SOX9 和HOXA6 在结直肠癌组织中的表达情况及相关性研究

赵侠

广东省工人医院外科 广东广州 510000

CRC 是最常见的一种癌症，2018 年报告了880,792例与CRC 相关的死亡[1]。CRC 的患病率在女性中为9.2%，在男性中为10%，是女性中第二大最常见的癌症类型，并且是男性中第三大最常见的癌症类型[2]。此外，在晚期被诊断为CRC 的患者的5 年相对生存率仅为14%[3]。在约90%的病例中，CRC 是散发性的[4]，患者没有任何该疾病的家族史。CRC 的风险因素包括年龄（年龄大于50 岁的个体较高），炎性肠病的家族病史（CRC 的危险性为3.7%）和克罗恩氏病（CRC 的危险性为2.5%）。生活方式可能会增加患结直肠癌的风险，例如抽烟、食肉和低水平的体育锻炼[5]。大量的研究表明，各种基因的突变，DNA 甲基化的改变和染色体的不稳定性已被确定为CRC 的遗传原因。癌细胞基因表达谱的分析在癌症患者的诊断和治疗中起着重要作用，并且可能导致对与特定类型的癌症相关的失调机制的见解得到改善。寻找CRC 的分子标志物和更多高特异度的相关基因，有助于更好地为CRC 的临床诊断和治疗提供依据。HOX 基因参与不同细胞过程的调节，包括分化，血管生成，信号传导，细胞凋亡，迁移和转移。HOXA6 是HOX 家族的成员之一，编码调节基因表达和细胞分化的转录因子。HOXA6 已被确定在细胞增殖，分化和侵袭中起重要作用。据报道，HOXA6 可能在多种癌症类型中发挥作用，包括急性髓性白血病和神经胶质瘤[6]。然而，HOXA6 在这些癌症类型中的作用并不一致，观察到HOXA6 在肿瘤组织中过表达，并促进了癌症的进展。SOX 家族由20 多个成员组成，这些成员介导HMG（high-mobility group）域与DNA 的结合，并在发育，细胞命运决定和分化中具有调节功能。SOX 基因家族表达蛋白的异常同多种类型肿瘤的发生存在密切的相关性。近年来的研究表明，许多SOX9 在胃肠道肿瘤中有异常表达的现象，能调控细胞生长、凋亡、分化以及肿瘤细胞浸润、转移，推测SOX9 基因的异常表达与胃肠癌的发生、发展有一定关系[7]。本研究通过免疫组化法检测结直肠癌组织中SOX9、HOXA6 的表达情况探讨两者在结肠癌的发生发展中的相关性，结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2019 年9 月～2020 年9 月在我院临床诊断及治疗结直肠癌患者的粘膜组织130 份作为肿瘤组，选取同一时期的正常结直肠黏膜组织的患者50 例作为对照组。患者的中位年龄为54 岁（范围30～79 岁），男75 例，女55 例。标本是手术后从患有CRC 的患者中获取组织，并立即保存在液氮中，然后经病理科HE 染色后分成高、中、低分化结直肠腺癌术后组织标本，病理分级中高分化52 例（40.00%），中分化45 例（34.62%），低分化33 例（25.38%）。TNM 分期依照UICC/AJCC 结直肠癌分期（第七版）。人结直肠癌及正常组织均由病理学专家鉴定后收集于本院胃肠外科，相关试验和标本采集也均获得医院伦理委员会批准以及研究对象本人同意。

1.2 方法

1.1.1 主要试剂和仪器

兔抗人SOX9 多克隆抗体（美国Abcam 公司），兔抗人HOXA6 单克隆抗体（美国Immunoway 公司）；DMD108 光学显微镜（日本Olympus 公司）；ZT-12H生物组织自动脱水机（德国Leitz）免疫组化Envision法试剂盒（北京中杉金桥生物技术公司），操作方法与说明书相同。

