某鸽场新城疫病毒和禽流感病毒血清抗体合格率的分析

◆作者：杭柏林 邓丽 刘保国 朱豫坤

◆单位：河南科技学院动物科技学院

新城疫（Newcastle disease）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种急性、高度接触性传染病，曾被世界动物卫生组织（OIE）列为A 类疫病，对养禽业危害甚大。禽流感（Avian influenza）是由A 型流感病毒（AIV）引起的一种传染性疾病，可分为高致病性禽流感和低致病性禽流感。低致病性禽流感常由H9 亚型禽流感病毒引起，而高致病性禽流感常由H5 亚型和H7 亚型的禽流感病毒引起（刘金华等，2016；付如勇等，2020）。某些高致病性禽流感病毒毒株还可以引起人的感染，成为一种人兽禽共患的病原（陈媛等，2020）。因此，新城疫和禽流感是影响养禽业的两个重要的传染性疾病。疫苗免疫是预防新城疫和禽流感的重要措施。及时了解免疫后抗体水平是判断群体对病原抵抗力的重要手段。鸽是一种重要的禽类，也常发生新城疫和禽流感等传染性疾病（王占新等，2020；吴晓斌等，2020）。本研究主要就某鸽场的新城疫和禽流感在疫苗免疫后进行了血清抗体检测，分析了血清抗体水平，为新城疫和禽流感的预防提供及时的参考性意见。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 待检样本的来源

为了解豫北某鸽场所饲养的美国王鸽在免疫新城疫病毒疫苗和禽流感病毒疫苗后血清抗体水平的合格率，于疫苗免疫后14 天，随机抽取鸽子，10 只/栋，共5 栋，用1mL 注射器从鸽翅静脉无菌采集血液0.5~0.8mL。

1.1.2 试剂

柠檬酸钠购自天津市博迪化工有限公司，氯化钠购自天津市天力化学试剂有限公司。新城疫病毒和禽流感病毒的血凝抑制试验阳性抗原均购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司。

1.1.3 仪器

离心机（型号：TG16-WS）购自湖南湘仪实验室仪器开发有限公司， 冰箱（型号：BCD-325WKY1DPM）购自广东海信容声冰箱有限公司，生化培养箱（型号：HH-B11） 购自上海医疗器械七厂，高压蒸汽灭菌器（型号：MJ-78A）购自上海施都凯仪器设备有限公司，移液器（型号：5-50μL） 购自大龙兴创实验仪器(北京)有限公司，电子天平（型号：T202B）购自常熟市天量仪器有限责任公司。

1.2 方法

1.2.1 鸽待检血清的制备

采集的鸽子血液于3000r/min 离心10min，取上清，即为待检的鸽血清，置于4℃或-20℃保存、待检。

1.2.2 抗凝鸡血液

从菜市场采集健康公鸡的血液，用3.8%柠檬酸钠抗凝，摇匀，置4℃保存。

1.2.3 1%鸡红细胞的制备

按照文献（杭柏林等，2017）的方法制备1%鸡红细胞悬液。

1.2.4 血凝试验和血凝抑制（HI）试验

血凝试验和HI 试验按照文献（杭柏林等，2017）的方法进行。

1.2.5 结果判定

对新城疫病毒和禽流感病毒HI 抗体效价，当HI 抗体效价≥5log2 时，认为个体的免疫是合格的；HI 抗体效价<5log2时，认为个体的免疫是不合格的；当HI 抗体平均效价≥7log2时，群体免疫是合格的（焦凤超等，2017）。抗体的离散度用变异系数来表示，变异系数=（标准差/ 平均值）×100%，抗体的离散度≤10% 为佳（焦凤超等，2017）。

2 结果与分析

2.1 HI 抗体的平均效价

各栋鸽舍的HI 抗体平均效价结果如图1 所示。从图1 中可以看出，对新城疫病毒HI 抗体平均效价而言，5 栋鸽舍中仅有1 栋鸽舍是合格的，合格率仅为20%；对禽流感病毒H5 亚型HI抗体平均效价而言，5 栋鸽舍全部合格，合格率为100%；对禽流感病毒H7 亚型HI 抗体平均效价而言，5 栋鸽舍仅有2 栋鸽舍是合格的，合格率为40%，有1栋鸽舍接近合格。这表明，该鸽群新城疫病毒和禽流感病毒H7亚型的免疫效果不是很好，需要加强免疫。

图1 新城疫病毒和禽流感病毒HI 抗体的平均效价

2.2 抗体的个体合格率与变异系数

各栋鸽舍HI 抗体的个体合格率和变异系数分析结果如表1所示。从表1 中可以看出，对新城疫病毒而言，仅1 栋鸽舍的鸽全部合格，最低的仅20%的鸽是合格的，但离散度均不佳，最高的达68.32%；对禽流感病毒H5亚型而言，5 栋鸽舍的鸽全部合格，2 栋鸽舍的离散度较佳；对禽流感病毒H7 亚型而言，2 栋鸽舍的鸽全部合格，最低的有70%的鸽是合格的，离散度稍偏高。这同样表明，该鸽群新城疫病毒和禽流感病毒H7 亚型的免疫效果均不好，应及时加强免疫。

表1 新城疫病毒和禽流感病毒HI 抗体的个体合格率和变异系数

3 讨论

新城疫和禽流感是危害养鸽业的两种重要疾病。许多鸽场常使用疫苗进行免疫以预防新城疫和禽流感的发生。新城疫病毒的疫苗有弱毒活疫苗和灭活疫苗（宋亚鹏等，2017）。新城疫弱毒活疫苗常常可以通过滴鼻点眼或饮水的方式进行免疫，操作上较为快捷、方便。因此，大多数养鸽场常选择新城疫病毒弱毒疫苗进行点眼滴鼻免疫或饮水免疫。在本研究所调查的鸽场就是应用了新城疫病毒弱毒疫苗进行了免疫。从检测结果来看，该鸽场鸽群针对新城疫病毒的免疫效果较差，初步认为该鸽场鸽群近期内如受到新城疫病毒的感染将可能发生新城疫。

禽流感的预防亦常常通过疫苗免疫进行（赵旭东等，2020）。临床上常常根据养殖环境中出现的禽流感病毒亚型选择不同的亚型疫苗来进行预防免疫。目前，市场上禽流感病毒的疫苗主要是灭活疫苗。预防高致病性禽流感主要是针对H5 亚型和H7 亚型的毒株。在本研究中，该鸽场主要注射了H5 亚型和H7 亚型的禽流感病毒灭活疫苗。从检测结果来看，该鸽场鸽群针对禽流感病毒H5 亚型的免疫效果较好，但对禽流感病毒H7 亚型的免疫效果稍差，初步认为该鸽场鸽群在短期内能有效抵抗禽流感病毒H5 亚型的感染，但不能有效抵抗禽流感病毒H7 亚型的感染。

综合以上分析结果，我们建议鸽场应认真做好新城疫和禽流感的疫苗免疫接种工作，并认真做好抗体水平检测与分析，及时补种疫苗。

参考文献：（略）