不同浓度6-BA对银杏茎段丛生芽诱导的影响

赵军

摘    要：本试验以MS为基本培养基，采用1.5 mg/L、1.7 mg/L、2.1 mg/L、2.4 mg/L 4种不同浓度的细胞分裂素6-BA对银杏茎段进行丛生芽的诱导。结果表明，当IBA固定为0.2 mg/L时，6-BA取1.7 mg/L诱导率最高，达93.3%。同时发现4月中旬取材的污染率最低，为最佳取材时间。

关键词：银杏;茎段;6-BA ;丛生芽

文章编号：1005-2690（2021）20-0013-02       中国图书分类号：S792.95       文献标志码：B

银杏是最古老的孑遗植物，裸子植物属银杏科现存唯一的种类，被我国列为二级保护植物。银杏生长在水热条件比较优越的亚热带季风区，适合于pH值为5～6的黄壤或黄棕壤，在第四纪冰川后，仅留于中国，后传入日本、韩国、加拿大等国家，目前主要分布在中国的温带和亚热带气候区，遍及我国22个省（自治区），其中主要在四川、贵州等省份，较为珍稀[1]。

银杏树俊俏雄奇，叶呈扇型似鹅掌，奇特古雅，对烟尘、二氧化硫有特别的抵抗力，抗污能力强，适应性强，可做农田防护林、护路林;银杏叶可入药，从银杏叶中能够提取150多种化合物，如银杏黄酮、双黄酮和银杏内酯对心脑血管疾病具有独特功效[2-4]。

随着银杏利用价值的进一步开发，银杏种植已经成为一项经济生态效益双高的产业，一些优良品种已大面积推广。但银杏是雌雄异株植物，以传统种子、扦插、嫁接进行繁殖效率较低，生产周期长，不能满足市场需求。利用植物组织培养技术进行银杏快繁，可以提高成活率，并保持品种原有的优良性状[5]。

目前对银杏的组织培养已有一定的研究，自20世纪30年代以来国内外学者先后开展了银杏胚胎培养、细胞培养、器官培养等研究。银杏组织快繁培养多以茎段为外植体诱导出丛生芽，如陈颖、曹福亮发现茎段可诱导出丛生芽，张祖荣用茎段培养发现6-BA为2.0 mg/L时丛生芽诱导率达81%。多数茎段培养生长素范围为0.2～0.5 mg/L，而细胞分裂素取值范围比较大。本试验分别取1.5 mg/L、1.7 mg/、2.1 mg/L、2.4 mg/L 4个水平的6-BA浓度，探讨当IBA=0.2 mg/L时不同的6-BA浓度对银杏茎段丛生芽诱导的影响，同时探讨不同的取材时间对银杏组织培养污染的影响，以期满足市场的各种需求。

1   试验材料与方法

材料取自于四川宜宾职业技术学院内无病虫害幼嫩健壮的银杏枝條。

1.1   不同6-BA浓度设计

将银杏幼嫩茎段在清水中洗净，于自来水下冲洗30 min，沥干水分，在超净工作台上用75%的酒精消毒，再用0.1%升汞消毒，无菌水冲洗后将茎段切割成1.0～1.5 cm带腋芽的小段，接种在以MS+IBA0.2 mg/L为基本培养基，添加有4种不同浓度6-BA的诱导培养基上，pH值调至5.8。共计4个处理480瓶，设计见表1。

1.2   取材时间对污染影响设计

银杏一般在3月下旬至4月上旬萌动展叶，4—5月为进行组织培养较适宜取材时间。为探究取材时间对污染的影响，在4月1日、4月15日、5月1日、5月15日取银杏茎段进行相同的消毒处理，接种于MS培养基上，共计4个处理480瓶，设计见表2。

以上均置于（25±2） ℃，每天以1 000～2 000 lx光照12 h后进行培养。接种后观察生长状况、丛生芽诱导情况、高度、污染、褐变情况。

诱导率=未污染丛生芽个数/未污染接种外植体个数×100%                                                                    （1）

污染率=污染瓶数/接种瓶数×100%               （2）

褐变率=未污染褐变瓶数/未污染接种外植体数×100%                                                                        （3）

