猫细小病毒病的研究进展

王志强，任建炜，温建新

(青岛农业大学动物医学院，山东青岛 266109)

猫细小病毒病(Feline panleukopenia，FP)又称猫泛白细胞减少症、猫瘟、猫传染性肠炎，是由猫细小病毒(Feline Panleukopenia Virus，FPV)引起的一种急性高度接触性传染病，1岁龄以下的猫最容易感染，尤其是3～6月龄的幼猫，病猫主要表现为机体内白细胞数量急剧减少，FPV还对猫科动物的消化道系统造成巨大伤害，病猫表现出严重的消化道症状[1]。FP已经被欧洲、美洲的多个国家定义为猫最严重的传染病之一。在我国FP全年均能发病，在每年的冬季及初春季节多发。目前FP的病例量占猫传染病病例量的60%以上，是名副其实的猫科动物的头号杀手。

1 猫细小病毒病的临床症状

FPV侵入动物机体后通常会有1周左右的潜伏期，有的动物会长期少量带毒[2]，当外界环境出现变化或出现应激反应时则发病。由于个体因素、外界环境因素、病毒毒株因素等影响，患病猫表现的临床症状也多种多样，通常会呈现双相型热，先升至40 ℃左右的高温，随后体温恢复正常，1～2 d后又升至高温状态。发病早期通常会出现精神沉郁、食欲减退，甚至废绝、腹泻的症状，紧接着会出现脱水、贫血、顽固性腹泻、呕吐的症状，之后会出现便血、吐血、眼球下陷、体温降低等严重症状，此时查血常规会发现白细胞数量降至2.0×109/L以下(正常为5.50×109/L～19.50×109/L)，淋巴细胞和嗜中性白细胞减少的数量最多[3]，接着白细胞会进一步降低，当白细胞数量降至1.0×109/L以下时，死亡率接近100%。最急性的病例常常会不见任何症状而突然死亡，常被怀疑为中毒死亡。妊娠母猫常会表现流产的症状，因为FPV可透过血胎屏障进行垂直传播感染[2]。

2 猫细小病毒病的病理变化

被FPV感染的猫，尸体外观通常为被毛粗乱，暗淡无光，出现眼球下陷，皮下组织干燥的脱水症状。剖检的病理变化主要在消化道，表现为胃肠扩张，肠黏膜充血出血、坏死，肠系膜水肿。空肠和回肠处出现渗出，肠绒毛变短或消失，肠壁增厚。肠系膜淋巴结肿大、充血出血，甚至坏死，呈现大理石样花纹。肝脏、肾脏等实质器官变化不是很明显，只是出现充血症状，脾脏会有针尖样出血点[4]。

3 猫细小病毒病的临床检测方法

FP的检测方法有快速试纸板检测法、血凝和血凝抑制(HA-HI)试验、电镜观察、免疫荧光试纸检测、实时荧光PCR检测等，但基于操作的方便性及营收状况，主要的临床确诊方法有胶体金试纸板检测、免疫荧光试纸检测、实时荧光PCR检测等方法。

3.1 胶体金试纸板检测

胶体金试纸板检测实际是利用胶体金免疫层析法的技术，以胶体金作为示踪标志物，样本抗原滴加到样品孔内，发生层析作用至胶体金标记的抗体处与之结合，形成金标抗原抗体复合物，在检测线处与固定抗体结合出现结果，层析至对照线处与二抗结合出现对照结果[5]。此方法操作简单，检测结果出具迅速，约5～10 min即可判定结果，当病毒含量较低时，容易出现假阴性或淡淡的一条标记，容易导致宠物医生漏诊，胶体金试纸板检测方法逐渐被替代。

3.2 实时荧光PCR检测

实时荧光PCR检测是通过将标有荧光素的Taqman探针与处理后的抗原DNA、正反向引物混合，进行DNA扩增，扩增后DNA酶会将Taqman探针切断，使得荧光素游离在体系内，进而通过特定光的照射，产生荧光，随着反应的进行，荧光会呈现指数式增长，进而求得Ct值[6]。实时荧光PCR的检测结果十分准确，即使较低含量的病毒亦可以检出，并且可以同时检测多个样本，但目前仪器购买和使用成本均较高，市面上常见的8孔仪器大约需要6万元，试剂均价也在100元/个左右，并且操作耗时相对较长，宠物医院接受率较低，目前只有少数医院使用。

3.3 免疫荧光试纸检测

免疫荧光试纸检测是一种新兴的检测技术，具有操作简单、准确率相对较高的优点，目前被大多数医院接受。免疫荧光试纸检测采用的是荧光免疫层析技术，该试纸板由样品垫、含荧光微球交联的检测抗体标记垫、含二抗的硝酸纤维素、吸水纸及底板组成。具体原理如下：在加样孔处滴入抗原溶液，抗原溶液沿层析方向扩散至标记垫处，此时抗原被抗体结合形成抗原-抗体-荧光微球复合物，该复合物继续扩散至硝酸纤维素膜处，与二抗结合，形成二抗-抗原-抗体-荧光微球复合物，未被二抗标记的复合物继续层析被吸水纸吸收，最后根据荧光信号强度可以检测出抗原的浓度，此法原理与胶体金试纸板类似，不过相比较而言，它的灵敏性比胶体金试纸板高很多。有研究表明，免疫荧光试纸板的灵敏度是普通胶体金试纸板的10倍，免疫荧光试纸板比实时荧光PCR检测节省大量金钱成本和时间成本，正在被快速普及[7]。

