湖羊腹腔镜输精技术

高 峰，李心海*，王 岩

(1.徐州生物工程职业技术学院，江苏 徐州 221000；2.江苏汉羊牧业生态科技有限公司，江苏 徐州 221000)

湖羊是江浙地区常见和养殖较为广泛的绵羊品种，繁殖性能优良，是太湖平原重要的家畜之一。湖羊的养殖优势比较明显，具有全年均可发情、每胎多羔、泌乳性能优良、生长发育速度快、耐热耐湿、适合舍饲等优良性状，且肉质细腻，裘皮美观，深受消费者的欢迎，是1种适宜广泛舍饲的优良品种，也是羊品种改良的优质资源[1～5]。腹腔镜输精技术是近几年兴起的1项较为先进的繁殖技术。相比阴道输精和子宫颈口输精，该技术能够在一定程度上减少精子在母体子宫中的运行时间，提高精子的利用率，如果配合同期发情技术，可大幅度提高母羊的受胎率。为了进一步发挥湖羊的优良特性，加快湖羊繁殖新技术的推广，笔者于2020年10月至2021年7月对湖羊的同期发情技术、腹腔镜输精技术进行研究总结，现介绍如下，供同行参考。

1 材料

1.1 试验羊选择年龄在1～2岁龄的经产母湖羊，要求体重50 kg左右、膘情良好、无生殖系统疾病。选择体格健壮、性欲旺盛、体重60 kg左右、无生殖系统疾病的公羊(或者做过阴茎扭转术的公羊)。所有试验羊均提前驱虫、健胃、注射疫苗，避免产生应激反应。公、母羊分开饲养，全舍饲，自由采食和饮水。精饲料选择全价颗粒料，粗饲料选择苜蓿、花生秧、秸秆等青贮饲料。

1.2 药品及器材(1)羊用阴道栓(CIDR)，南非ZOETIS公司生产，规格：20支/包，含孕酮0.3 g/支；兽用孕马血清(PMSG)，宁波三生生物科技有限公司生产，规格：1 000 IU/瓶，批号：110914564；氯前列烯醇(PGF2α)，宁波三生生物科技有限公司生产，规格：2 mL/瓶，批号：110912207，4 ℃条件保存。(2)体视显微镜1架，子宫内输精枪1套，腹腔镜手术台1台。

2 操作方法

2.1 同期发情笔者经过多种药物、剂量的配合试验，最终选择母羊年龄在1～2岁龄左右，CIDR+PMSG+PGF2α法进行同期发情操作，其中PMSG使用剂量为200～240 IU。具体操作步骤如下：(1)阴道栓的选择：目前使用的阴道栓有海绵栓和硅胶栓2种。海绵栓一般使用3 cm左右的圆柱形，吸附孕酮后穿上长15～20 cm的线即可使用[6]。海绵栓价格便宜，但容易出现掉栓和粘附阴道的现象。硅胶栓一般采用高分子食品级硅胶材料制成，整体成型，内置孕酮，前端呈Y型，后端有牵引线以便取栓。硅胶栓通过前端Y形分叉可以将栓体牢固在阴道内，不易掉栓，而且硅胶栓Y型前端设置的小孔可以将孕酮缓慢释放，保证激素的有效使用，不容易造成阴道发炎的现象，不足之处是成本较高，为了确保放栓效果，可以在放栓的第9 d换栓1次。(2)埋栓：先将母羊保定，母羊外阴部用消毒液进行擦拭消毒，将阴道栓前端分叉合拢压入到栓枪内腔，在栓枪前端涂上少许凡士林，将阴道栓放置到阴道深部直至不能深入为止，此时牵引线外露，为避免母羊互相舔咬导致掉栓，可以将牵引线剪短。(3)埋栓之日记为第1 d，埋栓13 d。第13 d肌肉注射PMSG 200～240 IU，第14 d取栓并肌肉注射PGF2α 0.1 mg。撤栓后分别于0～24 h、25～48 h、49～72 h进行发情鉴定。

2.2 发情鉴定发情鉴定采用公羊试情法，用试情布包住外生殖器。试情布一般采用质地较为柔软的棉布，保护公羊外生殖器，使用完及时清洗、日光曝晒后备用。撤栓后用试情公羊每天早、晚各试情1次，并观察记录母羊发情状态。如果母羊被公羊爬跨后出现身体站立不动、接受爬跨、外阴部红肿、流出黏液、尾巴摇动、频频排尿等现象即认定为有发情表现。

2.3 腹腔镜输精

2.3.1 输精前准备工作(1)母羊的处理：输精前母羊空腹禁食24～36 h(可以适当饮水)。手术前将母羊倒立保定于胚胎移植架上，前后肢分别固定[7,8]。胚胎移植架的倾斜角度不宜超过45°，太高容易造成胃内物质倒流。乳房下部的手术部位先用剪刀剪毛，再用毛巾蘸取肥皂水湿润后剃刀刮毛，碘酒消毒皮肤后酒精脱碘。输精前肌肉注射(或静脉注射)速眠灵0.1 mL麻醉(由于每只羊的耐受性不同，手术过程中如羊苏醒挣扎，可以补注0.1 mL)。(2)手术室处理：手术室要求干净、无尘，配备足够照明用电，保证光线明亮，地面硬化易于清理，定期用新洁尔灭喷雾消毒。室内最好配有空调，温度保持在25 ℃左右。手术前用紫外灯照射1～2 h。手术台采用自制的可以单面升降的胚胎移植架，整体采用钢管焊接，承重部位用帆布带连接，手术前用喷雾消毒。(3)器械消毒：手术器械用0.1%新洁尔灭浸泡20～30 min，生理盐水冲洗后用消毒过的纱布擦干备用。每次使用完后要消毒处理，以免交叉感染。手术使用的创巾、纱布以及玻璃仪器清洗后用牛皮纸包好放到高压灭菌锅中消毒。(4)手术人员消毒：手术人员穿着手术服，戴手术帽，手臂用肥皂清洗后酒精消毒。手指甲剪短磨光，不留污物。手掌用肥皂清洗后酒精消毒，佩戴手套。(5)精液处理：鲜精收集后要检查精子活力，使用等温精液稀释液将检测合格的精液进行3～4倍稀释。一般鲜精取1.5 mL左右，经过稀释后每只母羊输精0.2 mL。如果没有专用稀释液，可以采用加入维生素B12的等温生理盐水作为稀释液，效果也不错。

