加味净屑饮合剂质量标准研究

东方梓涵 杨登科 郭媛媛 王飘 彭霜 余晓玲 李江

摘要：目的 建立加味净屑饮合剂的质量标准。方法 采用TLC对白鲜皮、苦参和黄芩进行鉴别。采用HPLC对黄柏酮进行定量分析。结果 可鉴别出白鲜皮、苦参和黄芩且阴性无干扰。黄柏酮在0.32～4.85 μg间，峰面积与进样量呈良好线性关系（Y=390.91X-7.78，R2=0.999 8）。回收率试验中，黄柏酮平均加样回收率为97.06%，RSD为1.80%，其余方法学考察均合格。3批样品检得黄柏酮平均含量为39.25 μg/mL。结论 所建质量标准可用于加味净屑饮合剂的质量控制。

关键词：加味净屑饮;质量标准;白鲜皮;苦参;黄芩;黄柏酮

中图分类号：R285.5   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2021）12-0079-03

“加味净屑饮”方为昆明市中医医院经验方，由水牛角、生地、紫草、白鲜皮、漏芦、鸡血藤、白花蛇舌草、茜草、威灵仙、苍术、苦参、火把花根、黄芩构成。具有凉血散瘀、祛风除湿的功效。对瘀热与风湿搏结于血分，引起的血热证寻常型银屑病疗效确切，临床有效率为70.0%[1]。同时，课题组前期研究表明，本方对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型有较好的治疗作用，其机制可能与抑制IL-17的产生有关[2]。为促进“加味净屑饮”方的临床推广，服务更多患者，课题组前期对“加味净屑饮合剂”的制备工艺进行了考察，本文将对其质量标准进行研究，为申报医疗机构制剂奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260系列高效液相色谱系统（美国安捷伦公司）;Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，迪马科技公司）;AB265-SMETTLER TOLEDO分析天平（瑞士梅特勒-托利多集团）。

1.2 试药 黄柏酮、苦参碱对照品（批号分别为：111923-201604、110805-202010），白鲜皮、黄芩对照药材（批号分别为：120978-202006、120955-201810）均购至中国食品药品检定研究院;加味净屑饮合剂（批号分别为2003171，2003172，2003173）由昆明市中医医院提供;乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 加味净屑饮合剂的制备 按处方比例称取各药味，加水煎煮2次，每次1 h，滤过，滤液合并，浓缩，加入适量防腐剂，即得。

2.2 薄层鉴别

2.2.1 白鲜皮的TLC鉴别 取白鲜皮对照药材1 g，加甲醇20 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液。另取加味净屑饮合剂50 mL，加硅藻土5 g，搅拌，蒸干，研细，加甲醇20 mL，至上述“超声30 min”起，同法制备供试品溶液[3]。另取不含白鲜皮的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。以硅胶G板为吸附剂，各溶液点样量均为5 μL。将点样后薄层板于甲苯-环己烷-乙酸乙酯（3∶4∶6）中展开，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃下显色[4]。结果显示，可检出白鲜皮且阴性无干扰。结果见图1A。

2.2.2 苦参的TLC鉴别 取苦参碱对照品适量，加乙醇，制成1 mg/mL的对照品溶液。另取加味净屑饮合剂50 mL，加濃氨试液调pH至9～10，静置10 min，加二氯甲烷50 mL萃取1次，二氯甲烷层蒸干，加乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液[5]。取不含苦参的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。以2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板为吸附剂，各溶液点样量均为3 μL。将点样后薄层板先于甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（2∶4∶2∶1）中展开，展距8 cm，晾干，在于甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（20∶20∶3∶1）展开，晾干，依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，日光下检视[6]。结果显示，可检出苦参且阴性无干扰。结果见图1B。

2.2.3 黄芩的TLC鉴别 取黄芩对照药材1 g，加甲醇50 mL，密塞，超声30 min，滤过，滤液蒸干，加水25 mL溶解，加盐酸调pH至2～3，加乙酸乙酯萃取2次，每次25 mL，乙酸乙酯层蒸干，加甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液。另取加味净屑饮合剂50 mL，浓缩至25 mL，至上述“加盐酸调pH至2～3”起，同法制成供试品溶液[7]。取不含黄芩的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。以聚酰胺薄层板为吸附剂，各溶液点样量均为6 μL。将点样后薄层板于甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10∶3∶1∶2）中展开[8]，喷以盐酸酸性1%三氯化铁乙醇溶液，日光下检视。结果显示，可检出黄芩且阴性无干扰。结果见图1C。

