Th1、Th2、Th17相关细胞因子与儿童系统性红斑狼疮疾病活动程度的相关性研究*

王亚辉

盘锦辽油宝石花医院儿科，辽宁盘锦 124010

系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性和多系统性慢性炎性疾病，累及皮肤、关节、肾脏、肺和脑等[1]。SLE的发病机制尚未完全明确，主要涉及T细胞和B细胞的过度活跃、多克隆B细胞活化产生致病性自身抗体、自身抗原清除不良、免疫复合物沉积，以及血浆细胞因子异常等[2]。10%～20%的儿童系统性红斑狼疮(cSLE)起病于儿童期和青春期，发病率约为0.5/10万，在免疫学和临床表现等方面较成人SLE有许多不同之处[3]。且儿童发病隐匿，就诊原因复杂、临床表现多样化，尤其是不典型、轻症或处于疾病早期的cSLE患儿容易被误诊或漏诊，因此寻找cSLE特异性免疫检测指标和临床指标对疾病的诊断十分重要。

细胞因子在调节免疫应答中起关键作用，其通常由T细胞、B细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞合成，在固有免疫和适应性免疫中诱导局部炎症和全身急性期保护反应。研究表明，细胞因子信号转导受损可导致自身免疫功能异常，并且能加剧疾病的严重程度[4]。辅助性T细胞(Th)亚群Th1、Th2和Th17产生的肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-17等细胞因子在SLE的发病机制中发挥关键作用[5]。本研究通过分析Th亚群相关细胞因子的表达及其与疾病活动程度的相关性，探讨cSLE疾病活动期的潜在生物标志物。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月至2020年12月于本院儿科就诊的cSLE患儿47例作为观察组。所有cSLE患儿均符合美国风湿病学会(ACR)1997年修订的诊断标准。依据SLE疾病活动度评分(SLEDAI评分)将观察组分为非活动期组(≤6分，18例)，活动期组(>6分，29例)。另选取同期来本院体检的健康体检儿童20例作为对照组。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象家属均签署知情同意书。与对照组比较，非活动期组和活动期组cSLE患儿红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、尿蛋白、抗双链DNA抗体(anti-dsDNA)水平和SLEDAI评分升高(P<0.05)，补体C3和C4水平有小幅降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。与非活动期组比较，活动期组ESR、CRP、尿蛋白、anti-dsDNA水平和SLEDAI评分有不同程度上升(P<0.05)。3组年龄、性别构成比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组研究对象一般资料比较

1.2仪器与试剂 全自动血细胞分析仪和离心机购自美国贝克曼库尔特有限公司，流式细胞仪FACS Canto购自美国BD公司。CD4+、CD8+T细胞亚群检测试剂盒(流式细胞仪法-6色)购自碧迪医疗器械上海有限公司，人Th1/Th2/Th17亚群检测试剂盒(流式荧光法)购自江西赛基生物有限公司，BD VacutainerTM血样采集管和TrucountTM绝对计数管购自美国BD公司。

1.3方法

1.3.1Th1、Th2和Th17亚群相关细胞因子检测 使用BD VacutainerTM采血管无菌采集静脉血5 mL，2 000 r/min离心5 min，准备血浆标本0.5 mL。配置标准品：取300 μL标准品原液至300 μL样品稀释液中混匀，标记为管1，再从管1中取300 μL加至300 μL样品稀释液中混匀，标记为管2，如此倍比稀释至稀释度为1∶512。标本染色：捕获微球混合液(A)1 000 r/min离心5 min，弃上清液，加入与上清液等体积的微球缓冲液(H)，混匀，避光30 min；混匀，每管加25 μL捕获微球混合液；样品管每管加25 μL待测血浆标本；标准品管每管加25 μL稀释标准品；将荧光检测试剂(C)按25 微升/管加至所有管中，混匀，避光2.5 h，每管加1 mL磷酸盐缓冲液(PBS)，1 000 r/min离心5 min，弃上清液；每管加100 μL PBS，于流式细胞仪FACS Canto上机检测。

1.3.2CD4+T和CD8+T细胞亚群检测 取CD4+、CD8+T细胞亚群检测试剂20 μL至BD TrucountTM绝对计数管内，用反向移液技术吸取抗凝全血50 μL，加入至BD TrucountTM绝对计数管，混匀，室温(20～25 ℃)避光孵育15 min，取450 μL BD流式细胞术(FACS)(1×)溶血素加入管中，混匀，室温(20～25 ℃)避光孵育15 min，流式细胞仪FACS Canto上机检测。

2 结 果

2.1cSLE患儿Th1、Th2和Th17亚群相关细胞因子水平 与对照组相比，非活动期组和活动期组cSLE患儿Th1亚群细胞因子TNF-α和干扰素(IFN)-γ，Th2亚群细胞因子IL-6和IL-10，Th17亚群细胞因子IL-17水平增加(P<0.05)。与对照组比较，活动期组Th2亚群细胞因子IL-4水平呈升高趋势(P<0.05)。与非活动期组比较，活动期组IL-6、IL-10和IL-17水平升高(P<0.05)，IL-4、TNF-α和IFN-γ水平呈上升趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。见图1。

