肝、肾等器官形成特征性肉芽肿。在对神经功能损伤中，布鲁氏杆菌会损伤中枢神经，并表现出相应神经功能损伤症状。有临床研究发现，布鲁氏杆菌对人听觉神经影响明显，会出现听力下降症状，包括渐进性听力下降、突发性耳聋等症状，且经腰椎穿刺结果提示其存在颅内压轻度升高情况，提示布鲁氏杆菌会造成听觉神经及脑组织功能损伤。

1.2 犬种布鲁氏菌病流行病学

尽管人们对传染病预防意识增强，但犬种布鲁氏菌病发病早期无典型症状，在潜伏期难以发现。因此该病在人与动物之间发病传染的情况时有发生。在有关人员对榆社县2011～2019年人间布鲁氏菌病流行特征分析中发现，累计报告的913 例病例中，78.32%集中于3～8 月发病，发病以男性为主（5.56∶1），发病年龄主要集中于40～69 岁，提示夏、秋季中年男性布鲁氏杆菌感染风险较高。在对警犬布鲁氏菌病流行调查中发现，云贵川三省犬血清抗体阳性率较高（42.65%～8.16%），发病原因可能与气候潮湿和温度较高等原因有关。有关人员对2016～2017 年山东省济南市犬布鲁氏菌病血清调查中发现，济南市宠物犬中光滑性布鲁氏菌感染发生率较高，具较高潜在传播风险。

上述调查研究说明，目前犬种布鲁氏菌病在人与犬之间存在流行情况，感染后会对人体造成关节损伤、脏器及淋巴结损伤、神经功能损伤等情况，影响患者生存质量，因此需尽早诊断鉴别及积极治疗。

2 诊断方法

2.1 血清学诊断

目前犬种布鲁氏菌病血清学指标诊断中，常见诊断方法包括凝集试验（MRT）、虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）及CET、ELISA、GICA等。

2.1.1 MRT

MRT主要用于该病筛查诊断，具操作简单、检出结果快速等特点，主要用于泌乳动物检查，不仅可用于个体乳样检查，同时也适用于混合乳样检测，其在检测中主要检测布鲁氏菌LPS-O 链抗体，但LPS-O 链为多种革兰氏阴性菌共同抗原，因此在与其他菌较差感染时，MRT检查无法完成鉴别诊断。

2.1.2 RBPT

RBPT为国际贸易中动物布鲁氏杆菌指定试验检查方式，主要通过抗原性良好的布鲁氏菌经灭剧哦、离心、虎红染料染色制成的检测方法；但检查结果易受凝集较短及温度影响，出现诊断误差情况，多用于初筛诊断，且RBPT阳性样本还需通过SAT试验诊断。

2.1.3 CET

CET为目前血清学诊断中最准确诊断技术，其反应发生原理为，抗体及相应抗原结合后，会形成抗原抗体复合物，抗体分子构象发生改变，Fc片段上与补体相结合位点暴露，在此基础上加入红细胞及溶血素后，补体无法与其相结合，因此不会引发溶血现象，若检测血清中没有特异性抗体，补体游离形式存在后，会立即出现溶血现象，因此可通过是否发生溶血现象进行诊断；但此种技术操作难度较高，结果易受主观因素影响出现误差。

2.1.4 ELISA

ELISA 具有敏感、快速、稳定、灵敏度高等特点，诊断过程可自动化操作，可同时满足筛选和鉴别诊断。随着该项技术发展，快速双抗原夹心ELISA 技术逐渐成熟，可提升ELISA 方法诊断鉴别速度。目前在对布鲁氏菌病检测中，主要包括iELISA、cELISA 两种，其检测关键为抗原选择质量。目前在该菌抗原选择中，主要应用S-LPS，位点为LPS 的O 链中，而粗糙型LPS 中无O 链，因此应用ELISA 方法难以检测出粗糙型布鲁氏菌。布鲁氏菌在特定时期会产生外膜蛋白OMP28，一般在感染后1 w左右出现，尽管持续时间相对较短，但其存在于光滑型、粗糙型布鲁氏菌中，因此可将OMP28-ELISA 作为常规ELISA 补充试验。

