超高效液相色谱法在食品四环素类药物残留检测中的应用

李翠萍

（河南护理职业学院，河南安阳 455000）

随着社会的快速发展，人们生活水平逐渐提高，食品安全问题越来越受到重视。一些养殖户受利益驱使，非法使用四环素类兽药，导致四环素类兽药残留问题日益严重，四环素类兽药残留会严重伤害人们的健康。

1 四环素类药物及四环素类药物残留概述

四环素类抗生素作为一种抑菌性广谱抗生素，被广泛用于防治革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、立克次氏体、支原体和衣原体等所致的疾病，其不良反应主要有消化道反应、肝损害、肾损害、影响骨骼及牙齿的发育、局部刺激、过敏反应、肠道菌群失调及与金属离子形成络合物等。

随着人们生活水平逐渐提高，对动物源食品的质量要求也随之提高。近年来，动物源食品四环素类抗生素残留问题逐渐成为人们关注的焦点。有研究表明四环素类抗生素可防治动物疾病，提高生产效率，改善畜产品的质量。然而，由于一些养殖人员缺乏科学知识，一味追求经济利益，导致畜牧业中四环素类抗生素滥用现象普遍存在。滥用四环素类抗生素造成有害物质在动物源食品中产生残留，对人体健康造成危害，损害生态环境，影响畜牧业的发展。目前，检测四环素类抗生素残留的方法有理化检测法、免疫检测法和微生物法等[1]。理化检测法主要有超高效液相色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、超高效液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱-串联质谱法和高效毛细管电泳法等[2-5]。由于超高效液相色谱法具有高分离度、高分析速度、高灵敏度、易与质谱串联和方法转换简便等优势，广泛应用于四环素类药物残留的分析检测。

2 超高效液相色谱法概述

超高效液相色谱是一种基于小颗粒填料的液相色谱技术，其原理与高效液相色谱法大致相同，具有以下特点。①高性能、小颗粒微粒固定相。常见高效液相色谱的色谱柱如十八烷基硅胶键合柱的粒径为5 μm，而超高效液相色谱的色谱柱粒径可达3.5 μm，甚至1.7 μm，更加有利于物质的分离。②超高压输液泵。由于超高效液相色谱的色谱柱粒径减小，使压力成倍增大。因此，超高效液相色谱的输液泵也相应改成超高压输液泵。③检测器灵敏度高，并且采样速度很快。④使用低交叉污染、低扩散自动进样器，并且配备了压力辅助进样技术和针内进样探头。⑤优化设计仪器整体系统。色谱工作站安装有多种平台软件，使超高效液相色谱与高效液相色谱分析方法可自动转换。

与传统的高效液相色谱法相比，超高效液相色谱法的速度是高效液相色谱法的9倍，灵敏度是高效液相色谱法的3倍，分离度是高效液相色谱法的1.7倍，减少了溶剂使用量，缩短了分析时间，降低了分析成本。目前，超高效液相色谱技术主要应用于药物分析、食品分析、生化分析、环境分析等领域，尤其是中药研究领域，超高效液相色谱技术可以解决中药组分复杂、分离困难等问题。

3 超高效液相色谱法在食品四环素类药物残留中的应用

陈艳等[6]利用超高效液相色谱-质谱联用法对卤肉制品中的四环素、金霉素、强力霉素、土霉素等四环素类药物残留进行检测并建立了相关方法。结果表明，在浓度0.1～10 μg/mL，四环素、金霉素、强力霉素、土霉均呈现良好的线性关系，线性相关系数大于0.99。在50 μg/kg、100 μg/kg、200 μg/kg3个浓度的添加水平下，四环素、金霉素、强力霉素、土霉素的平均回收率在76.7%～103.7%，相对平均偏差为3.2%～4.6%。采用此方法测定了乐山地区220份市售卤肉制品中的四环素类药物残留量，并对测定结果进行了质量安全性分析，结果显示四环素类药物的含量均在国家标准规定范围内。说明该方法选择性强、重现性好且灵敏度高，可用于测定市售卤肉制品中的四环素类药物残留。皮璟渔等[7]采用超高效液相色谱-串联质谱法对鸭蛋中的四环素、二甲胺四环素、盐酸金霉素、去甲基金霉素、土霉素、甲烯土霉素和多西环素等7种四环素类药物残留进行检测分析。结果表明，在10～100 ng/mL浓度范围内，7种四环素类药物残留具有良好的线性关系，检出限为0.2～1 μg/kg，平均加样回收率为84.3%～94.1%，精密度为0.9%～2.7%，相对标准偏差为1.7%～7.7%。表明该方法可用于检测分析鸭蛋中的四环素类药物残留。刘柏林等[8]借用超高效液相色谱-串联质谱法对禽类食品中的4种四环素与11种喹诺酮兽药残留进行了测定分析。结果表明，在0.1～50.0 μg/L浓度范围内，15种兽药残留线性关系良好，线性相关系数均大于0.992 7，相对标准偏差在0.51%～15.3%，平均回收率在60.6%～117.9%，检出限达到0.05～0.20 μg/kg。表明该方法适合于检测分析禽类食品中多种四环素与喹诺酮兽药残留。采用此方法对安徽省市售的2016—2018年鸡蛋和鸡肉样品中四环素与喹诺酮残留进行了检测，并对其食品安全指数进行了评估，发现鸡蛋和鸡肉中四环素类和喹诺酮类国际食品标准均值都小于1，说明其膳食风险较低。方灵等[9]采用超高效液相色谱-串联质谱法测定分析了牛奶中四环素类、大环内酯类、磺胺类、氯霉素类和喹诺酮类5类38种抗生素药物残留。结果表明，在各自的线性浓度范围内，38种抗生素具有良好的线性关系，相关系数均大于0.99，在3个（1.0 μg/kg、5.0 μg/kg、10.0 μg/kg）加标水平下，平均回收率在70.7%～94.9%，定量下限达到0.10～1.0 μg/kg，相对标准偏差在4.0%～9.4%。说明该方法重现性好、灵敏度高且操作简单，能满足牛奶中多种抗生素药物残留的检测需求。石春红[10]等采用超高效液相色谱-质谱联用法对动物源性食品中四环素、土霉素等4种四环素类药物残留量进行检测。结果表明，在5～200 μg/L浓度范围内，4种四环素类药物均呈现良好的线性关系，相关系数均大于0.995，平均回收率在92.7%～107.2%，相对标准偏差小于8%，检出限达2.5 μg/kg。说明本方法灵敏度高、重现性好、简单快速，适合于快速测定动物源性食品中四环素类药物残留。

4 结语

超高效液相色谱法具有分离度高、分析速度快、方法转换简便、灵敏度高和易与质谱串联等优势，促进了食品兽药残留研究领域的发展。由于食品种类繁多，成分复杂，所以分离比较困难，而这些问题可以通过超高效液相色谱法得到解决。在同样的检测条件下，超高效液相色谱仪的分辨率更高，能检测到更多色谱峰，并且超高效液相色谱仪能分离的色谱峰比高效液相色谱仪多出一倍，但是检测过程中由于仪器内部的压力过大，也导致其产生一些问题，如仪器老化速度加快，泵的使用寿命相对降低等。随着科学技术的不断发展，这些问题会逐渐得到解决，未来超高效液相色谱技术会越来越普及，得到质的飞跃和提升。