T细胞酶联免疫斑点法对艾滋病合并结核病患者的诊断价值

姚正钢 陈勇毅

广东省阳江市公共卫生医院感染内科，广东阳江529500

近年来，艾滋病合并结核病双重感染率不断攀升，大约有30%～40%的艾滋病患者因肺结核感染而失去生命。为保证在早期诊断中准确诊断出艾滋病合并结核患者，为后续治疗方案的制订提供依据和参考，需要采用有效的检测方法来提高诊断准确率和效率。在现阶段的临床诊断和鉴别过程中，对结核感染的判别标准即结核菌培养[1]。但在实际检测时，其阳性率较低，且耗费时间长，不适用于艾滋病患者的诊断[2]。T细胞酶联免疫斑点法（T-SPOT.TB）是近年来发展较快、诊断效能较好的一种检测方法，其利用结核菌特异性抗原作为刺激物，可对具有免疫功能缺陷的艾滋病患者进行肺结核感染诊断[3-4]。为此，本研究主要分析T-SPOT.TB对艾滋病合并结核病患者的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019年1月至2020年9月阳江市公共卫生医院感染科门诊以及住院所收治的160例结核病患者。根据临床症状、实验室及影像学检查、病理学结果等进行分组，艾滋病合并结核病患者作为研究组，结核患者作为对照组。其中研究组患者96例，男53例，女43例，平均年龄（45.24±7.8）岁。对照组患者64例，男31例，女33例，平均年龄（45.76±8.2）岁。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。纳入标准：①经过免疫印迹法确诊患者为HIV-1抗体阳性；②临床症状符合结核病表现者；③处于初步诊疗阶段者；④治疗依从性较好者。排除标准：①有肝炎病毒感染或其他肝脏类疾病者；②有影响造血功能的血液系统疾病者；③中重度肝损伤及肾损伤者；④妊娠期或哺乳期妇女。该研究经过医院医学伦理委员会批准，所有入选患者均签署知情同意书。

1.2 方法

T-SPOT.TB检测方法：采用广东希格生物科技有限公司所提供的T-SPOT.TB试剂盒。抽取患者外周静脉血5 ml，予肝素抗凝，在4 h后将外周血的单个核细胞进行分离[5]。采用AIM-V培养液重悬细胞，保障细胞浓度为适当标准，一般为2.5×106/ml。然后在IFN-γ抗体微量板中分别加入50 μl法培养液、植物血凝素以及结合分歧杆菌特异抗原A、B，并在每个检测孔中加入100 μl的标准品溶液，再将微孔板放置在温度为37℃、二氧化碳浓度为5%的培养箱中，培养20 h后，可将PSB溶液进行洗脱，在每孔加入50 μl的酶标记抗IFN-γ抗体，置于4℃环境下孵育1 h。将PBS溶液洗脱之后，可加入50 μl的底物显色溶液，在室温条件下孵育7 min左右，最后使用蒸馏水彻底将培养板进行洗涤以终止反应。通过统计每个检测孔中具有颜色的斑点数[6-7]。如阴性对照孔点数＜6个，检测孔的点数减去其点数的结果＞6个，则表示样本检测为阳性；如阴性对照孔点数≥6个，检测孔的点数是其两倍，则表示样本检测为阳性。

结核菌素测验（PPD试验）方法：PPD试验的判断是在被测试患者的前臂尺侧部位进行皮内注射，注射物为0.1 ml的结核菌素纯蛋白衍生物（北京祥瑞生物制品有限公司，国药准字S10960017），72 h后对出现的局部皮丘硬结部分进行直径测量。当硬结皮丘的均径＜5 mm，判断为阴性；均径5～9 mm，判断为一般阳性；均径10～20 mm，判断为中度阳性；均径＞20 mm，或均径＜20 mm，但存在水疱、坏死等现象，可判断为强阳性[8]。

1.3 观察指标及评价标准

根据T细胞酶联免疫斑点法和结核菌素测验结果对患者进行诊断。比较T-SPOT.TB、PPD试验的阳性率，比较两种方法的敏感性和特异性。观察不同CD4+T淋巴细胞计数水平的艾滋病合并肺结核患者T-SPOT.TB、PPD试验结果。根据结核病检测金标准，即采集患者呼吸道分泌物作为样本，以检出结核杆菌为病理检测阳性。将a设置为真阳性、b为假阳性、c为假阴性、d为真阴性。敏感性=a/（a+c）×100%；特异性=d/（b+d）×100%；阳性预测值=a/（a+b）×100%；阴性预测值=d/（c+d）×100%。

1.4 统计学分析

本研究采用SPSS 20.0统计学软件开展实验数据的统计学分析工作，计量资料采用（）表示，进行t检验；计数资料采用[n（%）]表示，进行χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者T-SPOT.TB、PPD试验阳性率情况比较