2.3.2 腹腔镜输精操作穿刺部位一般选择在母羊乳头下方14 cm左右，腹中线两侧各穿刺1孔，见图1乳头下方黑点所在位置[9,10]。在左侧乳头下方14 cm左右，偏离腹中线左侧3～4 cm 处插入孔径0.7 cm 的套管针，刺穿皮肤深度2 cm，将套管送入腹腔(注意不要将套管针头刺入太深，以免刺穿其他内脏)。通过套管往腹腔内部充入适量气体，然后关闭气阀，其目的是压迫内脏向前，暴露卵巢和子宫角。向腹腔伸入带有冷光源的内窥镜，观察卵巢上排卵点和红体状态以及数量。此时，在右侧相同位置处插入套管针，拔针后通过套管插入输精枪。用输精枪轻轻挑起卵巢，以便观察排卵点和红体。如果卵巢上有多个红体和排卵点时即可输精，若没有排卵点和红体则不必输精。找到子宫角分叉处，在一侧子宫角距离分叉1/3 处，输精枪前端针头刺入到子宫角内，应感觉到有阻力，缓慢注射1/2精液量，然后拔出针头，将剩余精液注入到另一侧子宫角相应位置，完成输精。腹腔镜输精过程中要注意以下问题：(1)手术过程中注意母羊头颈部弯曲程度不能过高，防止气管不通畅。输精操作后30 min左右母羊会逐渐苏醒，也可以注射鹿醒灵0.2 mL解除麻醉。(2)用输精枪寻找卵巢和子宫角时注意动作要轻。若操作不当，输精枪针头很容易刺破子宫附近的动脉造成大出血。可以采用没有针头的输精枪或者长钳先进行寻找，然后再输精。输精枪针头不要触碰卵巢，以免造成卵泡破裂。(3)输精枪输精位置要选择靠近子宫角基部1/3 处，最好在子宫角中线处。不要选择在子宫角皱褶处，容易造成脱针。(4)输精时要依靠手腕的摆动力量将针头完全扎入到子宫角内，手臂不要动，以免动作过大造成其他不必要的损伤。输精时动作要与羊腹部内脏运动相一致，以免惊扰母羊。(5)输精过程中要随时注意观察输精位置有无精液外流。如有外流说明输入不顺畅，可能扎到皱褶中或子宫角壁上，可以拔出后重新输入。腹腔镜输精手法需要多次操练，熟练掌握后几分钟即可完成输精操作。

实际操作中也可以将子宫角取出体外，在相应位置进行输精，输精完成后用生理盐水冲洗子宫角，在腹腔导入头孢曲松钠1 g，防止发炎和子宫粘连，最后采用可吸收线进行2层缝合，将腹膜、肌肉一起缝合，皮肤单独进行缝合。缝合后，连续3 d肌肉注射头孢曲松钠1 g/次，2次/d。腹腔外输精操作难度较小，但是子宫角暴露在外，开口相对较大，有一定手术风险，对母羊损伤较大。

1、2：穿刺部位图1 腹腔镜输精穿刺部位

2.3.3 母羊输精后护理腹腔镜体内输精对母羊造成的创伤很小，所以一般不需要缝合，仅用碘伏擦拭伤口即可。处理后的母羊可以集中入栏，与没有输精的母羊分群饲喂。输精后不要立即饲喂，一般间隔几个小时后饲喂，而且不宜饲喂过饱，以免对伤口产生压迫，造成伤口外凸。每天随时观察，上、下午各用碘伏消毒1次伤口。如果发现伤口外凸，则需进行手术缝合后消炎处理。

3 小结

通过对腹腔镜输精技术的研究探索，总体而言，腹腔镜输精技术相比传统输精方式克服了母羊子宫颈弯曲程度高、皱褶多、精子难以通过的生理特点，缩短了精子在母羊生殖道运行的距离和时间，节省了精液的使用量。另外，腹腔镜输精过程中能够直接观察到卵巢排卵点和红体的状态，便于输精操作。该技术与同期发情技术结合使用，能够极大限度地利用种公羊的种用价值，使优良基因得以快速扩繁。此外，腹腔镜输精技术对母羊伤害极小，与同期发情技术配合使用，有助于同期配种、同期产羔，缩短空怀期，降低养殖成本，利于管理和防疫，有助于湖羊工厂化养殖的实现。不足之处是腹腔镜输精需要的设备投入较大，对操作人员技术水平要求较高，需要加强人员的技术培训。从长远来看，这项技术的发展前景较大，也将会取代传统输精方法，更加高效地服务于家畜品种的繁殖和改良。