新发现HIV-1 感染者WB 带型特征与CD4+T 淋巴细胞检测分析

吴亚云，孙怡华，虞 莹，范伟林，蒋甜甜，缪阿敏

（江苏省南通市疾病预防控制中心微检科，南通 226007）

艾滋病又称获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），是人体感染人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起的自身免疫功能障碍的严重传染性疾病。人体感染HIV 后，病毒主要攻击CD4+T 淋巴细胞（CD4 positive T-lymphocyte，CD4），使该细胞数量呈进行性或不规则降低[1-2]，CD4 细胞计数结果用于AIDS 的分期和判断疗效[3]；免疫印迹试验（Western Blot，WB）为HIV 抗体确证的金标准[4]，HIV 结构基因主要包括编码包膜蛋白的env 基因、编码聚合酶蛋白的pol基因和编码核心蛋白的gag 基因[5]，由于病毒感染后免疫系统反应存在个体差异且各类蛋白浓度不同，导致相应蛋白抗体检出情况不一致，WB 结果出现多种特征性条带[6]。为了解本地区新发现HIV-1 感染人群的WB 带型特征与感染后免疫缺陷情况，共收集本区域内294例HIV-1 抗体阳性者的WB 带型及免疫细胞的检测结果并进行统计分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取2020 年1—12 月南通市新发现HIV-1 感染且自愿配合采集静脉血进行CD4 细胞检测者，共294例。所有HIV-1 感染者均符合《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》（WS293-2019）中AIDS的诊断标准[3]：（1）至少有2 条env 带（gp41 和gp160/gp120）出现，或至少1 条env 带和至少1 条gag 或pol 带同时出现；（2）符合国家批准的HIV 抗体确证试剂盒提供的阳性判定标准。本研究经南通市疾病预防控制中心医学伦理委员会批准。

1.2 检测方法

1.2.1 HIV-1 抗体确证试验 采用WB 法，仪器为CycleBlot 48 蛋白印迹仪（丽珠公司），检测试剂由安倍生物医学亚太私人有限公司提供。

1.2.2 CD4/CD8/CD3/CD45 淋巴细胞检测 采用流式细胞微球计数法，仪器为BD FACSCalibur 流式细胞仪（美国BD 公司），试剂为原装配套试剂。

1.2.3 试验结果 严格按照《全国艾滋病检测技术规范（2020 年修订版）》和试剂盒说明书判读，实验结果用Excel 表汇总。依据《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》（WS293-2019）[3]将新发现HIV-1 感染者进行分期：CD4 细胞≥500/mm3为无免疫缺陷，350～＜500/mm3为轻度免疫缺陷，200～＜350/mm3为中度免疫缺陷，＜200/mm3为重度免疫缺陷。

1.3 统计学方法 采用SPSS 22.0 进行统计处理，对数据进行Kolmogorov-Smirnov 检验和Levene′s 检验，分析数据的正态性和方差齐性，使用χ2检验进行统计学分析，不满足χ2检验者则进行非参数秩和检验（K-W 检验），以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基本情况 294例感染者年龄15～81 岁，平均（46.58±14.50）岁；男244例（83.0%），年龄15～81 岁，平均（45.00±14.61）岁；女50例（17.0%），年龄33～76岁，平均（54.26±11.24）岁；男女比例约为4.9∶1。不同年龄、性别HIV-1 感染者分组见表1。

2.2 CD4 细胞计数结果 294例感染者CD4 细胞计数为1～1 042/mm3，其中<200/mm3占42.2%、200～<350/mm3占37.4%、350～<500/mm3占13.6%、≥500/mm3占6.8%。

检测对象30 岁以上者CD4 细胞检测值主要集中在<200/mm3和200～<350/mm3两个区间，CD4 细胞检测值在不同年龄组间分布差异有统计学意义（P<0.05），在不同性别之间分布差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 不同年龄、性别HIV-1 感染者CD4 细胞计数组分布（n，%）

2.3 WB 带型结果 294例感染者中，32.3%为全带型（gp160、gp120、gp41、p66、p55、p51、p39、p31、p24、p17），67.7%为非全带型。其中env 基因编码的包膜蛋白抗体gp160、gp120、gp41 的检出率均为100.0%；pol 基因编码的聚合酶蛋白抗体包括p66、p51、p31，检出率分别为96.3%、90.1%和90.5%，平均检出率为92.2%；gag 基因编码的核心蛋白抗体p24 为96.6%、p55 为37.8%、p39 为41.5%、p17 为58.2%，平均检出率为58.5%。

