田东县中小猪场猪瘟免疫抗体水平监测

黄宝学 韦显凯 班雪花 梁素联 黄忠行 王金含

摘要 [目的]了解田東县中小猪场不同猪群的猪瘟免疫状况，为田东县防控猪瘟提供科学依据。[方法]试验选择田东县10个乡镇10个猪场，采集免疫21 d后的经产母猪、仔猪、生长育肥猪血清样本，应用阻断ELISA方法对采集血清样品进行猪瘟免疫抗体检测，比较相同疫苗不同胎次母猪群、相同疫苗不同免疫次数仔猪群、使用4种不同病毒含量（A组750RID、B组7 500RID、C组20 000RID、D组30 000RID）猪瘟细胞苗的生长育肥猪群抗体水平。[结果]经产母猪群抗体阳性率为83.61%，总离散度为45.97%，7胎及7胎以上母猪群猪瘟免疫抗体阳性率最低，为58.33%。仔猪的一免免疫抗体阳性率为52.17%，低于国家规定标准（≥70%）;二免免疫抗体阳性率为81.82%，显著高于国家规定标准，比一免抗体阳性率提高了29.65百分点。4种不同病毒含量猪瘟细胞苗免疫生长育肥猪在末次免疫21 d后，均产生较好的免疫效果，但不同病毒含量猪瘟疫苗之间存在一定差异。[结论]经产母猪群抗体离散度较大，仔猪一次免疫后抗体水平低于保护值，不同病毒含量猪瘟疫苗免疫效果存在一定差异。研究结果为进一步提高猪瘟免疫水平提供了依据。

关键词 猪瘟;抗体;免疫效果

中图分类号 S-858.28  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2021）22-0122-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.22.029

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Immune Antibodies Level Monitoring of Classical Swine Fever in Small-sized and Medium-sized Pig Farms in Tiandong County

HUANG Bao-xue  WEI Xian-kai  BAN Xue-hua1 et al

（1. Animal Disease Prevention and Control Center in Tiandong County of Guangxi， Tiandong，Guangxi 531500;2. Guangxi Animal Disease Prevention and Control Center， Nanning，Guangxi  530001）

Abstract [Objective] To understand the immunization status of classical swine fever（CSF） in different pig herds of small-sized and medium-sized pig farms in Tiandong County， and provide scientific basis for the prevention and control of CSF in Tiandong County. [Method]In the experiment， 10 pig farms from 10 towns of Tiandong County were selected to collect serum samples from postpartum sows， piglets， and finishing pigs on the 21st day after immunization. The blocking ELISA method was used to detect the immune antibodies of CSF.The immune antibody levels among the different parities of postpartum sow herd immunized with the same vaccine， the piglet herd immunized with the same vaccine with different immunization times， the finishing pig herd with 4 different virus content（750RID in group A， 7 500RID in group B， and 20 000RID in group C，  30 000RID in group D） were compared. [Result] The positive rate of antibodies in the postpartum sow herd was 83.61%， and the total dispersion was 45.97%. The antibodies positive rate of CSF in sows with the parity of no less than 7 was the lowest（58.33%）.  The antibodies positive rate of the piglets first immunization was 52.17%， which was lower than the national standard（≥70%）. The antibodies positive rate of the second immunization was 81.82%， which was significantly higher than the national standard， and increased 29.65 percent points than the antibodies positive rate of the first immunization. After the finishing pigs were immunized with four different RID CSF cell vaccines 21 days after the last immunization， better immune effect was obtained， but the immune effect had certain differences among different RID vaccines. [Conclusion] The antibody dispersion of the postpartum sow herd was larger， and the antibody level of the piglets after the first immunization was lower than the protection value.The immunization effect had certain differences among different RID CSF vaccines. The research results provided  the basis for further improving the immune level of CSF.

Key words Classical swine fever;Antibody;Immune effect

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病，它仍然是影响当前养猪业发展的主要疫病之一[1]，一旦发生猪瘟将给猪场带来严重的经济损失[2]。在当前及未来的很长一段时间里，依靠疫苗免疫接种仍然是我国猪瘟防控采取的主要策略[3]，其免疫效果直接影响防控成效[4]。因此，做好疫苗免疫效果评估，保持猪群处于较高的群体免疫抗体水平是防止猪瘟发生的重要手段。笔者对田东县10个中小猪场进行猪瘟免疫抗体水平检测，结合检测结果以及对各猪场猪瘟免疫信息的调查结果，初步了解了10个中小猪场各个免疫猪群的抗体水平，比较不同胎次母猪群、不同免疫次数仔猪群、使用不同病毒含量猪瘟细胞苗生长育肥猪群的抗体水平，总结提高猪瘟免疫效果的方法，旨在为田东县猪瘟防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 采样方法与样品来源

