雅培Alinity i全自动化学发光免疫分析仪检测乙肝表面抗原及乙肝表面抗体的性能评价

杨 帆，张怡青，顾 畅，王 兰

（东部战区总医院秦淮医疗区检验科，南京 210002）

0 引言

乙型肝炎病毒（HBV）感染一直是困扰中国乃至全球的世界公共卫生问题，虽然我国人群乙肝表面抗原（HBsAg）阳性率近年来已经下降至6%左右，却仍然是世界上感染HBV人群数量最多的国家[1-2]。作为传统的HBV血清学标志物，乙肝两对半一直是临床筛查疾病、反映疾病进展及分期的主要指标[3]。

作为雅培公司的新一代体外诊断产品，Alinity ci生化、免疫及整合系统于2018年3月开始在中国市场投入使用。目前国内尚未有对Alinity i全自动化学发光免疫分析仪（以下简称“Alinity i化学发光免疫分析仪”）基于传染病血清标志物相关性能验证的文献报道。本文对Alinity i化学发光免疫分析仪对于乙肝两对半检测的2个定量项目HBsAg及乙肝表面抗体（HBsAb）的检测性能进行评价如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2020年8—9月我院传染科住院患者及体检健康者新鲜血清标本。其中HBsAg定量结果在0．05～250 IU/mL 的阳性标本 25 例，HBsAg定量结果在 0～＜0．05 IU/mL 的阴性标本 25 例，HBsAb 定量结果在10～1000 mIU/mL的阳性标本25例，HBsAb定量结果在0～＜10 mIU/mL的阴性标本25例，经稀释测定确定的极高浓度HBsAg及HBsAb各1例，体检健康者血清标本20例（男10例、女10例，年龄18～69岁）。所有标本在检测前均于-20℃保存。

1.2 仪器与试剂

美国雅培公司Alinity i化学发光免疫分析仪（出厂编号：Ai03097）及配套试剂（HBsAg，批号：12009FN01；HBsAb，批号：07494FN01），雅培 Architect i2000全自动化学发光分析仪（以下简称“Architect i2000 化学发光分析仪”）（机身编号：ISR51159）及其配套试剂（HBsAg，批号：08447FN01；HBsAb，批号：08455FN01）；质控品由北京康彻思坦生物公司提供，包括 HBsAg低值质控品（0．2 IU/mL）（批号：201911007），HBsAg高值质控品（2 IU/mL）（批号：201910003），HBsAb低值质控品（10 mIU/mL）（批号：202009003），HBsAb高值质控品（30 mIU/mL）（批号：201910005）；卫生部临床检验中心下发的2021年度室间质评标准品 202111、202112、202113、202114、202115。

1.3 仪器性能验证

1.3.1 精密度验证

1.3.1.1 批间精密度

使用高、低2个浓度的质控品，每个浓度每天重复检测4次，连续检测5 d，收集实验数据，计算20次检测结果的算术平均值（）和标准差（s）以及批间变异系数（coefficient of variation，CV）。CV计算公式如下：CV=s/×100%。判断标准：批间 CV＜15%则为验证通过。

1.3.1.2 批内精密度

将高、低2个浓度的质控品按常规方法连续检测20次，计算20次检测结果的算术平均值（）和标准差（s）以及批内 CV。CV 计算公式如下：CV=s/×100%。判断标准：批内CV＜10%为验证通过。

1.3.2 线性范围验证

Alinity i化学发光免疫分析仪试剂说明书所展示的线性范围 HBsAg 为 0．05～250 IU/mL，HBsAb 为2．0～1000 mIU/mL。各选择 1份 HBsAg和HBsAb浓度接近试剂检测范围下限的患者低浓度血清标本以及试剂检测范围上限往下10%的患者高浓度血清标本，将患者低浓度血清（L）标本与患者高浓度血清（H）标本按比例关系倍比稀释成下列血清浓度（5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H）。将各浓度血清样本在Alinity i化学发光免疫分析仪上进行检测，每个样本重复测定3次，计算平均值。将预期值与实测值进行分析，采用Excel软件，以预期浓度值为横坐标、实际测得的浓度值均值为纵坐标做线性回归图，计算回归方程y=ax+b及其相关系数r。判断标准：相关系数 r2≥0．95，回归方程斜率 a 在 0．95～1．05 范围内则验证通过。

