类风湿关节炎患者血清白细胞介素-32、白细胞介素-17和白细胞介素-10表达水平及临床意义

安 新，冯 超，高利常

(开滦总医院检验科，河北 唐山 063000)

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性复杂难治的自身免疫性疾病，以外周对称性多关节慢性炎症为主要特征，患者关节肿胀疼痛、功能障碍，晚期出现不同程度的畸形，甚至导致严重残疾[1-3]。我国RA发病率为0.32%～0.36%，且其发病机制尚不完全清楚。近年来研究[4]表明，促炎、抗炎细胞因子水平的异常变动及免疫调节功能紊乱是可能是引起RA的重要原因。白细胞介素(Interleukin，IL)-32是一种炎症细胞因子，存在6种剪接变异体，主要功能是诱导IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF)-α、促分裂原活化蛋白激酶和趋化因子等炎性介质的异常表达，在自身免疫方面起重要作用，可诱导T细胞凋亡，参与多种疾病过程[5-6]。IL-17是一种促炎细胞因子，主要功能就是诱发炎性反应因子和趋化因子的产生，促炎特性是其宿主保护能力的关键，但不受限制的IL-17信号与免疫病理学、自身免疫性疾病和癌症进展相关[7-8]。IL-10是RA中一种重要的因子，由Th2细胞、巨噬细胞、B细胞等多种细胞合成并分泌，具有免疫刺激和免疫抑制双重作用，在宿主防御过程中起重要的调节免疫应答作用，主要作用于白细胞[9]。超敏C反应蛋白(Hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)是一种急性时相反应蛋白，临床作为炎性标志物的检测指标，机体发生损伤及炎症反应时含量明显升高，能迅速激活补体反应，促进吞噬作用[10]。本研究旨在探讨RA患者血清中IL-32、IL-17、IL-10因子的表达情况，及三者与RA的临床指标hs-CRP、类风湿因子(Rheumatoid factor，RF)、红细胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate，ESR)、抗环瓜氨酸肽(Cyclic citrullinated peptide antibody，CCP)抗体的相关性，为免疫学上阐明RA发病机制及RA诊治提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2020年4月至2021年4月期间临床确诊为RA的患者115例为RA组，其中男性25例，女性90例；年龄20～82岁，平均(56.52±20.38)岁。选取同期健康体检者78例为对照组，其中男性18例，女性60例；年龄32～77岁，平均(55.2±19.79)岁。两组患者年龄和性别比较差异无统计学意义(均P>0.05)。RA确诊依据美国风湿病学会诊断标准，根据28个关节疾病活动度评估指数(DAS28)评分又分为两个亚组：得分≥2.6分的病例为RA活动期组，共90例；得分<2.6分的病例为RA缓解期组，共25例。排除标准：①所有研究对象4周内无相关药物治疗史；②高血压、糖尿病、血液病、肿瘤、心脑血管疾病者；③近1年受外伤或手术者；④伴有器官功能障碍者；⑤重度感染及其他免疫性疾病者。所有观察对象均自愿参加本研究，并签署知情同意书。本研究已通过开滦总医院医学伦理学委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 样本采集：采集所有研究对象空腹静脉血2管。第一管采集5 ml，2500 g离心10 min，收集血清并分装，-70 ℃保存待测。另一管采集1.6 ml全血，加3.8%柠檬酸钠0.4 ml抗凝，用于ESR测定。

1.2.2 样本检测：血清IL-32、IL-17和IL-10用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，试剂盒(批号依次为E11122602、E12013008和E120130576)购自上海百沃生物科技有限公司。抗CCP抗体试剂盒(批号：EC121001)购于上海科新生物技术股份有限公司，严格按说明书操作。采用BIO-RAD 680型酶标仪(美国伯乐)，测定450、630 nm波长处光密度(OD)值。以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，利用标准曲线法计算样本浓度。RF和hs-CRP检测均采用免疫比浊法，由全自动生化分析仪(日立7600-020)检测。ESR使用动态血沉压积测试仪测定(北京赛科希德科技发展有限公司SD-1000)。

2 结 果

2.1 两组血清IL-32、IL-17、IL-10水平比较 见表1。RA组血清IL-32、IL-17、IL-10水平显著高于对照组(均P<0.05)。

表1 两组血清IL-32、IL-17、IL-10水平比较

2.2 RA患者不同时期及对照组血清IL-32、IL-17、IL-10水平比较 见表2。RA活动期组IL-32、IL-17、IL-10水平高于RA缓解期组及对照组(均P<0.05)。RA缓解期组与对照组IL-32、IL-17、IL-10水平比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。