选择田东县10个乡镇共10个猪场采样，每个乡镇1个猪场，共457份血清样品。10个猪场共使用4种不同病毒含量的猪瘟细胞苗，设为A组（猪场A1、A2、A3、A4）、B组（猪场B1、B2）、C组（猪场C1、C2、C3）、D组（猪场D1）。场名以英文字母开头加阿拉伯数字命名，其中同一个英文字母代表使用同种病毒含量猪瘟细胞苗的猪场，阿拉伯数字代表猪场使用同种疫苗的顺序号。使用WinEpi流行病学软件，设置预期群抗体阳性率90%、置信水平95%、可接受误差8%，采用估计抗体阳性率方法[5]分别计算每个猪场的采样数量。所有猪场按经产母猪、仔猪、生长育肥猪各占每个场全场采样数量的1/3左右进行采样，其中仔猪群共2次采集血液，分别于一免与二免21 d后采集，每次采样数量各占50%。经产母猪群与生长育肥猪群采集1次，选择末次免疫21 d后的健康猪进行血液采集，按照常规方法分离血清，并置于-20 ℃下保存备用。具体采样情况见表1。分别对使用相同疫苗不同胎次母猪群、使用相同疫苗不同免疫次数仔猪群、生长育肥猪不同病毒含量猪瘟细胞苗进行猪瘟免疫抗体水平检测。

1.2 免疫情况调查

采用现场调查和查看各个猪场养殖档案登记簿，重点查看免疫接种记录，包括免疫接种时间、疫苗种类、疫苗病毒含量等免疫信息。

1.3 试剂

猪瘟ELISA抗体检测试剂盒（批号180925），购自武汉科前生物股份有限公司。

1.4 检测方法与结果判定

采用ELISA检测，操作步骤及结果判定参照ELISA抗体检测试剂盒说明书进行。样品阻断值≤30%判为阴性，阻断值≥40%判为阳性即抗体合格。

1.5 数据统计与分析

使用SPSS 17.0和Excel软件对试验数据进行卡方检验。

2 结果与分析

2.1 猪场免疫情况调查

10个猪场共使用4种不同病毒含量的猪瘟细胞苗，设为A、B、C、D组。其中，A组疫苗成品苗病毒含量为750RID;B组疫苗成品苗病毒含量为7 500RID;C组疫苗成品苗病毒含量为20 000RID;D组疫苗成品苗病毒含量为30 000RID（表2）。经产母猪每年3次普免或跟胎免疫;仔猪25～35日龄首免，50～65日龄二免;生长育肥猪95～110日龄加强免疫1次。所有猪场每次免疫剂量均为1头份。

2.2 不同胎次经产母猪猪瘟免疫抗体水平检测 从10个猪场使用的4组疫苗中，随机选取一组疫苗对不同胎次经产母猪进行猪瘟免疫。试验选取A组疫苗的A1、A2、A3、A4猪场进行免疫抗体水平检测。由表3可知，经产母猪总阳性率为83.61%，7胎以上猪瘟免疫抗体阳性率最低（58.33%），3～4胎经产母猪猪瘟免疫抗体阳性率最高（94.74%）。7胎及7胎以上母猪猪瘟抗体阳性率与其他胎次相比差异显著（P<0.05），1～2胎、3～4 胎、5～6胎之间差异不显著（P>0.05）。总离散度为45.97%，1～2胎离散度为46.68%，3～4胎离散度为42.41%，5～6胎离散度为43.01%，7胎及7胎以上离散度为57.92%。抗体阳性率呈现“中间高两端低”现象，抗体离散度与阻断均值成反比，阻断均值越高，离散度越低。

2.3 仔猪不同免疫次数猪瘟免疫抗体水平的比较

从10个猪场使用的4组疫苗中，随机选取1组疫苗对仔猪进行不同免疫次数猪瘟免疫。试验选取C组疫苗的C1、C2、C3猪场进行抗体水平检测。由表4可知，一免檢测血清样品数23份，猪瘟免疫抗体阳性数12份，免疫抗体阳性率为52.17%，低于国家规定的要求标准（≥70%）。二免检测血清样品数22份，猪瘟免疫抗体阳性数18份，免疫抗体阳性率为81.82%，超过了国家规定要求标准。二免后的免疫抗体阳性率比一免后免疫抗体阳性率，提高了29.65百分点。

