尿HCG质控品均匀性和稳定性的评价

丁玮洁，夷 峥#，王梓蒙，石 巍，黄维纲△

1.上海市临床检验中心，上海 200126，2.上海伊华医学科技有限公司，上海 201203

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种可促进性腺发育的糖蛋白激素，主要由胎盘的合体滋养层细胞分泌，其分子结构中包含α、β两个非共价结合的亚基，α亚基由92个氨基酸构成，β亚基由145个氨基酸构成，其中α亚基与黄体生成素(LT)、促卵泡生成素(FSH)和促甲状腺激素(TSH)同源，而β亚基则具有较高的特异性，在分析检测中具有较大价值[1]。HCG对维持早期妊娠和胚胎发育有重要作用，是早期妊娠诊断和孕期监控的常用指标，HCG水平的骤降或大幅波动可能预示着异常妊娠或先兆流产。此外，HCG的检测在其他疾病诊断或筛查中的应用也极为广泛，如妊娠滋养层疾病(绒毛膜上皮癌等)的诊断和监控、妊娠高血压综合征的预测、唐氏综合征的产前筛查等[2-4]。对HCG的检测，不同实验室有不同的检测系统。发展较快、应用较广的方法是对总β-HCG进行检测的化学发光免疫分析法(CLIA)[5]。免疫学分析是基于抗原抗体间特异性反应而建立的检验方法。目前，免疫学分析主要包括酶联免疫吸附测定法、时间分辨荧光免疫测定法、CLIA和免疫层析法等[6-7]。CLIA兼有化学发光分析的高灵敏度和免疫学分析的高特异性。CLIA的灵敏度高(一般达10-16～10-21mol/L)，线性范围宽，样品自身发光，背景干扰低，检测结果精准可靠，但需要专业人员操作，设备及封闭的检测体系无法适用于现场检测[8]。Beckman Coulter Access 2 CLIA系统对总β-HCG的检测属于双位点酶联免疫吸附试验(双抗体夹心法)，采用碱性磷酸酶发光体系。胶体金试纸条检测HCG具有简便、快速且不需要仪器设备的优点，已经被广泛应用于临床尿液或者血清HCG的检测[9]。本研究在常规胶体金定性评价尿HCG质控品的基础上，引入CLIA定量检测质控品HCG水平，以期达到准确监控尿HCG质控品稳定性和均匀性的目的。

1 资料与方法

1.1仪器与试剂 采用Beckman Coulter Access 2 CLIA系统进行HCG定量检测。尿HCG质控品为上海市临床检验中心下发的质控品[上海伊华医学科技有限公司产品(批号：20290602、20290902)]；HCG定量检测采用仪器配套试剂及定标品；尿HCG检测试纸条为艾博生物医药(杭州)有限公司产品；HCG标准品购自上海安普实验科技股份有限公司。

1.2方法

1.2.1HCG CLIA定量检测方法的建立和使用 配制水平为0、30、60、150和200 mIU/mL的尿HCG标准溶液并采用全自动CLIA系统对上述标准溶液进行检测，绘制标准曲线，建立HCG CLIA定量检测方法。然后用建立的CLIA定量检测方法对尿HCG质控品中的HCG进行测定。

1.2.2尿HCG质控品均匀性评价 取10瓶质控品进行检测，每瓶重复检测2次。CLIA：对检测数据进行统计学处理。胶体金法：按试剂盒操作说明书操作，若检测结果符合率为100%，则表明样品均匀性符合要求。

1.2.3尿HCG质控品开瓶稳定性评价 分别于开瓶后1、2、3、5和7 d对尿HCG质控品进行检测，取3瓶质控品，每个样品重复检测2次。CLIA：计算检测结果的平均值，与原始水平平均值进行比较，若差值在3s内，则认为样品是稳定的[10]。胶体金法：若检测结果符合率为100%，则表明样品是稳定的。