注：A为Th1亚群；B为Th2亚群；C为Th17亚群；与对照组比较，aP<0.05；与非活动期组比较，bP<0.05。

2.2各组CD4+/CD8+比较 与对照组比较，活动期组cSLE患儿CD4+/CD8+降低(P<0.05)，非活动期组CD4+/CD8+仅小幅下降，但差异无统计学意义(P>0.05)。非活动期组和活动期组CD4+/CD8+差异无统计学意义(P>0.05)。见图2。

注：与对照组比较，aP<0.05。

2.3cSLE患儿血清IL-6、IL-10水平与IL-17的相关性分析 Pearson相关分析结果显示，cSLE患儿血清IL-6水平与IL-10、IL-17均呈正相关(r=0.415、0.497，P<0.05)。血清IL-10水平与IL-17水平呈正相关(r=0.402，P<0.05)。

2.4cSLE患儿血清IL-6、IL-10、IL-17水平与SLEDAI评分的相关性分析 Pearson相关分析结果显示，cSLE患儿血清IL-6、IL-10、IL-17水平与SLEDAI评分均呈正相关(r=0.373、0.440、0.412，P<0.05)。

2.5ROC曲线分析 ROC曲线分析显示：IL-6最佳临界值为23.25 pg/mL，灵敏度为82.1%，特异度为84.2%，曲线下面积(AUC)为0.907(P<0.05)；IL-10最佳临界值为32.50 pg/mL，灵敏度为78.6%，特异度为84.3%，AUC为0.853(P<0.05)；IL-17最佳临界值为33.00 pg/mL，灵敏度为75.0%，特异度为63.2%，AUC为0.767(P<0.05)。

3 讨 论

SLE是一种慢性自身免疫性疾病，其典型病理生理学机制涉及抗核抗体的产生，免疫复合物在全身基底膜中的沉积以及其引起的炎性反应[6]。cSLE呈现出的临床表现和严重的并发症，可能是由于促炎性细胞因子所致。持续且过量的细胞因子产生是自身免疫性疾病的标志，并且在疾病的发病机制中发挥重要作用[7]。研究发现，Th1通过产生IFN-γ介导针对细菌和病毒等微生物感染的免疫应答，但不受控制的Th1会导致多种自身免疫性疾病[8]。LI等[9]报道SLE和类风湿性关节炎(RA)等自身免疫性疾病患者血液中Th1亚群细胞因子IL-1β和IFN-γ、Th2亚群细胞因子IL-6、Th17亚群细胞因子IL-17A和IL-23水平均明显升高，并提出细胞因子可能是监测和预测SLE严重程度的重要指标。本研究通过检测cSLE患儿Th1、Th2和Th17亚群细胞因子的水平，分析高表达的细胞因子与疾病活动程度的相关性，探讨预测cSLE疾病活动期的潜在生物标志物。

本研究结果显示，cSLE患儿活动期组ESR、CRP、尿蛋白、anti-dsDNA水平相比对照组和非活动期组均有不同程度升高(P<0.05)。活动期CRP和ESR的升高提示疾病可能伴发感染或组织损伤；血清anti-dsDNA多属IgG型抗体，其水平升高提示B细胞过度活化产生高滴度抗自身DNA和细胞核组分的抗体，可针对性攻击自身组织，造成组织和器官的损伤；尿蛋白的检出提示患儿出现肾脏损伤或肾功能减退，可能合并感染等并发症。与对照组比较，活动期组cSLE患儿CD4+/CD8+降低(P<0.05)。cSLE患儿体内免疫复合物在脏器沉积，使驻留的免疫细胞数量增加，CD4+T细胞的Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)等多个淋巴细胞亚群失衡。CD4+是直接反映机体免疫力的重要指标，CD4+/CD8+降低提示机体处于免疫失衡状态，CD4+、CD8+的变化及CD4+/CD8+失衡在SLE的发病中起重要作用。细胞因子检测结果显示，与健康儿童相比，cSLE患儿Th1亚群TNF-α和IFN-γ，Th2亚群IL-6和IL-10，Th17亚群IL-17水平均有不同程度的增加(P<0.05)；疾病活动期IL-6、IL-10和IL-17水平较非活动期升高(P<0.05)。对本研究高度差异性表达的细胞因子IL-6、IL-10和IL-17的相关性分析发现，IL-6水平与IL-10、IL-17均呈正相关(r=0.415、0.497，P<0.05)，IL-10水平与IL-17呈正相关(r=0.402，P<0.05)。IL-6促进Th17分化并分泌IL-17，同时IL-17会促进IL-6的产生，Th17细胞途径与IL-6之间存在正反馈回路。细胞因子IL-10在SLE中的致病机制存在争议，通常认为IL-10促进了自身反应性B细胞的生长和分化[10]。IL-10水平与IL-6、IL-17呈正相关，提示三者可协同促进T和B细胞的自身免疫应答反应。血清IL-6、IL-10、IL-17与SLEDAI评分均呈正相关(r=0.373、0.440、0.412，P<0.05)，表明IL-6、IL-10、IL-17水平越高，SLE疾病活跃程度越高，病情越严重。ROC曲线显示，3个细胞因子的早期检测和定量分析有助于预测cSLE疾病活动度，可用于评估疾病的活跃度和恶性程度，且IL-6水平的预测效能高于IL-10和IL-17。

综上所述，Th亚群细胞因子IL-6、IL-10和IL-17在cSLE的发病机制及疾病的发展中发挥重要作用。血清IL-6、IL-10和IL-17水平可作为cSLE患者疾病活动程度判断的备选生物标志物。