2.3 含量测定

2.3.1 溶液的配制 取黄柏酮对照品（纯度98.0%）适量，精密称定为0.00330 g，加甲醇定容至10 mL，得323.40 μg/mL的储备液，取储备液5 mL，加甲醇定容至10 mL，得161.70 μg/mL的对照品溶液。另取加味净屑饮合剂50 mL，加硅藻土5 g，搅拌，蒸干，加甲醇50 mL，密塞，称重，超声30 min，补重，滤过，取续滤液40 mL蒸干，加甲醇溶解并定容至10 mL，作为供试品溶液[9]。另取不含白鲜皮的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3.2 色谱条件与系统适用性考察 取“2.3.1”项下各溶液，以Diamonsil C18色谱柱为固定相，乙腈-甲醇-水（23∶23∶54）为流动相，236 nm为检测波长。在流速1 mL/min，柱温30℃，进样量10μL条件下检测[10]。结果显示，供试品色谱中黄柏酮色谱峰与相邻色谱峰的分离度≥4.75，理论塔板数以黄柏酮计不低于5000。结果见图2。

2.3.3 线性关系与范围考察 取“2.3.1”项下储备液，按“2.3.2”项下条件检测，进样体积分别为1、5、10、13、14、15 μL。以峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X）进行线性回归，黄柏酮在0.32～4.85 μg间线性关系良好，回归方程为Y=390.91X-7.78（R2=0.999 8）。

2.3.4 仪器精密度考察 取“2.3.1”项下对照品溶液，按“2.3.2”项下条件连续进样检测6次。结果显示，黄柏酮峰面积的RSD值为0.53%表明仪器精密度良好。

2.3.5 稳定性考察 取“2.3.1”项下对照品溶液和供试品溶液，按“2.3.2”项下条件分别于0、4、8、12 h检测。结果显示，对照品溶液和供试品溶液中黄柏酮峰面积的RSD值分别为0.47%和2.32%，表明上述两种溶液中黄柏酮稳定性良好。

2.3.6 重复性考察 于同批次味净屑饮合剂中取6份样，按“2.3.1”项下制成供试品溶液，按“2.3.2”项下条件检测。结果显示，黄柏酮平均含量为39.19 μg/mL，RSD为1.37%，表明本方法重复性良好。

2.3.7 回收率考察 精密移取已知浓度（黄柏酮质量浓度为44.17 μg/mL）的加味净屑饮合剂25 mL，共6份，每份加入2.4 mL，质量浓度为421.18 μg/mL的黄柏酮对照品溶液，取“2.3.1”项下制备供试品溶液，按“2.3.2”项下条件检测。结果显示，黄柏酮的平均回收率为97.06%，RSD为1.80%，表明本方法回收率良好。结果见表1。

2.3.8 样品测定 取3个批次（批号见表2）样品，按“2.3.1”项下制备供试品溶液，按“2.3.2”项下条件检测。结果显示，黄柏酮平均含量为39.25 μg/mL，各批次间黄柏酮含量的RSD为2.66%，故本研究初步拟定加味净屑饮合剂含白鲜皮以黄柏酮计应不少于27.0 μg/mL（按均值的70%拟定）。结果见表2。

3 讨论

本研究依据《云南省医疗机构制剂研究技术指导原则（中药、民族药）（试行）》对加味净屑饮合剂的质量标准进行了研究，包括TLC鉴别和含量测定。

在薄层鉴别中，本研究对处方中君药和臣药（生地、紫草、百花蛇舌草、火把花根、白鲜皮、苦参、黄芩）的TLC鉴别方法进行了考察，找到了白鲜皮、苦参和黄芩的TLC鉴别方法，同时，对3味药进行了TLC鉴别的耐用性考察。结果显示，在15～35℃、相对湿度为50%～90%环境下均可检出白鲜皮、苦参和黄芩，不同厂家薄层板和点样量的微小变化对鉴别无明显影响。

在含量测定中，由于2020年版《中国药典》未来收录水牛角、百花蛇舌草、火把花根、鸡血藤的含量测定项，本研究未对上述药物中活性成分进行含量测定研究。其余药物中，苍术的指标处方为挥发油（苍术素）不适合选为合剂的质控指标，漏芦的指标成分（β-蜕皮甾酮）在饮片中含量过低（0.04%）也不适合。故课题组对剩余的生地、紫草、白鲜皮、苦参、黄芩、茜草和威灵仙中的指标成分进行了含量测定研究。其中生地所含的梓醇和毛蕊花糖苷因出峰時间过早，难以在供试品溶液色谱中分离;紫草中的β，β二甲基丙烯酰阿卡宁、黄芩中的黄芩素、茜草中的大叶茜草素在含量检测中峰面积过低;威灵仙中的齐墩果酸有阴性干扰。故最终仅剩苦参中的苦参碱和白鲜皮中的黄柏酮。由于苦参碱需用氨基硅胶柱进行检测，相较黄柏酮要求较高，本研究最终选择了白鲜皮中的黄柏酮作为含量测定指标。同时，后期课题组将对苦参中苦参碱的含量测定进行考察，以不断提升和完善加味净屑饮合剂的质量标准，为本品申报医疗机构制剂奠定基础。

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（收稿日期：2021-07-08）