1.3.3 检出限验证

将HBsAg和HBsAb的定值质控品分别稀释到试剂检测范围下限的浓度，HBsAg为0．05 IU/mL，HBsAb为2．0 mIU/mL，在不同批内对该浓度样本进行测定，每天检测4次，连续检测5 d，对得到的20次检测结果计算和s以及批内CV。判断标准：CV＜10%为验证通过。

1.3.4 功能灵敏度验证

分别用雅培HBsAg和HBsAb的专用稀释液将 HBsAg的 0．2 IU/mL浓度质控品及 HBsAb的10 mIU/mL浓度质控品按梯度倍比稀释成5个浓度，要求最低浓度低于试剂线性范围的下限值。每个浓度重复测试20次，计算、s以及CV值，选取CV值最接近20%的稀释浓度作为功能灵敏度。

1.3.5 携带污染率验证

从患者和体检健康者血清中挑选HBsAg及HBsAb的极高浓度标本（H）和低浓度标本（L）各1份，分别将极高浓度及低浓度标本混匀分成3份，按照极高浓度样本H1、极高浓度样本H2、极高浓度样本H3、低浓度样本L1、低浓度样本L2、低浓度样本L3的顺序连续测定，收集实验数据。极高浓度样本由于超过试剂的线性范围而采用稀释推算法获得，稀释倍数就是推算换算的比例系数。最后按照公式携带污染率=（L1－L3）/（H3－L3）×100%计算携带污染率。判断标准：携带污染率＜1．0%则验证通过。

1.3.6 正确度验证

使用Alinity i化学发光免疫分析仪检测2021年度卫生部临床检验中心感染性血清学标志物的室间质评样本来判定与其他实验室检测结果的一致性。

1.3.7 仪器比对验证

分别选取40例新鲜血清标本（其中阴性20例、阳性20例），用Alinity i化学发光免疫分析仪检测HBsAg和HBsAb，再用Architect i2000化学发光分析仪进行测试，得出2组测定值。使用Excel软件，以Architect i2000化学发光分析仪检测的结果为横坐标、Alinity i化学发光免疫分析仪检测的结果为纵坐标做线性回归图，计算回归方程y=ax+b及其相关系数r。判断标准：相关系数r2≥0．95，回归方程斜率a在 0．95～1．05 范围内则验证验证通过。

1.3.8 正常参考区间验证

收集20份不同年龄段的体检健康者的血清标本，其中男、女各10份，排除HBsAb阳性标本，使用Alinity i化学发光免疫分析仪同步检测HBsAg及HBsAb。判断标准：95%的检测结果在参考区间范围内为验证通过。

2 结果

2.1 精密度验证结果

HBsAg低、高浓度的批内精密度为3．76%和1．16%，批间精密度为 6．72%和 3．89%；HBsAb 低、高浓度的批内精密度为3．81%和3．28%，批间精密度为 6．42%和 3．78%，验证通过。详见表1、2。

表2 HBsAb批内、批间精密度验证结果

2.2 线性范围验证结果

HBsAg 线性回归方程为 y=0．9881x+3．9337，r2=0．9958；HBsAb 线性回归方程为 y=1．0244x+11．7530，r2=0．9950，相关系数及回归方程斜率均在验证范围内（如图1所示）。

图1 HBsAg及HBsAb线性范围回归曲线

2.3 检出限验证结果

将HBsAg及HBsAb的定值质控品稀释到检出限浓度后检测的均值分别为0．0530 IU/mL及2．0755 mIU/mL，CV 分别为 8．87%和 7．89%，验证通过。详见表3。

表3 HBsAg及HBsAb的检出限验证结果

2.4 功能灵敏度验证结果

根据检测结果得出HBsAg为0．025 IU/mL以及HBsAb为0．625 mIU/mL时，该浓度的CV值是最接近20%的，即为功能灵敏度，且都低于试剂线性范围的下限。详见表4。

表4 HBsAg及HBsAb的功能灵敏度验证结果

2.5 携带污染率验证结果

通过公式计算，HBsAg及HBsAb的携带污染率皆为0，符合验证要求。详见表5。

表5 HBsAg及HBsAb的携带污染率验证结果

2.6 正确度验证结果

将2021年度卫生部临床检验中心感染性血清学标志物室间质评样本用Alinity i化学发光免疫分析仪检测，与室间质评回报结果一致。详见表6。

表6 HBsAg及HBsAb的正确度验证结果

2.7 仪器比对验证结果

Alinity i化学发光免疫分析仪与Architect i2000化学发光分析仪检测HBsAg结果的相关线性方程为 y=0．9568x-0．3306，r2=0．9982；HBsAb 线性方程为 y=1．0355x+0．1148，r2=0．9939。均验证通过（如图2所示）。

