CLCNKA(rs1805152)基因多态性与原发性高血压患者左心室肥厚及早期肾功能损害的相关性▲

韦朝俊 王 向 王 尧 刘大男

(贵州医科大学附属医院心血管内科，贵州医科大学医学科学研究所，贵阳市 550004，电子邮箱：1528481469@qq.com)

原发性高血压是多个微效基因和环境因素相互作用的结果，研究表明，CLCNKA基因多态性可增加机体水钠潴留，参与原发性高血压的发生与发展，是原发性高血压重要的易感基因之一[1-3]，但目前关于CLCNKA基因多态性与原发性高血压靶器官损害的相关性的研究仍较少。左心室肥厚(left ventricular hypertrophy，LVH)和肾功能损害是原发性高血压发生、发展的独立危险因素，与原发性高血压患者的预后密切相关[4]，明确基因与原发性高血压靶器官损害的相关性有助于理解两者间的相互作用机制。本研究探讨CLCNKA基因单核苷酸多态性与原发性高血压患者LVH及早期肾功能损害的相关性，为原发性高血压患者靶器官损害的防治提供临床思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年1月至2020年2月在贵州医科大学附属医院心血管内科门诊及住院部诊治的178例原发性高血压患者作为研究对象，其中男性92例，女性86例，年龄23～81(60.0±13.0)岁。纳入标准：(1)原发性高血压的诊断符合《中国高血压防治指南(2018年修订版)》[5]中的相关诊断标准[收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg]，受试者测量血压前1 d及测量当天禁止饮用咖啡、浓茶、酒精及其他影响心脏自主神经功能的药物，避免剧烈活动及情绪波动；(2)临床资料齐全。排除标准：(1)继发性高血压患者；(2)合并其他影响心脏自主神经、脉压及血管顺应性疾病的患者；(3)脑卒中、肿瘤、肝肾衰竭及风湿免疫系统等疾病患者。本研究经中南大学湘雅三医院(这是一个全国多中心的临床研究，采用的是项目批准的伦理委员会信息)伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 临床资料的收集：收集所有患者的性别、年龄、吸烟史(每天吸烟1支以上，连续或累计6个月)等一般资料，并进行体格检查，测定身高、体重、收缩压和舒张压，计算体质指数；嘱患者收集24 h尿液，采用放射免疫法检测24 h尿微量白蛋白；采用酶比色法检测患者的TG、TC、HDL-C、LDL-C、24 h尿钠。

1.2.2 左心室质量指数的检测：由同一技术人员采用彩色多普勒超声诊断仪测量患者的左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)、室间隔厚度(interventricular septum thickness,IVST)、左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall,LVPW)以及舒张期后壁厚度(posterior wall thickness,PWT)按照Devereux校正公式[6]计算左心室质量(left ventricular mass,LVM)=0.8×10.4×[(IVST+PWT+LVEDD)3-LVEDD3]+0.6，体表面积(body surface area,BSA)=0.0061×身高+0.0128×体重-0.1529。左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)(g/m2)=LVM/BSA。LVH诊断标准：男性LVMI>115 g/m2，女性LVMI>95 g/m2。

1.2.3 DNA提取：使用由北京益序医疗科技有限公司提供的一次性基因采样盒(批号：1905G05)采集患者口腔颊黏膜脱落细胞，采用柱式质粒DNA小量抽提试剂盒提取样本DNA，置于-80℃超低温冰箱中保存备用。

1.2.4 PCR扩增：使用DNAMAN 8.0设计引物，由北京益序医疗科技有限公司合成，上游引物：5′-ATGGAGGGCTGTGGGGGC-3′，下游引物：5′-GACGGCAAGAGCCTCTCC-3′。PCR试剂盒购自北京康润诚业生物科技有限公司(批号：Lot#S06FC021)，反应体系为30 μL，由8 μL 16032 Panel Mix、10 μL 3XT酶、5 μL浓度为12 ng/μL的样本DNA和7 μL的无酶水组成；反应程序：95℃ 3 min;95℃ 30 s；60℃ 4 min,17个循环；72℃ 4 min；10℃保存。

1.2.5 基因型鉴定：PCR产物经AMPure XP Beads纯化，在Illumina X10高通量测序平台进行基因型诊断。

1.3 统计学分析 采用SPSS 26.0软件进行统计学分析。计量资料以(x±s)表示，两组间比较用t检验，多组间比较用单因素协方差分析；计数资料以例数表示，比较采用χ2检验；采用Logistic回归模型分析检验指标间的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 患者的一般资料 根据LVMI将患者分为非LVH组143例与LVH组35例，两组患者的吸烟史、TG、TC、LDL-C、24 h尿钠、收缩压、舒张压水平比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)；而相较于非LVH组患者，LVH组患者的女性比例更高、年龄更大、体质指数更低、HDL-C水平更高、CLCNKA基因rs1805152位点AA基因型的比例更高(均P<0.05)。见表1。