1.2.2 评价方法

采用免疫组化染色法，操作步骤严格按照试剂说明书进行。组织标本用10%甲醛溶液进行固定，常规脱水后进行石蜡块切片，厚度3～5μm。之后选择连续切片进行脱蜡，苏木精-伊红（H&E）染色，通过文献中报道的方法对切片中SOX9 和HOXA6 表达谱进行免疫组织化学染色评估，同时评价其蛋白质的表达水平[8]。病理科医师在光学显微镜下随机观察3～5 个视野，要求每个视野至少计数100 个完整的肿瘤细胞，按照免疫反应积分法的规则对染色进行评分。

1.3 统计学方法

采用SPSS21.0 软件进行数据的统计学分析。计量资料以均数±标准差（) 表示,行t 检验；计数资料以频数率n(%)描述,χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组SOX9 和HOXA6 蛋白表达阳性 见表1

表1 两组患者组织中SOX9 和HOXA6 蛋白表达阳性率的比较[n（%）]

2.2 肿瘤组中SOX9 和HOXA6 蛋白表达与临床病理的关系 见表2

表2 肿瘤组中SOX9 和HOXA6 蛋白表达与临床病理的关系（n，%）

2.3 肿瘤组中SOX9 与HOXA6 表达的相关性 见表3

表3 肿瘤组中SOX9 与HOXA6 表达的相关性

3 讨论

Sry 相关HMG-box 转录因子家族（SOX9）的成员是一种转录因子，属于High Mobility Group（HMG）域转录因子的超家族。SOX9 在多种组织中表达，包括在肠上皮中表达，现在被认为是体内稳态的重要角色[9]。此外，最近已将高水平的SOX9 与II 期结直肠癌的良好预后相关。但是，越来越多的证据表明，解密SOX9 在肠道中的功能必须考虑到SOX9 的剂量依赖性作用。鉴于反复出现的争议以及关于SOX9 在肠上皮中表现为抑癌药还是致癌物的最新技术水平，现在提供有关肠内SOX9 生物学功能的累积知识的更新信息以及SOX9 在结直肠癌中的表达情况。本研究结果表明SOX9 在结直肠癌组织中的表达远情况高于正常结直肠黏膜，P＜0.05，差异具有统计学意义。除此之外，SOX9 在结直肠癌组织中的高表达与结直肠癌患者的肿瘤直径、TNM 分期、淋巴结转移情况以及肿瘤分化程度有关，与年龄、性别无关。说明SOX9 不仅参与结直肠癌的发生发展，还有可能参与到其转移过程中。因此，对SOX9 的表达与和结直肠癌关系的研究可以进一步了解结直肠癌发生、发展及转移过程中SOX9等影响因素的诱导机制，为结直肠癌的预防和治疗提供新的解决方法。

同源盒（HOX）家族包括一系列发育基因。编码的同源结构域蛋白是重要的转录因子，可作为单体或多聚体与特定的DNA 序列结合，以调节细胞的分化，增殖和凋亡。目前，已鉴定出39 种人类HOX 基因，将其分为四个簇：A，B，C 和D。先前的研究报道HOX 家族基因参与人类恶性肿瘤的发展并与预后相关[10]。HOXA6 是HOX 家族的成员，与分化的DNA 结合进行编码来调节基因的表达。先前的研究报道HOXA6基因在几种类型的恶性肿瘤中高表达，与细胞侵袭，增殖，集落形成和化学敏感性相关[11]。HOX 家族成员已被证实参与肿瘤调节，包括CRC 的发生和发展。本研究结果表明HOXA6 在结直肠癌组织中的表达远情况高于正常结直肠黏膜，P＜0.05，差异具有统计学意义。除此之外，HOXA6 在结直肠癌组织中的高表达与结直肠癌患者的肿瘤直径、TNM 分期、淋巴结转移情况以及肿瘤分化程度有关，与年龄、性别无关。说明HOXA6 不仅参与结直肠癌的发生发展，还有可能参与到其转移过程中。

对此，HOXA6 及SOX9 在肿瘤诊断中进行联合检测有利于进一步了解肿瘤的发生发展机制、并可以判断肿瘤的TNM 分期和淋巴结转移的情况，能够帮助临床医生对结直肠癌进行更好地辅助诊断。HOXA6 和SOX9 的表达高度相关，可能共享表达的调控机制，或者这些基因之一可能调控另一个基因的表达。需要进一步的功能研究以阐明这种相关性的潜在机制。