2   结果与分析

2.1   不同6-BA浓度对丛生芽的诱导

接种7 d后外植体开始有生长迹象，出现嫩绿色的生长点，15 d左右茎段开始伸长，由黄绿变为翠绿，腋芽开始萌动变绿，周围幼嫩苞片慢慢散开呈星状，中心生长点凸起。试验20 d后1号处理开始出现翠绿呈五星状的不定芽，其周围的叶片开始向四周生展。35 d后统计结果见表3。

试验发现，在IBA用量恒定时，不同浓度的6-BA对银杏丛生芽的诱导有较大影响，随着6-BA浓度升高，丛生芽诱导开始增加。当6-BA为1.7 mg/L时，丛生芽诱导率达93.3%，但6-BA浓度再增大诱导率会出现下降，6-BA2.4 mg/L时丛生芽诱导率最低为23.3%。

6-BA浓度变化对丛生芽长势有一定影响，随着6-BA浓度增大，丛生芽从翠绿变嫩绿，当6-BA为2.4 mg/L时丛生芽有玻璃化趋势。统计分析说明，当IBA=0.2 mg/L时，试验范围内6-BA浓度1.7 mg/L丛生芽生长最好，极显著优于处理1、3、4。试验中6-BA浓度变化对银杏再生体系的褐变和高度没有影响。

2.2   不同取材时间的污染影响

试验的污染多在接种培养2～5 d后开始出现，表现为培养基表面出现黏状细菌菌斑和黑色、灰色毛状真菌菌斑，培养15 d后的污染情况结果见表4。

结果显示，4月15日取材时污染率最小为5.00%，5月15日污染率最大为44.16%。统计分析表明，4月15日取材极显著优于其余各取材时间。

3   讨论

3.1   6-BA对丛生芽的诱导

丛生芽是由植物器官和愈伤组织发育出来的群体丛生芽苗，试验以银杏茎段离体培养诱导丛生芽，其中使用了生长素IBA（吲哚丁酸）和细胞分裂素 6-BA（6-苄基腺嘌呤）两种激素。在植物组织培养中生长素和细胞分裂素是重要的生长调节物质，具有诱导分化作用，完整植株的形态建成就是它们共同作用调控的，两种激素配合使用时其比值能调节分化方向。

在本次试验中生长素IBA不变为0.2 mg/L时，6-BA为1.7 mg/L时丛生芽诱导率达93.31%，丛生芽翠绿健壮，说明当生长素保持恒定不变时，增加细胞分裂素的濃度有利于芽的分化，但过高试管苗有玻璃化趋势。

3.2   不同取材时间对污染情况的影响

污染是指在植物组织培养过程中，培养基或培养材料上滋生细菌、真菌等微生物，出现培养材料不能正常生长发育的现象。造成污染的原因主要是培养基和器具灭菌不彻底、接种操作不规范等，同时外植体带菌是造成污染的重要原因，外植体是否染菌、染菌多少与取材时间有很大关系。试验结果表明，在规范操作的情况下，银杏离体培养污染率与取材时间有很大关系，在银杏可以取材的时间范围内，以4月15日为最优，随着取材时间向后推移污染率逐渐增大。

3.3   褐变问题

褐变是由于植物体内的酚类化合物被多酚类氧化酶催化，使酚类化合物被氧化成褐色的醌类化合物而形成的。有资料显示，银杏细胞离体培养褐变严重，本次银杏茎段离体培养试验无褐变现象，这可能与银杏取材时间较早取材部位较嫩、酚类次生代谢物累积较少有关。

4   结论

以带腋芽的银杏幼嫩茎段为外植体，在MS+IBA

0.2 mg/L的培养基上培养，梯度添加1.5～2.4 mg/L的6-BA，在试验范围内以6-BA1.7 mg/L丛生芽诱导率最高，达93.3%，为最适浓度。

参考文献：

[1]曹福亮.中国银杏志[M].北京：中国林业出版社，2007.

[2]陈颖，曹福亮.银杏组培快繁和体胚发生技术研究进展[J].林业科技开发，2006（6）：201-204.

[3]张祖荣.银杏组培繁殖及黄酮糖苷的产生[J].四川林业科技，2003（2）：213-215.

[4]郭长禄，陈力耕，胡西琴，等.银杏组织培养及其利用研究进展[J].果树学报，2003（5）：399-403.

[5]邵莉.植物生长调节剂利用手册[M].北京：金盾出版社，2004.