2.4 不同RID猪瘟细胞苗免疫育肥猪抗体水平分析

根据猪场免疫情况调查结果（表5），对使用不同病毒含量的猪瘟兔化弱毒细胞苗免疫的10个猪场生长育肥猪群进行猪瘟抗

体水平检测，A、B、C、D组疫苗在末次免疫21 d后猪瘟抗体阳性率均超过农业农村部规定的免疫抗体阳性率（≥70%），但不同疫苗之间存在一定差异：C组抗体阳性率和抗体阻断值均较高，且离散度低于A、B、D组（表5）。这表明使用C组疫苗免疫后产生的猪瘟抗体水平最高。

3 讨论

猪瘟疫苗免疫最终的目的是诱导机体产生足够的抗体来抵抗猪瘟野毒的侵袭，猪场的饲养环境、气候条件、猪的体质及疫苗选择等因素均能影响猪瘟免疫抗体水平，因此定期开展猪瘟免疫效果监测非常重要[6]。一个猪场不同猪群的抗体水平不同，猪场疫病的暴发首先从抗体水平低的猪群开始发病，然后蔓延全场。监测不同免疫猪群猪瘟免疫抗体水平的变化，了解猪群对疾病的抵抗能力，分析猪场免疫效果，推测猪群有发生猪瘟的潜在隐患，进而针对猪场免疫薄弱环节制定相应防控措施来提高猪场的整体免疫水平，降低猪群流行野毒的感染率，对于早期控制疫病、保障猪场高效健康养殖具有重要意义。

经产母猪是猪场健康发展的核心猪群。此次调查发现，不同胎次经产母猪的整体猪瘟免疫抗体阳性率为83.61%，显著高于国家规定标准（≥70%），可对猪群产生免疫保护，这说明广大养猪场重视经产母猪群的猪瘟免疫工作，已经认识到经产母猪群对猪场扩大生产性能与保持稳定生产的重要性。各胎次中3～4胎母猪抗体阳性率最高，可能由于处于这个胎次的母猪已经建立了稳定的免疫应答机制，在疫苗免疫时能够迅速、有效地产生抗体。但必须注意的是，5胎次以上免疫抗体阳性率逐渐下降，推测生长周期长的母猪感染PCV-2型、PRRSV等免疫抑制病或发生猪瘟带毒综合征，不能产生足够的抗体[7-8]。抗体水平低的经产母猪在妊娠期间容易感染流行的野毒，造成母猪繁殖障碍，产下木乃伊胎、死胎、弱胎。患有猪瘟带毒综合征的经产母猪通过垂直传播不仅会导致新生仔猪发病、死亡，而且会使存活仔猪成为持续感染者，可长期带毒、排毒，机体内形成天然免疫耐受、先天性免疫麻痹，使后天免疫应答能力很难发挥作用，几乎不产生中和抗体[8]，给猪场带来猪瘟发生的恶性循环。抗体离散度是评价免疫猪群抗体水平均匀度和整齐度的指标，猪群离散度越小说明免疫效果越好，猪群整体的离散度一般要求在40%以下[9]。此次调查发现不同胎次经产母猪的离散度均超过40%，3～4胎母猪最低，为42.41%;7胎及7胎以上母猪最高，为57.92%，说明猪群个体间猪瘟抗体水平差异较大，存在发生猪瘟的重大隐患。使经产母猪处于一个较高且整齐的猪瘟抗体水平是有效控制猪瘟发生的重要手段，生产上猪场应加强高胎次母猪的猪瘟抗体水平监测，淘汰经多次免疫后仍不合格的猪只。同时，加大母猪更新率，淘汰生产性能不稳定的高胎次母猪，以提高整个猪场的生产成绩。

该研究结果表明仔猪二次免疫的抗体阳性率比一次免疫阳性率提高29.65百分点，与潘孝成等[10]对安徽6家猪场的研究结果（仔猪二次免疫抗体阳性率比一次免疫抗体阳性率提高35.2百分点）不一致，可能是由于猪场的饲养条件不同等因素所致。对当前的猪场仅仅实施一次免疫是不够的，只有实施二次免疫，才能使猪群获得较高的免疫抗体水平，有效防控猪瘟疫病的发生。仔猪一免后抗体阳性率仅为52.17%，抗体水平低于保护值，存在发生猪瘟的风险。在当前猪瘟发病日龄趋于幼龄[11]，临床上呈现非典型性猪瘟并能继发细菌病混合感染的流行形势下，必须做好仔猪一免后出现免疫空白期的防控工作，除了采取加强饲养管理，增强猪只抗病能力、建立健全的生物安全体系、实行自繁自养及全进全出等措施外，还要加强免疫工作才能控制猪瘟的广泛流行。王娟萍等[12]研究表明，哺乳仔猪实行哺乳前超免、21日龄时二免、60日龄三免可使免疫仔猪抗体阳性率接近90%。