两组患者经T-SPOT.TB、PPD检测后，研究组患者中T-SPOT.TB阳性率为84.38%，对照组患者阳性率为68.75%，研究组阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；经PPD试验后，两组患者的阳性率分别为58.33%、62.50%，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组患者T-SPOT.TB、PPD试验阳性率情况比较

2.2 T-SPOT.TB、PPD试验诊断艾滋病合并结核病的价值评价

T-SPOT.TB、PPD试验检测结果与病理结果情况见表2。根据公式计算T-SPOT.TB、PPD试验的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值，T-SPOT.TB的敏感性为84.00%，明显高于PPD试验的63.54%，差异有统计学意义（P＜0.05）；T-SPOT.TB的特异性为51.42%，高于PPD试验的50.00%，差异无统计学意义（P＞0.05）；T-SPOT.TB的阳性预测值为86.06%，高于PPD试验的65.59%，差异有统计学意义（P＜0.05）；T-SPOT.TB的阴性预测值为47.37%，低于PPD试验的47.76%，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表2 T-SPOT.TB、PPD试验检测结果与病理结果情况

表3 T-SPOT.TB、PPD试验诊断艾滋病合并结核的价值评价情况（%）

2.3 不同CD4+T淋巴细胞计数的艾滋病合并结核病患者T-SPOT.TB、PPD试验阳性情况

研究组96例患者中，CD4+T淋巴细胞计数≥200个/μl患者的T-SPOT.TB阳性率为54.32%，PPD检测阳性率为51.79%，差异无统计学意义（P＞0.05）。CD4+T淋巴细胞计数＜200个/μl患者的T-SPOT.TB阳性率为45.68%，PPD检测阳性率为48.21%，差异无统计学意义（P＞0.05）。比较T-SPOT.TB与PDD试验在CD4+T淋巴细胞计数≥200个/μl以及CD4+T淋巴细胞计数＜200个/μl患者中的阳性率，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4 不同CD4+T淋巴细胞计数的艾滋病合并结核病患者T-SPOT.TB、PPD试验阳性情况[n（%）]

3 讨论

结核感染是艾滋病患者常见的感染种类，是导致患者病死的重要原因，所以准确诊断艾滋病合并结核病，并制订有效的治疗方案是必要的，有利于改善患者的预后情况[9-10]。目前因艾滋病合并结核病缺乏比较典型的影像学表现，同时痰细菌的阳性率较低，在诊断中极容易出现漏诊或者误诊[11]。即便对艾滋病合并结核病患者进行PPD试验作为参考，但还是具有很高的假阳性率[12-13]。并且艾滋病患者本身的机体免疫功能缺陷不利于准确、有效的检出结合感染阳性患者。而T细胞酶联免疫斑点法是近年来检测结核感染的一种有效技术[14]，对其T淋巴细胞数目进行检测，可以准确判断检测样本是否感染结核分歧杆菌，原理是利用人体感染结核分歧杆菌所产生的记忆性T淋巴细胞，促使其受到结核分歧杆菌相关抗原的刺激，此时T淋巴细胞会迅速增殖并分泌出INF-γ[15-16]。

本研究中，根据临床症状、实验室及影像学检查、病理学结果等，基于诊断标准，将结核患者作为对照组、将艾滋病合并结核病患者作为研究组。同时进行T-SPOT.TB和PPD试验，并按照不同分层分组对两种诊断技术的阳性率进行比较。其将T-SPOT.TB检测技术应用在艾滋病合并结核病的诊断，并与传统的PPD实验进行诊断价值比较。相关研究结果显示，采用单独的特异性混合多肽早期分泌性抗原靶（ESAT-6）诱导的IFN-γ反应，在艾滋病合并结核病患者中的敏感性可达54%～76%，而T-SPOT.TB检测技术的敏感性可达84.00%。在本研究中，T-SPOT.TB检测艾滋病合并结核病患者的阳性率为84.38%，PPD试验阳性率为58.33%。提示在检测有效性方面，T-SPOT.TB优势更为显著。同时在T-SPOT.TB、PPD试验诊断艾滋病合并结核病价值比较方面，T-SPOT.TB在敏感性以及阳性预测值方面均高于PPD试验，提示T-SPOT.TB的诊断效率较高，且不受机体免疫抑制以及分枝杆菌感染条件的影响。在PPD试验中，研究组阳性率与对照组虽存在差异但无统计学意义，说明试验本身可能存在假阳性，应当对肺外结核、潜在性结核感染等因素进行排除。对研究组的CD4+T淋巴细胞计数水平进行观察，不同CD4+T淋巴细胞计数水平的阳性率差异无统计学意义，原因可能是CD4+T淋巴细胞计数较低的双重感染者因细胞免疫功能严重受损。因此，T-SPOT.TB具有相对较高的诊断效能。

综上所述，T细胞酶联免疫斑点法对艾滋病合并结核病患者具有更高的临床诊断价值，值得推广。