透骨草提取物对小麦叶蜂的毒杀活性初步研究

□文/邢浩春魏娜李同庆白浩伟郭淑霞付静李志亮谢全森

小麦叶蜂（Dolerus tritici C.）属于膜翅目叶蜂科昆虫，是小麦抽穗前最常见的害虫。在北方3～4月份发生一代，幼虫主要危害小麦叶片，每平方米30多头时发生较严重，会使小麦减产。目前农村要求用低毒的高效氢氯菊酯来防治麦叶蜂，但也有用禁用农药的情况，而且供选用的生物农药种类比较少。因此研发高效低毒环保、广谱、成本低、符合老百姓心意的生物农药很有必要，近几年植物源农药的研发更是受到科研工作者的青睐，比如白屈菜、透骨草、川乌等。透骨草（Phryma leptostachya L.）为我国传统中药材，有一定毒性。国内外学者陆续研究了透骨草全株、根、地上部分的提取物对家蝇、黏虫、淡色库蚊、菇蝇和小菜蛾幼虫等的毒杀活性，表明透骨草对上述害虫均有明显的活性。对有杀虫活性的透骨草提取物进行了进一步分离鉴定和分析，显示不同提取、萃取方法和萃取剂等条件分离出来的化学成分也不同，分离得到的主要化学成分有木质素类化合物、黄酮类化合物、三萜类化合物等。其中木质素类化合物具有极高的杀虫活性，对家蝇的触杀活性和商业化的拟除虫菊酯相当，双氧木质素A主要对多种鳞翅目害虫有效。目前透骨草提取物对小麦叶蜂的毒杀作用还未见报道。本实验采用透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物对小麦叶蜂进行毒杀实验，了解其杀虫活性，为中草药的利用及生物农药的开发提供参考依据。

一、实验材料和方法

1.实验材料

透骨草：全株，购自药店。

小麦叶蜂幼虫：采集于未喷洒药液的小麦田中，在实验室饲养。

2.实验方法

（1）透骨草的甲醇提取物制备

将全株透骨草干品打粉过60目筛。准确称取透骨草干燥粉末与90%甲醇溶液混合冷渍1天，60℃条件下超声波辅助提取，再抽滤，完成后收集滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩成浸膏，干燥后收集称重计算得率。放入4℃冰箱中保存。得到浸膏即为透骨草甲醇提取物。

（2）甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物制备

将透骨草甲醇提取物浸膏加水溶解，加入等量乙酸乙酯溶液，用超声波辅助萃取，分离水相和乙酸乙酯相，最后将乙酸乙酯相用旋转蒸发仪减压浓缩得到浸膏称重，计算萃取得率，公式如下：

（3）透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物杀虫活性测定方法

杀虫活性测定采用载毒叶片法。用丙酮将透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物配成1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升、8毫克∕毫升四个浓度梯度的药液作为实验组，用等量的蒸馏水和丙酮溶剂作为对照组，每组三个重复，每个重复用10头小麦叶蜂，共30头。将新鲜麦叶浸入药液20秒拿出，等溶剂挥发后，放置在盛有滤纸的干净培养皿中，然后放入停食一天、健康活泼、等大的小麦叶蜂。观察小麦叶蜂在食用叶片2小时、12小时、24小时后的反应。如观察到发生麻痹现象用解剖针触其身体不再作出反应即为死亡。计算小麦叶蜂死亡率和校正死亡率。（如表1）

表1 透骨草提取物的乙酸乙酯萃取物对小麦叶蜂的处理效果

（4）数据统计和分析

用excel软件统计数据及分析。

二、结果讨论

1.透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物对小麦叶蜂的中毒特征

通过载毒叶片法处理小麦叶蜂，发现正常的小麦叶蜂活泼健康，喜欢啃食叶片，身体微透明浅米色。药液处理后出现挣扎、蜷曲、聚堆、远离叶片的现象，死亡时身体柔软收缩、不动、颜色发黑等。

2.不同浓度梯度乙酸乙酯萃取物对小麦叶蜂的毒杀活性

不同浓度梯度透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物处理小麦叶峰24小时后，1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升、8毫克∕毫升浓度时死亡数为10头、12头、18头、20头，可以发现药液对小麦叶蜂有比较明显的胃毒、触杀活性。浓度在8毫克∕毫升24小时校正死亡率最高为58.32%。实验中也发现，除了透骨草提取物对小麦叶蜂的毒杀作用外，丙酮因为没有完全挥发也起了一些作用，丙酮对照组死亡率就达20%，所以24小时校正死亡率相对死亡率来说小一些。

上图分析看出，随着透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物浓度的增加，小麦叶蜂的24小时死亡率和校正死亡率也逐渐上升。但在本实验条件下4毫克∕毫升和8毫克∕毫升浓度处理组相比，没有太多增加，可能是因为8毫克∕毫升浓度处理时透骨草提取物的浸膏掺杂了杂质所致，也可能浓度过高效果也不太明显，因此浓度等于或高于8毫克∕毫升其毒杀活性还有待进一步研究。

图1 透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物对小麦叶蜂的毒杀活性折线图

三、结论

本实验利用甲醇提取和乙酸乙酯萃取方法得到透骨草的有效化学物质，即透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物，用载毒叶片法次检测了其对北方3～4月份危害小麦比较严重的小麦叶峰的毒杀活性。结果显示：害虫表现出一定的中毒特征。药液浓度为1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升和8毫克∕毫升梯度时，随浓度的增加其死亡率和校正死亡率也增加，8毫克∕毫升时校正死亡率最高达58.32%。从本实验条件下初步研究结果显示，透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物对小麦叶蜂有一定的杀虫活性，杀虫活性与其浓度呈正相关。而高浓度时或其他不同溶剂提取物的活性及透骨草化学成分分离和鉴定还有待进一步研究。