当前，猪瘟已退出国家强制免疫病种，猪瘟免疫由养殖场（户）自行购买疫苗实施免疫注射，目前市售猪瘟疫苗种类繁多，而选择适合的疫苗是猪场成功免疫的前提。该试验结果表明结合猪场免疫信息调查结果，选择免疫程序相同、猪群使用疫苗种类一致性、免疫器官发育趋向成熟等方面的生长育肥猪群来研究不同4种RID猪瘟细胞苗的免疫效果。评估每种疫苗的免疫效果，从免疫后猪群抗体阳性率、抗体总平均值、离散度等方面综合评价，抗体阳性率和阻断值高，而离散度低，表明该疫苗的免疫效果最好[13]。该研究结果表明4种不同病毒含量猪瘟细胞苗在末次免疫21 d后，免疫抗体阳性率均达到国家规定的标准（≥70%），表明4种疫苗具有良好的免疫效果。进一步分析发现，病毒含量最高的D组免疫效果最差，C组呈现相对较高的抗体阳性率和抗体阻断值，且离散度低于A、B、D组。这表明使用C组疫苗免疫后产生的猪瘟抗体水平最高。由此可见，疫苗诱导免疫反应的强弱与病毒含量高低不成正比。选择一定的病毒含量能刺激机体产生足够的保护性抗体即可，病毒含量过高、超过动物机体免疫系统的最大承受能力后，会造成免疫抑制。病毒含量过低，则不能诱导机体产生足够抗体。该试验结果表明，猪瘟兔化弱毒细胞苗病毒含量为20 000RID时免疫效果較好。生产中猪场要定期对猪群进行抗体水平检测，参考监测数据来选择疫苗，以实现最佳的免疫效果和猪场成本效益最大化。

参考文献

[1] FLOEGEL-NIESMANN G，BUNZENTHAL C，FISCHER S，et al.Virulence of recent and former classical swine fever virus isolates evaluated by their clinical and pathological signs[J].J Vet Med Ser B，200 50（5）：214-220.

[2] MOENNIG V，FLOEGEL-NIESMANN G，GREISER-WILKE I.Clinical signs and epidemiology of classical swine fever：A review of new knowledge[J].Vet J，200 165（1）：11-20.

[3] 孟帆，王娟萍，姚敬明，等.免疫增强剂对猪瘟疫苗细胞免疫的影响[J].山西农业科学，201 43（7）：881-884.

[4] 韩崇江，张大丙.部分猪场猪瘟抗体有效保护水平的探讨[J].中国畜牧兽医，2009，36（10）：191-192.

[5] 沈朝建，王幼明.兽医流行病学调查与监测抽样技术手册[M].北京：中国农业出版社，2013.

[6]

郝飞，张华，汤德元，等.我国规模化猪场主要病毒性疫病的综合防控对策[J].畜牧与兽医，201 44（10）：86-89.

[7] 赵坤，李培庆，李敬玺，等.猪免疫抑制综合症的发生与防制[J].安徽农业科学，200 33（11）：2074-207 2081.

[8]  王天奇.猪场不可忽视猪瘟带毒母猪综合征[J].乡村科技，2015（9）：10.

[9] 韦显凯，郑列丰，郑敏，等.规模猪场猪瘟免疫抗体监测和效果分析[J].中国兽医杂志，201 48（9）：43-45.

[10] 潘孝成，赵瑞宏，沈学怀，等.安徽种猪场仔猪猪瘟免疫效果分析[J].养猪，2017（4）：102-104.

[11]  刘建，汤德元，李春燕，等.我国猪瘟流行新趋势与防控措施[J].中国猪业，201 8（2）：37-39.

[12] 王娟萍，姚敬明，吴忻，等.规模化种猪场猪瘟免疫情况调研[J].中国畜牧兽医，201 39（1）：184-187.

[13] 赵永前，孙华伟，张敬峰，等.县域范围内猪瘟疫苗免疫效果的监测与研究[J].江西农业学报，2017，29（3）：120-123.