表2 RA患者不同时期及对照组血清IL-32、IL-17、

2.3 两组患者抗CCP抗体、RF、ESR、hs-CRP水平比较 见表3。RA组患者抗CCP抗体、RF、ESR、hs-CRP水平高于对照组(均P<0.05)。

2.4 RA患者血清IL-32、IL-17和IL-10水平与抗CCP抗体、RF、ESR、hs-CRP相关性分析 见表4。Spearman相关性分析显示，RA患者血清IL-32水平与抗CCP抗体、RF、ESR、hs-CRP呈正相关(均P<0.01)；RA患者血清IL-17水平与RF、hs-CRP呈正相关(均P<0.05)；RA患者血清IL-10水平与ESR、hs-CRP呈正相关(均P<0.05)。

表3 两组患者抗CCP抗体、RF、ESR、hs-CRP水平比较

表4 RA患者血清IL-32、IL-17和IL-10水平与抗CCP抗体、RF、ESR、hs-CRP相关性

3 讨 论

研究[4]发现，RA发病与机体内促炎、抗炎细胞因子的异常表达以及免疫调节异常相关，维持促炎细胞因子与抗炎细胞因子之间的平衡被认为是RA致病机制的核心。

IL-32存在广泛，如NK细胞、T细胞、上皮细胞等，可诱发所在细胞产生多种细胞因子，参与炎症级联反应、细胞凋亡和细胞分化等过程，对机体正常免疫应答发挥调节作用[11]。近年来研究发现IL-32与RA发生密切相关。Joosten等[12]发现，RA患者滑膜组织中IL-32含量较高。桂明等[13]报道，RA患者外周血IL-32含量较高，并且升高水平与RA病情严重程度及骨质破坏程度密切相关，提示IL-32参与了RA病理过程。本研究发现，RA患者血清IL-32水平显著高于对照组，活动期显著高于缓解期，说明IL-32可能参与了RA的发生，并与疾病严重程度密切相关。同时，RA患者IL-32与抗CCP抗体、RF、hs-CRP、ESR水平呈正相关，并且随着RA病情加重而表达增强，缓解期有所下降。由此可见，IL-32在RA疾病进程中具有抗炎功能，随着病情减轻到消失，逐渐恢复正常水平。

有研究[14-15]表明，IL-17在损伤、生理应急和感染反应中，在维持健康方面具有重要的缓解和组织依赖性作用，且在RA炎症形成中可能发挥了更为关键的作用。IL-17可能通过增强促炎及炎症相关细胞因子表达扩大病灶范围，进而导致关节炎的典型症状[16]。李茜等[17]发现，RA患者血清IL-17水平与RA病情严重程度高度相关，推断IL-17可以作为判断病情严重程度的指标。王小超等[18]研究发现，不同程度的骨关节损害患者血清IL-17水平有差异，与骨关节损害程度呈正比，提示IL-17早期参与了RA的发生，并在骨关节炎症和损害过程中持续发生作用。本研究也发现，RA活动期组患者血清IL-17水平显著高于RA缓解组和对照组，同时RA组患者血清IL-17水平与RF、hs-CRP呈正相关，说明IL-17在RA发病不同阶段差异性表达，可以推断其表达水平与骨关节损害程度相关。

IL-10既可发挥抗炎作用，也可发挥促炎作用[19]。黄建军等[20]研究发现，RA患者病变关节的关节液中IL-10大量表达。朱江等[21]发现，IL-10低水平组RA动物关节肿大程度显著高于IL-10高水平组，表明此过程中发挥抗炎作用。另有研究发现RA患者血清和滑液中IL-10表达水平均较高，但也有报道称RA活动期患者IL-10水平降低[22]。本研究证实血清IL-10水平只有在RA活动期组升高，在RA缓解期组并不高。而且，IL-10水平只与ESR、hs-CRP水平呈正相关，提示IL-10此时可能具有促炎作用。由此推测，缓解期的IL-10可能兼有抗炎和促炎双重作用。IL-10相对缺乏时，就无法抑制炎症反应[23]。因此，通过免疫干预提高IL-10水平就能降低炎症强度，对修复关节和保护软骨有积极作用。

CRP在临床上通常是区别细菌感染和病毒感染的一个重要指标。但其在正常检测范围内对低程度炎症反应预测不灵敏。hs-CRP免疫比浊等技术使检测灵敏度得到了很大提高。hs-CRP水平在RA诊断上意义重大[24]。本研究发现，RA活动期组患者hs-CRP水平显著高于RA缓解期组及对照组，其血清水平与病情高度相关，说明hs-CRP在RA患者的疗效及病情预后评估中有重要意义。

综上所述，RA患者血清IL-32、IL-17、IL-10等细胞因子水平显著升高，提示它们在一定程度上参与RA的病理过程；同时，活动期RA患者IL-32、IL-17、hs-CRP水平高于缓解期，说明上述因子与疾病严重程度及活动性高度相关，在RA炎症及关节骨破坏过程中起重要作用，可作为判定RA病情的辅助指标。