1.2.4尿HCG质控品储存稳定性评价 每月取6瓶尿HCG质控品，每个样品重复检测2次。CLIA：计算检测结果平均值，与原始平均值进行比较，若差值在3s内，则认为质控品是稳定的。胶体金法：若检测结果符合率为100%，则表明样品是稳定的。

2 结 果

2.1HCG CLIA定量检测方法的建立 水平为0、30、60、150和200 mIU/mL的尿HCG标准溶液的检测结果依次为(0.10±0.01)、(43.67±0.84)、(88.88±0.58)、(168.09±1.88)、(226.56±4.53)mIU/mL。通过线性拟合，得到线性回归方程：Y=1.087 9X+9.724 1，R2=0.990 8，线性良好。

2.2尿HCG质控品的均匀性 对2个批号(20290602、20290902)的尿HCG质控品进行检测。F临界值F0.05(9,10)=3.02，根据化学放光法的定量检测结果[分别为(98.22±1.89)、(118.8±3.01)mIU/mL]进行计算，F值分别为0.58和2.04，均小于F临界值[F0.05(9,10)=3.02]，这表明尿HCG质控品是均匀的。胶体金法检测这2个批号尿HCG质控品的结果均为阳性，结果符合率均为100%。

2.3尿HCG质控品的稳定性

2.3.2储存稳定性 储存1、2、3、4、5个月时，CLIA检测结果分别为(94.70±1.01)、(100.03±1.75)、(101.21±2.36)、(99.36±2.47)、(81.16±1.87)mIU/mL。储存5个月时质控品HCG水平已经不在稳定性范围(92.55～103.89 mIU/mL)内，表明该质控品不稳定；而采用胶体金法，检测结果仍为100%的阳性，表明该质控品仍是稳定的，但与前4个月时的检测结果相比，阳性条带有减弱的趋势。

3 讨 论

临床上常将HCG作为正常早期妊娠、异位妊娠、葡萄胎和绒毛膜癌等的诊断或鉴别诊断指标。若检测结果为弱阳性，则提示临床医生应进行复查，以避免漏检或误诊。从质量控制的角度而言，对尿HCG质控品的均匀性和稳定性进行评价是很有必要的。

本课题组首先采用Beckman Coulter Access 2 CLIA检测系统对HCG标准溶液进行了检测，根据检测结果绘制了标准曲线，建立了尿HCG CLIA定量检测方法，所得的线性回归方程的线性拟合系数大于0.99，线性良好。然后，本课题组选用上海市临床检验中心下发的室内质控品作为研究对象，采用胶体金法定性检测和CLIA定量检测评价了尿HCG质控品的均匀性和稳定性。本研究显示：该质控品均匀性符合要求；开瓶稳定性符合要求；4个月内两种方法评估储存稳定性，结果均为稳定；储存5个月时，胶体金法评估的结果为稳定，而CLIA评价结果为不稳定。

在产品均匀性及开瓶稳定性的评价中，CLIA和胶体金法评价的结果均一致。储存4个月内的稳定性评价中，两种方法的结果一致(本次研究的对象有效期为4个月);储存5个月时的稳定性评价中，两种方法的结果不一致。采用CLIA评价质控品时，检测结果经计算后已经不在稳定性的范围内，表明该批次的质控品已经失控，而胶体金法评价质控品时，检测结果仍为100%阳性，稳定性符合要求。但是从实际的试纸条反应来看，检测结果与前4个月时的结果相比，阳性条带有减弱的趋势。

胶体金法和CLIA是临床实验室最常用的检测方法，联合采用这两种方法进行检测可有效降低结果中的假阳性[12]。通常HCG的检测方法中胶体金免疫层析法较为常用，主要原因在于该方法操作简便快速，在使用过程中不需要使用其他特殊设备或仪器，同时检测标本便于储存[13]。CLIA具有检测灵敏度高、检测值可定量、可实现自动化检测的特点。在对尿HCG质控品进行均匀性和稳定性质量控制时，CLIA可以更直观地对结果进行判断。在质控品储存时间临近有效期时，CLIA检测灵敏度高的优势更能体现，可以有效提高尿HCG室内质量控制的效果。