2.1.5 GICA

GICA法，具有诊断敏感度和特异度高等特点，且对样本量需求较少、操作简便快速，可用于流行病学调查和现场检测。有人在对布鲁氏菌实验室初筛研究中，分别应用RBPT、GICA法检验，结果显示，两种检验方法阴性完全一致，且假阳性完全一致，但GICA操作更简便，不需要特殊仪器，诊断用时短，因此其在诊断中前景更为广阔。

2.1.6 免疫组化法

免疫组化法检测中，抗原位置主要位于肺巨噬细胞、中性粒细胞细胞膜上，此种诊断方案具有敏感性和特异性高等特点，通过检出抗原情况以满足诊断需求，对进一步开展病理学研究具重要意义。

2.2 病原学诊断

2.2.1 镜下直接观察

显微镜检查，为犬种布鲁氏菌病诊断方式之一，经科兹洛夫斯基染色法可见布鲁氏菌呈现红色球杆状，其他菌种呈现蓝色，此种诊断方式直观简单。

2.2.2 分子生物学技术

病原鉴定分离，为布鲁氏杆菌鉴别诊断金标准，通过培养基接种、菌株分离鉴定，以满足诊断需求，但此种诊断方案操作较烦琐、检出时间长，且对实验室要求很高。分子生物学检测，可满足病原菌分种、分型、同源性分析等诊断需求，其中PCR 技术，仅极少样本即可完成检测，不仅可区分布鲁氏菌与其他细菌，同时可用于特定序列描述新种和菌株特征；但此种技术对场地设计、设备和操作人员等要求较高。核酸探针，具灵敏度高、特异度高等特点，可反复多次利用，可用于大样本量检测，不仅可检出布鲁氏菌阳性情况，同时可利用不同核酸探针进行种型鉴定分型，与常规PCR 技术相比，诊断操作难度较低，但诊断灵敏度相近。环介导等温扩增技术（LAMP）同样为通过基因扩增进行病原菌诊断，而LAMP 技术具操作简便、灵敏度高等优势，可直接通过肉眼观察进行结果判断，更适用于基层布鲁氏菌诊断。

3 治疗方法

清除环境中的布鲁氏杆菌，可降低环境中人和动物布鲁氏杆菌感染的风险。有研究发现，犬种布鲁氏菌最低抑菌浓度中，戊二醛癸甲溴铵、二氯异氰尿酸钠、复合酚、过硫酸氢钾复合粉的MIC分别为7.81 mg/L、125.00 mg/L、17.08 mg/L、250.0 mg/L；最低杀菌浓度中，戊二醛癸甲溴铵、二氯异氰尿酸钠、复合酚、硫酸氢钾复合粉分别为125.00 mg/L、31.25 mg/L、136.67 mg/L、500.00 mg/L 时，持续作用3 min 能够杀灭犬种布鲁氏菌。在对人慢性布鲁氏菌病治疗中，左氧氟沙星联合多西环素对布鲁氏杆菌具良好杀灭作用。有研究发现，口服左氧氟沙星，每次200 mg，每天2次；口服多西环素，每次200 mg，每天1次；口服复方甘草酸苷，每次3 片，每天3 次，持续治疗21 d后，与单纯应用左氧氟沙星+多西环素治疗相比，治疗有效率显著提升，且患者发热、多汗、乏力、头痛等症状消失时间均显著缩短。随着近年来临床对中医药治疗重视程度提升，在对该病常规西药治疗基础上，联合中药治疗应用频率逐渐提升。有研究表明，在对患者常规西药治疗基础上，结合中医辨证治疗，患者免疫功能显著改善，炎症反应水平显著降低。

4 小结

犬种布鲁氏菌病对人和犬的生理机能影响严重，在对其鉴别诊断中，血清学诊断和病原学诊断均为常见诊断方法，但不同诊断方法单独应用均存在一定局限性，提示应建立综合诊断方案，以提升诊断的准确性。在对该病预防及治疗中，西药联合中药治疗近年来备受关注，为该病控制提供新思路。