根据年龄、性别对WB 带型进行分析，结果发现p17 和p39 抗体条带在不同年龄分组之间分布差异有统计学意义（P<0.05），≤30 岁组高于其他年龄组。p55 抗体条带女性检出率大于男性（P<0.05），见表2。

表2 不同年龄、性别HIV-1 阳性者WB 带型分布统计（n，%）

2.4 HIV-1 带型与CD4 细胞计数的关系 199例非全带型中，以出现7 条确证条带居多，达83例（41.7%）；出现8 条确证条带者56例（28.1%），分析发现检出条带的总数与CD4 细胞检测值分组分布差异有统计学意义（P<0.05）。env 基因编码蛋白抗体全带检出率为100.0%，pol 基因编码蛋白抗体全带检出率为86.4%，gag 基因编码全带检出率为32.3%。WB 确证条带的主要类型有：全带型32.3%、p55+p39+p17 缺失型35.4%、p55+p39 缺失型19.7%、p55 缺失型4.1%、p55+p17 缺失型3.1%，其他类型条带均不超过5 条，见表3；分析结果显示pol 基因编码全带的检出或缺失，与CD4 细胞分组分布差异有统计学意义（P<0.05），与p55、p31 抗体条带分析结果一致，见表4；p55+p39+p17 条带同时缺失在男性中的构成比更大，但是在不同性别间差异无统计学意义（P＞0.05）；全带型和gag 全带型在≤30 岁年龄组中构成比更高；缺失p55+p39+p17 条带类型在＞50 岁组中占比约50%，见表5。

3 讨论

HIV/AIDS 的诊断原则是以实验室检测为依据，并结合临床表现和参考流行病学资料。HIV 抗体阳性和HIV 病原学检测阳性是确诊HIV 感染的依据；CD4 细胞计数和临床表现是HIV 感染临床诊断分期的主要依据[4]。

表3 WB 主要带型分布与CD4 检测结果的分布（n，%）

表4 不同免疫状况HIV 阳性抗体者WB 带型分布（n，%）

pol 基因编码聚合酶前体蛋白，经切割形成蛋白酶、整合酶、逆转录酶、核糖核酸酶H，均为病毒增殖所必需。pol 基因编码蛋白全带均检出在轻度免疫缺陷状态的检出率明显低于其他分组，其中p51、p31抗体条带也符合此规律，提示pol 基因编码的聚合酶蛋白抗体在疾病进展进入艾滋病期时可能由于病毒大量复制而一过性缺失。

表5 不同年龄、性别分组WB 带型分布（n，%）

env 与pol 基因编码蛋白抗体条带检出率高，而gag 基因编码蛋白抗体条带除p24 外，其他条带检出率较低，与黄妙琳等[7]的研究结果一致，略低于刘萌萌等[8]的分析结果。当疾病进展到艾滋病期，机体免疫力低下，病毒大量复制消耗p24 抗体[9]，WB 法检测时表现为缺失。本研究结果中p24 抗体条带缺失10例，均进入了重度免疫缺陷状态，与李楠等[10]的结果一致；本研究认为虽然p24 抗体条带在各免疫缺陷分组中均维持高检出率，但并未随病程发生明显变化，此时如结合病毒载量及定量抗体试验进一步分析则更利于临床诊疗中判断病情。

当gag 基因编码的核心蛋白抗体全部检出时，全条带均能检出，意味着抗体条带的缺失主要出现在p55、p39 和p17 中。WB 确证实验中主要出现的带型为：（1）全带型；（2）p55+p39+p17 缺失；（3）p55+p39缺失；（4）p55 缺失；（5）p55+p17 缺失。p55+p39+p17 缺失带型在不同年龄组间的分布差异有统计学意义（P＜0.05），＞50 岁年龄组中近半数出现此类型缺失。而各带型在不同免疫缺陷分组下的分布差异无统计学意义（P＞0.05），与国内相关研究[11-12]有所不同。

综上所述，HIV 感染后除了env 基因编码的包膜蛋白抗体呈持续检出状态外，其他蛋白抗体条带会因个体免疫反应的不同产生多种特征性WB 条带的组合，综合分析WB 条带的检出情况和CD4 细胞计数，可协助HIV 感染分期诊断，判断机体的免疫状态。