表1 两组患者一般资料的比较

组别nLDL-C(x±s,mmol/L)24 h尿钠(x±s,mmol/L)收缩压(x±s,mmHg)舒张压(x±s,mmHg)rs1805152位点基因型(n)GA/GG/AALVH组352.43±1.02128.43±59.43145.23±23.6881.11±22.548/2/25非LVH组1432.48±1.03136.24±67.34140.25±21.8883.50±13.5370/8/65 χ2/t值-0.125-0.6091.186-0.6017.589P值0.9010.543 0.2370.5510.006

2.2 CLCNKA基因rs1805152位点各个基因型间24 h尿微量白蛋白水平的比较 CLCNKA基因单核苷酸多态性rs1805152位点GA基因型78例，GG基因型10例，AA基因型90例，各个基因型间24 h尿微量白蛋白水平的差异具有统计学意义(H=6.482，P=0.039)，其中CLCNKA基因rs1805152多态位点AA基因型的24 h尿微量白蛋白水平高于GA基因型与GG基因型(P<0.05)，见表2。

表2 不同CLCNKA基因rs1805152位点各个基因型原发性高血压患者24 h尿微量白蛋白水平的比较[M(P25，P75)，mg]

2.3 Logistic回归分析 以是否发生LVH为因变量(LVH=0，非LVH=1)，以性别、年龄、体质指数、HDL-C水平和rs1805152基因型作为自变量(年龄、体质指数以连续变量纳入，其余变量的赋值见表3)，进行Logistic回归分析。结果显示：年龄升高与rs1805152 AA基因型为原发性高血压患者发生LVH的独立危险因素(均P<0.05)。见表4。

表3 变量赋值表

表4 原发性高血压患者发生LVH的Logistic回归分析

3 讨 论

LVH是原发性高血压性心脏损害的主要表现，目前原发性高血压导致LVH的具体机制尚未完全清楚，既往研究表明，遗传、肥胖、高龄、高钠膳食及女性是原发性高血压患者发生LVH的主要危险因素[7-9]。CLCNKA(rs1805152位点)基因属于CLC基因家族的成员，是重要的盐敏感基因之一，其参与CLCNKA氯离子通道的形成及氯化钠进出肾脏细胞的调节，与原发性高血压的发生和发展关系密切[10]。CLCNKA基因突变引起的慢性血容量扩张使个体具有罹患盐敏感性原发性高血压的倾向，有研究显示CLCNKA通道可被缬沙坦、奥拉沙坦阻断，从而起到降低血压的作用[11]。有研究表明，CLCNKA基因多态性不仅与原发性高血压的发生有密切联系，而且与心力衰竭的发生有明显相关性[12]。但是关于CLCNKA基因多态性是否与LVH的发生相关的研究较少。本研究结果显示，相较于非LVH组患者，LVH组患者的女性比例更高、年龄更大、体质指数更低、HDL-C水平更高，且CLCNKA rs1805152位点AA基因型的比例更高(均P<0.05)，推测rs1805152位点基因多态性可能与原发性高血压合并LVH有关。同时，本研究Logistic回归分析结果显示，CLCNKA基因rs1805152多态位点AA基因型是原发性高血压患者发生LVH的独立危险因素(P<0.05)，说明携带CLCNKA基因rs1805152多态位点AA基因型的原发性高血压患者较携带GA、GG基因型的患者发生LVH的可能性更大，但是目前遗传因素导致LVH的具体机制仍不清楚。此外，本研究结果还显示，高龄为原发性高血压患者发生LVH的独立危险因素(P<0.05)，与既往研究结果相似[13-14]，但是未显示肥胖、性别、体质指数对LVH的发生有影响，这与上述既往研究结果不一致，可能与不同研究的研究人群不同及种族差异、样本量等因素有关。

原发性高血压导致的早期肾功能损害指的是临床蛋白尿出现之前的微小肾功能损害，既往研究提示微量白蛋白尿是早期肾功能损害的敏感指标[15]。原发性高血压盐敏感者早期肾功能损害程度远高于非盐敏感者[16]。本研究结果显示，CLCNKA基因单核苷酸多态性rs1805152位点各个基因型间24 h尿微量白蛋白水平的差异具有统计学意义，其中CLCNKA基因rs1805152多态位点AA基因型患者的24 h尿微量白蛋白水平高于GA基因型和GG基因型(P<0.05)，提示携带CLCNKA基因rs1805152多态位点AA基因型的原发性高血压患者发生早期肾功能损害的可能性更大。有研究表明，原发性高血压患者中，LVH与尿微量白蛋白水平显著相关，尿微量白蛋白水平可能是LVH的一个预测因子[17-19]。但是本研究未比较原发性高血压合并与未合并LVH患者24 h尿微量白蛋白水平的差异，因此尿微量白蛋白水平对原发性高血压患者LVH的影响还有待进一步研究。

综上所述，CLANKA基因多态性可能与原发性高血压合并LVH及早期肾功能损害有关，其中rs1805152位点AA基因型患者可能更容易发生LVH和早期肾功能损害。但本研究存在一定局限性，如样本量较小、检测指标较少等，研究结论还有待进一步证实。