浅谈牛结节性皮肤病的实验室诊断技术及疫情处置要点

张迟蕾，张靖蕾，张江波

（1.焦作市山阳区农业农村局，河南 焦作 454150；2.焦作市中站区龙翔街道办事处）

牛结节性皮肤病，于2019年8月在我国新疆伊犁首次被报告，之后在广东、安徽、浙江等地也陆续被发现，对我国的养牛业造成了极大损失。为了做好该病的防控工作，快速准确的确诊和对疫情及时有效的处置至关重要。因此对该病的实验室诊断技术、疫情确诊程序及处置要点进行探讨分析，具有十分重要的意义。

牛结节性皮肤病（LSD）是牛结节性皮肤病毒引起的牛全身性感染疫病，临床以皮肤结节为特征，该病不会传染人，不是人兽共患病。该病对养牛业危害极大，能够导致牛只消瘦、品质降低、产奶量降低，母牛流产、公牛暂时性或永久性不育，并导致部分牛死亡，对养牛场、牛奶产业甚至出口外贸都会带来严重影响，必须高度警惕和重视。本文重点梳理分析了牛结节性皮肤病的实验室诊断技术、疫情确诊程序及处置要点，从而为做好牛结节性皮肤病防治提供参考借鉴。

1 牛结节性皮肤病

1.1 流行情况

牛结节性皮肤病于1929 年首次在非洲赞比亚出现，1988 年，传入埃及，1989 年传至以色列，之后逐渐传至土耳其和伊拉克、伊朗、沙特以及阿塞拜疆、亚美尼亚等国家，随后逐渐传至欧洲等国家，2019年8月，我国首次在新疆发现该病。

1.2 生物学特性及主要症状

牛结节性皮肤病属于痘病毒科、山羊痘病毒属，属于DNA病毒，只有1个血清型，基因组稳定，很少发生遗传变异，基因组比较大。临床症状主要为发热、皮肤（黏膜、器官）表面出现结节、消瘦、淋巴结肿大、奶牛产奶量下降，甚至引发死亡。

2 实验室诊断技术

2.1 抗体检测

牛结节性皮肤病毒侵入机体后，会在动物体内产生相应的抗体，因此通过检测抗体，来间接判定动物是否患病。

常用的抗体检测方法有：病毒中和实验、间接荧光抗体试验（IFAT）、琼脂凝胶免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。但抗体检测手段还存一些问题和不足，比如病毒试验，由于需要活的病毒，因此存在一定的安全隐患，对实验室防护能力和操作人员操作技术要求很高，操作不当，会造成病毒的扩散。另外抗体检测手段，虽然是通过检测抗体来判定动物是否患病，但对于疫苗免疫产生的抗体或者病毒产生的抗体却无法区别诊断，因此，抗体检测手段存在自身的瓶颈性，而抗体测的优势主要在于群体抗体检测，能够大批量开展检测，然而对于个体检测，优势不明显，结果也不可靠。

2.2 病原检测

由于抗体检测存在的诸多问题和不足，因此，牛结节性皮肤病的首选检测手段，应当是分子生物学检测技术。分子生物学技术即病原学诊断，聚合酶链式反应技术，通过对牛结节性皮肤病核酸片段进行提取、扩增、分析，来诊断动物体内是否含有病毒，因此，相对血清学技术，更稳定、更科学、更准确，也是今后实验室诊断技术的一个主要研究方向。

主要的病原学检测技术有：普通PCR、qRNA（实时荧光定量PCR）、RT-PCR（反转录酶PCR技术）等，普通PCR检测手段是最早的分子生物学诊断技术，在实验室资源有限、专业人员技术水平不高的情况下，是最值得推荐的技术，在一些地方被广泛应用。另外一种最常用的是qRNA，即实时荧光定量PCR，该方法既能定性，也能定量，灵敏度更高，与普通PCR相比，优势明显，在一些有条件的地方，已经逐步取代了普通PCR技术，但是无法有效区分山羊、绵羊痘病毒和结节性皮肤病病毒。而RT-PCR，即反转录酶PCR技术，有效地解决了这一问题，能够有效区分山羊痘病毒、绵羊痘病毒和牛结节性皮肤病病毒，因此，RT-PCR技术相对前两种技术，具有定量、定性、精确、稳定等诸多优点，也是今后诊断技术的一个主要研究方向，随着技术的成熟，将越来越多地用于牛结节性皮肤病的诊断。

3 疫情的确诊

依法科学地对疫情进行确诊，是及时有效处置牛结节性皮肤病的前提，也是最大程度减小损失的关键。根据牛结节性皮肤病的病毒特点、流行规律及生物学特性，按照《牛结节性皮肤病防治技术规范》的要求，牛结节性皮肤病的确诊，主要有“可疑疫情、疑似疫情、疫情确诊”三个程序。其中“可疑疫情”，是指县级畜牧兽医主管部门接到有关疫情报告或者疑似病例后，立即组织人员到现场展开调查，通过临床诊断初步判定为牛结节性皮肤病的，认定为“可疑疫情”，然后采集有关病料、拭子、血清等，送县级动物疫病预防控制中心进行病原学检测，经检测病原阳性的，确定为“疑似疫情”，然后县级畜牧兽医主管部门采集样品送省级动物疫病预防控制机构或者有资质的实验室进行病原检测，检测结果阳性的，可认定为“确诊疫情”。需要注意的是，各省份首次确认的牛结节性皮肤病疫情必须由中国动物卫生与流行病学中心实验室确认。

4 疫情处置要点

4.1 封锁的实施

目前，农业农村部暂时将该病列为二类动物疫病，按照《动物防疫法》规定，对二类动物疫病由县级以上人民政府畜牧兽医主管部门划定疫点、疫区和受威胁区，同时采取隔离、扑杀、销毁、无害化处理、紧急免疫接种、限制易感动物和动物产品及有关物品出入等控制、扑灭措施，并未强制要求采取封锁措施。按照《防治技术规范》的规定，确诊疫情后，要按照二类动物疫病的规定进行处置，一般不采取封锁措施，如确实有必要的，由县级政府发布封锁令进行封锁，禁止易感动物及动物产品出入。

4.2 疫点的处置

关于对疫点的处置，主要是对于确诊阳性的病牛，立即进行隔离，并采取扑杀、销毁等措施，对同群牛进行采样检测，一旦发现病原学阳性的，也立即扑杀并销毁，检测阴性的，可继续饲养，建议提前出栏屠宰，对于环境，要强化生物安全措施，改善动物防疫条件，严格做好清洗、消毒、无害化处理等措施，加强对场区、生产区、生活区、周边道路等清洗、消毒工作，消灭厂区内的蚊、蝇、蜱等媒介，切断传播途径。

4.3 疫区及受威胁区的处置

首先是对疫区的处理措施。要禁止牛只出入，禁止未经检疫的牛皮张、精液等产品调出。对吸血虫媒进行控制，灭杀饲养场所昆虫及幼虫，清除滋生环境。对监测发现的病原学阳性牛只进行扑杀和无害化处理，同群牛只隔离观察。对疫区实施封锁的，还应在疫区周围设警示标志，在交通路口设置检查站。

其次，是对受威胁区的处置措施。禁止牛只出入和未经检疫的牛皮、精液等产品调出。对牛只养殖场、牧场等场所进行监测排查和感染风险评估。疫情所在县、相邻县可采用山羊痘疫苗按照山羊5倍的剂量要求，对所有牛只全部进行紧急免疫。