不同提取方式对毛发中甲基苯丙胺检测影响的研究

张泽鹏

（重庆市法医学会司法鉴定所，重庆 400010）

甲基苯丙胺是新型毒品的一种，是我国滥用最广泛的毒品之一。由于先进的检测技术在我国的应用没有得到普及，我国公安机关对吸食甲基苯丙胺人员的生物样品检测方法主要采用免疫层析胶体金标技术，此技术的最低检出浓度为1000ng/mL，而且由于此技术的原理，很容易受到药物干扰而造成假阳性或假阴性，不能满足禁毒工作对灵敏度和准确度的要求。

一般公安机关在处理吸毒案件中，血液和尿液是最为常见的两种生物检材，血液和尿液的检测结果也可以作为判断是否吸食毒品的直接证据，但是影响毒品在人体内含量的因素有很多，例如毒品的摄入剂量、毒品的入体途径和代谢过程中的个体差异等等。而且毒品在人体内经过代谢，含量会逐渐降低直至完全消失，这对公安机关打击吸毒人员、收集吸毒证据十分不利。而毛发作为近期才被广泛使用的生物检材，可以反映吸毒人员某段较长时间摄入毒品的情况，这点是血液和尿液不具备的。

2018年10月31日中华人民共和国公安部发布了公禁毒〔2018〕938号《关于印发〈涉毒人员毛发样本检测规范〉的通知》[1]，规定了毛发中甲基苯丙胺的检测阈值为0．2ng/mg，当涉毒人员发根端3厘米以内的头发中毒品检出含量高于阈值时认定为阳性，且可以认定被检人在提取头发之日前6个月内摄入过毒品。头发中的毒品检验可以反映较长时间滥用情况是因为毒品在体内会进行代谢，当吸毒人员吸食了毒品以后，毒品成分会在体内留存一段时间，这段时间生长出来的头发中就会含有毒品成分，在头发生长过程中毛干形成时，这些毒品就会固定在毛干中随之生长，固定在毛干中之后毒品就仅有微弱的扩散作用，毒品成分会十分缓慢地向上下两端的毛发扩散。人的头发一个月生长0．8-1．2厘米，分段检验毛发可以大致判断出被检人在什么时间摄入过毒品，这也是毛发中毒品检验最大的优势所在。

目前行业内毛发中甲基苯丙胺提取常用酸水解、碱水解、甲醇超声提取三种方法[2]，本文主要分析此三种方法对毛发中甲基苯丙胺的检测结果的影响，从而为今后的工作提供参考。

一、前处理方法

（一）酸水解

SF/Z JD0107004-2016《生物检材中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的测定》中 10．1．3．3．11项中的“毛发的酸水解”方法。

（二）碱水解

F/Z JD0107004-2016《生物检材中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的测定》中 10．1．3．3．11项中的“毛发的碱水解”方法。[3]

（三）甲醇超声提取

SF/Z JD0107025——2018《毛发中15种毒品及其代谢物的液相色谱-串联质谱检验方法》中6．1 项样品前处理方法。[4]

二、原理

化学物质有“相似相溶原理”，即结构或者极性相似的两种化学物质可以互溶，甲基苯丙胺易溶于有机溶剂、难溶于水的特点，分别使用酸消化、碱消化和物理研磨三种方法将目标物甲基苯丙胺从毛发内部释放出来，并在碱性条件下用有机溶剂乙醚或甲醇将甲基苯丙胺从毛发中提取出来，并将提取液浓缩后，用液相色谱-串联质谱仪的多反映检测（MRM）模式检测。通过对留样的甲基苯丙胺呈阳性的毛发进行酸水解、碱水解和甲醇超声三种不同提取方式的对照分析，综合研究不同提取方式对毛发中甲基苯丙胺检测的影响。

三、主要仪器

液相色谱质谱联用仪（SHIMADZU LCMS-8050）；色谱柱（Waters C18柱，100mm×2．1mm，1．8µm）；组织研磨仪（力辰LC-TG-24）；超声波清洗机（SYU-7-200T）。

（一）样品前处理

取甲基苯丙胺为阳性的留样毛发适量，装在15mL的离心管中，依次用水和丙酮震荡清洗两次，晾干后剪成1mm段，供检。

1．酸水解：各称取20mg的留样毛发，分为三组，分别加入1mL0．1mol/L盐酸溶液浸润，45℃水浴溶解12-15小时，取出后加入10%的氢氧化钠溶液调至PH＞11。毛发水解液用3mL乙醚提取，涡旋混合、离心分层，转移乙醚层至另一离心管中，约60℃水浴中挥干。残留物用100μL的甲醇溶解，上机分析。

2．碱水解：各称取20mg的留样毛发，分为三组，分别加入1mL10%的氢氧化钠溶液80℃水浴水解5-10min，取出。毛发水解液用3mL乙醚提取，涡旋混合、离心分层，转移乙醚层至另一离心管中，约60℃水浴中挥干。残留物用100μL的甲醇溶解，上机分析。

3．甲醇超声提取：取适量的留样毛发，置冷冻研磨仪中粉碎，呈粉末状。各称取20mg留样毛发粉末，分为三组，各加入1mL甲醇，冰浴超声30min，离心取上清液于60℃水浴空气流下吹干。残留物用100μL甲醇复溶，上机分析。

（二）检测方法

使用液相色谱质谱联用仪（SHIMADZU LCMS-8050），采用多反监测模式（MRM）对毛发提取液进行检验；色谱柱使用Waters C18柱（100mm×2．1mm，1．8µm）；柱温：室温；碰撞气：氩气（Ar），纯度＞99．999%，流动相A：乙腈，流动相B：20mmol/mL乙酸铵和0．1%甲酸缓冲液；流速：400μL/min，进样量2μL；离子源：电喷雾电离-正电子模式（ESI+）；碰撞气、气帘气、雾化气、辅助加热气均为高纯氮气；去簇电压、碰撞能量等电压值均优化到最优灵敏度。

甲基苯丙胺的母离子/子离子对为150．1和119．1、150．1和91．1，通过多反监测模式（MRM）检验甲基苯丙胺的这两个母离子/子离子对，来获取检验数据结果。

（三）提取效率的比较

本文提取效率比较的基本原理采用外标法的原理进行比较，使用三个检测数据中150．1/91．1母离子/子离子峰面积的平均值作为对比参数，来比较三种提取方式对毛发中甲基苯丙胺检测的提取效率，其中甲醇超声提取法150．1/91．1母离子/子离子平均峰面积为：97642557；碱水解的150．1/91．1母离子/子离子平均峰面积为：43075336；酸水解的150．1/91．1母离子/子离子平均峰面积为：10283065。从以上数据中可以看出，甲醇超声提取法检测的甲基苯丙胺的特征离子对色谱峰的峰面积大约是碱水解提取法的2．3倍、大约是酸水解提取法的9．5倍。

四、结论

甲基苯丙胺是碱性化合物，在碱性条件下可以溶于有机溶剂，而在酸性条件下，甲基苯丙胺会形成盐，而溶于水中，毛发酸水解后将水解液再调碱性用乙醚提取，多了一个提取环节，降低了甲基苯丙胺的回收率，所以使用碱水解的方式用乙醚提取效率要高于酸水解。而甲醇超声提取方法是最直接的提取法，将毛发研磨成粉末后将毛干中的甲基苯丙胺释放出来直接使用甲醇超声提取，所以提取效率最高。由以上可以得出结论，甲醇超声提取在这三种提取方式中提取效率最高，碱水解提取法效率仅次于甲醇超声提取法，而酸水解的提取效率最低。