闽南野生白桂木组培快繁体系研究

黄玲

（福建省林业科技试验中心，福建漳州 363600）

白桂木（Artocarpus hypargyreus） 是桑科（Moraceae） 波罗蜜属（Artocarpus） 常绿乔木，零星分布在福建、江西、湖南、广东、云南等地，现已被列为国家三级保护树种[1]。白桂木树形优美，枝叶繁茂，枝和叶柄有锈色柔毛，叶革质，花为单性，雌雄同株，与盾形苞片混生于花序托上，聚花果为球形。白桂木木材坚硬，纹理通直，是建筑、家具的制作良材，具有祛风除湿、舒筋活血、抗炎镇痛等功效[2-5]，其乳汁也可提取硬性胶，果实可生食或作调味用等，因此白桂木具有较好的经济价值和应用前景。由于野生白桂木种子休眠期长，发芽率低，造成其种群数量少，濒临灭绝。野生白桂木组培与快繁是保护白桂木种质资源和恢复白桂木种群数量的重要手段。同时，基于组培快繁技术的白桂木优质种苗培育和推广对于推进乡土适生树种的开发具有重要意义。目前，国内有关野生白桂木组培和快繁方面的报道较少[6,7]。以野生白桂木优树当年生幼嫩枝条为试验材料，研究白桂木组培快繁各阶段的最佳培养基及激素浓度，建立白桂木组培快繁体系，以期为白桂木种苗繁育及开发利用提供科学指导。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料来源于福建省南靖县和溪镇联桥村选择的一株白桂木优树，2020 年3 月取白桂木当年生的半木质化枝条为外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体不同消毒时间

剪去白桂木木质化枝条的叶片，每段带1 个芽剪成3 cm 左右茎段，新芽上有绒毛，先用洗衣粉水溶液轻柔刷洗表面，后将材料放在自来水龙头下冲洗1 h 去除切口处溢出的白色乳汁。清洁后的茎段用75%酒精浸泡并轻微振荡10 s 后用无菌水清洗3 次，再分别用0.1%升汞溶液浸泡振荡5 min、10 min、15 min，再用无菌水清洗5 次。将消毒好的外植体，斜插在培养基中，每处理20 瓶，重复3 次。15 d 后分别统计污染率和存活率。

1.2.2 诱导培养基

利用上述试验最佳处理结果，将消毒好的外植体，斜插于不同处理诱导培养基中，每处理20 瓶，重复3 次。

以不同基本培养基和不同的激素（6-BA、NAA），采用3 因素3 水平的正交设计L9(34)（见表1），设9 个处理，每个处理添加蔗糖30 g·L-1、卡拉胶7.5 g·L-1，pH 5.8，30 d 后统计萌芽率。培养环境温度25±2 ℃，光照强度为2500 ～4000 lx，光照时间10 h·d-1。

表1 外植体诱导试验设计

1.2.3 增殖培养基

基础培养基为MS，添加的6-BA 浓度为0.4 mg·L-1、0.6 mg·L-1、0.8 mg·L-1，添加的NAA 浓度为0.1 mg·L-1、0.2 mg·L-1，按照完全随机试验设计。

1.2.4 生根培养基基础培养基为MS，添加的IBA 浓度为0 mg·L-1、0.5mg·L-1、1.0 mg·L-1，添加的IAA 浓度为0.1 mg·L-1、0.2 mg·L-1，按照完全随机试验设计。

1.2.5 数据处理

应用GPS 分析软件进行数据的统计和LSD 多重比较分析。

2 结果和分析

2.1 不同消毒时间处理外植体的效果

表2 是白桂木的外植体消毒时间处理的效果。从表2 可看出，在污染率和存活率指标上，不同消毒时间处理间存在显著差异，使用0.1%升汞溶液消毒15 min 的污染率最低，为36.67%，但存活率也最低。综合污染率和存活率指标，使用0.1%升汞溶液消毒时间10 min 效果较佳，存活率最高为26.67%。

表2 外植体不同消毒时间效果

2.2 不同培养基对外植体诱导的影响

不同培养基、激素浓度对外植体诱导培养的影响结果如表3 所示，三个因素对试验结果影响的主次顺序为6-BA ＞NAA ＞基本培养基。由表3 可知，三种基本培养基中以MS 培养基萌芽率最高，6-BA激素以0.2 mg·L-1水平的萌芽率最高，NAA 以0.2 mg·L-1水平的萌芽率最高，因此，通过极差分析白桂木外植体诱导的最适宜培养基为：MS+ 6-BA 0.2 mg·L-1+ NAA 0.2 mg·L-1。方差分析结果（表4） 表明，基本培养基、6-BA 和NAA 对白桂木外植体萌芽率的影响均达极显著水平。

表3 不同培养基及激素浓度对白桂木外植体诱导的极差分析

表4 正交试验方差分析表

2.3 增殖培养基的筛选

从表5 可知，相比不加NAA 的增殖培养基，相同6-BA 浓度时添加0.1 mg·L-1NAA 能显著提高白桂木增殖倍数和生长状况。当NAA 浓度为0.1 mg·L-1时，添加0.6 mg·L-16-BA 可获得最高的增殖倍数。同时，该条件下，不定芽长势良好，叶深绿、茎较粗（图1）。因此，白桂木增殖最适宜培养基为：MS+6-BA 0.6 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1。

表5 不同激素水平对白桂木增殖及生长的影响

图1 白桂木的继代苗

2.4 生根培养基的筛选

表6 不同激素水平对白桂木生根的影响

高，达91.67%。综合得出，白桂木生根最适宜培养基为：1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1+活性炭0.5 g·L-1，其根数为3 ～4 条，生根苗生长健壮（图2）。

图2 白桂木的生根苗

3 小结与讨论

通过试验，筛选出白桂木外植体使用0.1%升汞溶液最佳消毒时间10 min，存活率最高为26.67%；外植体诱导的适宜培养基为：MS+6-BA 0.2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1，萌芽率较高；增殖适宜培养基为：MS+6-BA 0.6 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1，增殖倍数达3.22；生根适宜培养基为：1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1+活性炭0.5 g·L-1，生根率达91.67%。

目前国内有关白桂木组培育苗技术的研究仍较少。黎国运等[7]综合探讨了以白桂木种子和幼嫩枝条为外植体的组培育苗技术，本试验中的培养基中激素浓度更低，且组培苗生根率也更高，这可能与白桂木品种差异以及激素种类等有关。同时，在研究过程中还发现白桂木幼嫩枝条组织培养过程中的增殖阶段容易褐化，因此建议在降低光照强度下进行培养。此外，白桂木生根苗的植株单株叶片面积偏大，在组培瓶中空间占比大，增加了组培苗培育成本，有关优化组培苗移植和炼苗等技术规程有待进一步研究。