4 猫细小病毒病的治疗

临床上对FP的治疗一般都遵循对症治疗原则，采用镇痛消炎、适当止吐、强力止泻、营养支持、补液补钾的治疗方法。患病猫在前1～2 d的治疗是非常关键的，如果治疗得当，病情将会逐渐好转，体内白细胞数量将恢复正常，预后也将会良好；倘若治疗不当或者遇到强毒株感染，在第3～4 d患猫就会出现便血、吐血等症状，白细胞数量会迅速下降至3.0×109/L以下，甚至会低至1.0×109/L，之后常常会愈后不良；并且被FPV感染后的第2～3 d，患猫就可对外界排毒，造成其他宠物猫的感染，最长可达30 d左右[8]。所以住院治疗既是治疗的需要，也是对家庭环境的保护。被FPV感染后的治疗方案分为特异性治疗和对症治疗。

特异性治疗主要是抗病毒治疗，首选是猫重组干扰素-ω(Feline recombinant interferon-ω, feIFN-ω)、FPV单克隆抗体等生物制品。临床试验发现feIFN-ω具有广谱的抗病毒作用，对FP的治疗有较好的效果，它主要通过与靶细胞表面的受体结合、调节机体的免疫效果、强化免疫细胞活性、诱导细胞产生抗体蛋白，从而从多方面抑制病毒的复制。feIFN-ω最早是在1994年由日本批准生产的用于猫杯状病毒治疗的生物制剂，慢慢的经过多年发展，也被用作FP病例的治疗[9]。在国内的试验研究证实，feIFN-ω对FPV有很好的临床效果，feIFN-ω对 γ-球蛋白和免疫球蛋白的产生有较好的刺激作用[10]；其次，特异性治疗可以选用FPV单克隆抗体和FPV血清等。目前常用的FPV单克隆抗体的效果不如CPV单克隆抗体效果已成为兽医界的共识，许多生物制品厂家也在加速研发，并进行大量临床投放试验，其临床效果还有待证实。

对症治疗主要是辅助性抗菌治疗，这是治疗方案中重要的一环，FPV入侵消化道系统，会给肠道带来巨大的破坏作用，使得黏膜屏障损伤，有害菌会轻易的进入血液循环系统，造成败血症的发生，所以使用抗菌药物会起到至关重要的作用。常用的药物有头孢菌素类药物如头孢噻呋、头孢喹肟等，氟喹诺酮类药物也可以起到较好的效果[11]，这些药物对肠道内的厌氧菌、革兰氏阴性菌的作用效果良好，对败血症的预防起到关键作用。针对呕吐腹泻的症状，常采用强力止泻、适度止吐的方法，避免电解质的大量流失，止泻药物常采用穿心莲注射液等药物，可以在短时间内达到止泻的效果。止吐一般采用柠檬酸马罗匹坦等药物，但应该注意使用的用量和频率，过分的止吐会导致患猫出现肠套叠、肠梗阻等症状，更容易引起败血症的发生，所以在治疗时应该时常关注宠物状态，每天用B超进行扫查，降低发生率。对于补液常采用静脉滴注5%的葡萄糖溶液、0.9%的生理盐水溶液和乳酸林格溶液进行补液，静脉补液可以较好的补充丢失的水分，调节PH值，补充流失的电解质；补液的量会参照患猫的脱水程度进行判定，通常为80～100 mL/kg；当血液胶体渗透压出现变化时，还要对血浆蛋白进行补充，常用的有白蛋白和球蛋白等[12]。当出现便血症状时需要对其进行凝血治疗。

5 猫细小病毒疫苗的研究进展

5.1 传统疫苗概述

FP主要是通过注射疫苗的方式进行预防。目前预防FP的传统疫苗主要有两种，一种是美国硕腾公司生产的“妙三多”疫苗，此疫苗为灭活苗，不易产生病毒扩散的风险；另一种是美国默沙东(原荷兰英特威)公司生产的“猫三联”疫苗，它是一种弱毒苗。“妙三多”是我国目前唯一在用的一款FP疫苗。“妙三多”疫苗除了可以预防猫细小病毒病外，还可以预防猫杯状病毒病和猫疱疹病毒病。“妙三多”疫苗的常规免疫程序为：猫2月龄时进行首免，3月龄时进行二免，4月龄时进行三免，如果错过首免日期，二免、三免日期也随之后延。基础免疫完成后，以后每年再进行加强免疫1次。“妙三多”疫苗的FPV毒株采用的是标准株FPV-CU4毒株，FPV-CU4毒株是在1990年报道的，目前FPV-CU4毒株被用作多种抗体的制备及疫苗生产。

5.2 新型疫苗概述

随着分子生物学的飞速发展，许多学者正在加紧研制亚单位疫苗、基因工程疫苗等新型疫苗，用于FPV的预防。基因工程疫苗是指将基因表达的蛋白加以纯化，制作成抗原，从而达到制备新型疫苗的目的，这种疫苗具有安全性高、可量产等特点[13]。曾有报道指出，昆虫的细胞表达系统可以表达VP2蛋白，作为制备疫苗的免疫原[14]。将表达的VP2蛋白注射小鼠，采集小鼠血清可将VP2的特异性中和抗体生产出来，而且产生速度较快[15]。基因疫苗又称作核苷酸疫苗，是指将含有抗原基因的序列导入质粒中，以质粒作为载体注入到宿主体内，诱导产生免疫应答，达到预防疾病的目的[15]。目前我国关于VP2基因疫苗的研究表明将VP2基因的主要抗原表位克隆在表达载体pVAX1中，结果显示能够在细胞中产生较好的免疫原性，也可以在小鼠体内成功表达[16]。但是目前这些新型疫苗都还处于试验阶段，并没有真正用于临床，但这些技术已渐趋于成熟，相信随着科技的不断发展，新型疫苗的成本也将大大降低，最终实现临床应用。