图2 HBsAg及HBsAb仪器比对线性相关曲线

2.8 参考区间验证结果

检测的20例体检健康者HBsAg均小于0．05 IU/mL，HBsAb 均小于 10 mIU/mL，皆在参考区间范围之内，验证通过。

3 讨论

随着高新检测技术、互联网信息技术的快速发展，医学检验技术获得了巨大的发展机遇，而在现代“精准医学”的大背景下，传染性疾病的精确诊断技术也在不断增强[4]。雅培Architect i2000化学发光分析仪是临床检验实验室常用的检测平台，由于性能稳定且测定准确通常被用作其他品牌仪器的方法学比对仪器[5-6]。雅培Alinity i化学发光免疫分析仪作为新一代的化学发光免疫分析仪延续了雅培Architect i2000化学发光分析仪高灵敏性和高特异性的微粒子化学发光免疫技术[5-7]，在检测HBsAg时对于多基因型以及突变体的检测能力具有明显优势，能够有效降低漏检率[8]，因此雅培化学发光免疫分析仪一直是欧洲肝病学会（European Association for the Study of the Liver，EASL）、美国肝病学会（American Association for the Study of Liver Diseases，AASLD）以及亚太肝病学会（Asian Pacific Association for the Study of the Liver，APASL）指南明确提出并认可的检测仪器[9-11]。相比临床检验实验室常用的雅培Architect i2000化学发光分析仪，Alinity i化学发光免疫分析仪整体占用空间更小，能够在更小单位面积内实现更多的测试量。该仪器可以最多4台联机集成，扩展性更强；具备多种流水线轨道选项，灵活性更高，更加适合实验室的长期规划；可加载试剂盘容量变大，试剂耗材能够随时加载并不间断进行测试，更具高效性；试剂耗材能明显通过颜色区分，一键急诊功能则明显缩短了急诊样本的周转时间，更加方便了检验人员的日常操作；通过互联网可将报警等信息直接发送到雅培诊断远程中心，维修工程师可在线了解仪器情况，及时对仪器的状态问题采取措施，更具人性化。

本研究主要对雅培Alinity i化学发光免疫分析仪关于乙肝血清学指标HBsAg及HBsAb的检测性能进行验证分析。结果显示HBsAg及HBsAb高、低浓度的批间及批内精密度均小于10%。在HBsAg及HBsAb线性回归方程中，相关系数r2分别为0．9958和 0．9950，均大于 0．95，回归方程斜率 a分别为 0．9881及 1．0244，在 0．95～1．05 的要求范围内。HBsAg 及HBsAb的定值质控品稀释到检出限浓度后检测的均值分别为 0．0530 IU/mL 及 2．0755 mIU/mL，CV 分别为 8．87%和 7．89%，均小于 10%，而 HBsAg及 HBsAb的功能灵敏度验证浓度分别为0．025 IU/mL以及0．625 mIU/mL，均低于试剂线性范围的下限，HBsAg与HBsAb的携带污染率均为0，验证通过。将本年度卫生部室间质评的样本用Alinity i化学发光免疫分析仪检测验证，检测结果与质评预期结果一致，而通过Alinity i化学发光免疫分析仪与Architect i2000化学发光分析仪比对检测的HBsAg及HBsAb的线性回归方程可以得出相关系数r2分别为0．9982及0．9939，回归方程斜率 a 分别为 0．9568 及 1．0355，均符合验证要求。在健康人群参考区间的验证中，HBsAg及HBsAb的结果100%落在正常参考范围内。因此，Alinity i化学发光免疫分析仪能够完全满足临床对乙肝血清标志物HBsAg和HBsAb的检测需求。

综上所述，雅培Alinity i化学发光免疫分析仪定量检测HBsAg及HBsAb的稳定性、重复性和精确性是完全符合临床应用要求的，同时相对于Architect i2000化学发光分析仪更具扩展性、灵活性及高效性，可以显著提高实验室的工作效率。