减肥袋泡茶总黄酮含量测定的方法学研究

◎ 何春艳，关天竹，谭国慧，吴洪亮

（绿瘦健康产业集团股份有限公司，广东 广州 510385）

黄酮类化合物是广泛存在于自然植物中的植物次生代谢产物，其种类繁多，结构类型多样，国内外大量的研究证实此类化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、调节心血管和减肥等多种生物活性及药理作用[1-3]。在降脂减肥方面，黄酮类化合物主要通过促进脂肪β-氧化、抑制脂肪酶和脂肪酸合酶活性、促进机体能量代谢、反馈抑制食欲等方面发挥作用[3]。天然植物原料荷叶、决明子、泽泻、山楂和绿茶等均含有黄酮类化合物，也常用于减肥的保健食品中。本文研究所用的减肥袋泡茶由山楂提取物、决明子提取物、荷叶提取物、泽泻提取物和绿茶提取物等组方，总黄酮为该产品的标志性成分之一。笔者采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，对其中总黄酮含量进行测定，并对其方法学进行考察，旨在为同类型产品的研发及质量控制提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器

P9紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）、5810r高速离心机（艾本德）、DFY500摇摆式高速粉碎机（温岭市大德药机公司）、AUW220D分析天平（岛津）、XT-1030T超声波清洗机（广东顺德先泰超声工程设备有限公司）和层析柱（外径：20 mm，滤芯：G1）。

1.1.2 供试品及试剂

绿瘦碧迪牌秀尔茶（河南恒春堂药业有限公司）；芦丁对照品（中国食品药品检定研究院）；聚酰胺粉（国药集团沪试：100～200目）；乙醇、石油醚I、甲醇、三水合乙酸钠、硝酸铝和乙酸均为分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 标准曲线制备

精密称取芦丁标准品10.00 mg置于50 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至50 mL，即得0.2 g·L-1芦丁标准储备溶液，储存于冰箱备用。分别精密量取芦丁标准品溶液0.00 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL和2.50 mL置于25 mL比色管，先加入0.5 mL10%的硝酸铝溶液，再加0.5 mL 0.2 mol·L-1乙酸-乙酸钠溶液（pH=5.6），摇匀，用70%乙醇定容至刻度，摇匀静置30 min显色后，在波长406 nm处测其吸光度值，用空白试剂作参比。以芦丁标准品的质量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.2 样品液的制备

取适量绿瘦碧迪牌秀尔茶内容物在粉碎机中粉碎，混匀备用。称取1.0 g均匀样品，加25 mL 75%乙醇，摇匀后超声提取30 min，定容25 mL，4 000 r·min-1离心5 min备用。称取聚酰胺粉2 g于蒸发容器中，吸取4 mL上清液吸附于粉上，于70 ℃挥发去除乙醇，然后转入层析柱洗脱。先用约20 mL石油醚I洗去杂质，吹尽醚液，弃去，然后用无水甲醇洗脱黄酮，定容至50 mL作为待测样品液。

1.2.3 样品的测定

取1.2.2的样品液10 mL于25 mL比色管中，加入70%乙醇定容至刻度，摇匀作为样品空白。另取样品液10 mL到25 mL比色管，先加入0.5 mL10%的硝酸铝溶液，再加0.5 mL0.2 mol·L-1乙酸-乙酸钠溶液（pH=5.6），摇匀，用70%乙醇定容至刻度，摇匀静置。30 min后，参比样品空白，在波长406 nm处测其吸光度值，通过标准曲线得出样品液芦丁含量，计算出样品的总黄酮含量。

1.2.4 重复性

精密称取袋泡茶内容物1.0 g，共6份，按照1.2.2的方法制备样品液，按照1.2.3的方法进行6个样品的测定，由同一操作人员、同一时间、同一仪器重复测定6次，计算结果的相对标准偏差（RSD）。

1.2.5 中间精密度

在不同日期、不同人员、不同仪器的情况下重复测定6个样品。与上述重复性试验结果进行比较，计算结果的相对标准偏差（RSD）。

1.2.6 加标回收率

以重复性试验总黄酮含量平均值作为样品本底值，用低（80%）、中（100%）、高（120%）3种水平加标量进行加标试验，共称取9个样品，于样品中分别加入不同量芦丁对照品，按照1.2.2的方法制备样品液，按照1.2.3的方法进行9个样品的测定，计算样品的加标回收率。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

以芦丁质量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。标准曲线方程为y=1.024 9x-0.000 8，R2=0.999 9。表明芦丁在0～0.5 mg检测浓度范围内与对应的吸光度呈良好的线性关系，见图1。

图1 芦丁标准曲线图

2.2 重复性结果

由表1可知，测得6个样品的平均含量为1.13 g/100 g，相对标准偏差RSD为2.27%，符合方法要求[4]。

表1 重复性结果表

2.3 中间精密度结果

由表2可知，不同日期、不同人员、不同仪器条件下分别平行测定6个样品，测得的平均含量为1.15 g/100 g，相对标准偏差RSD为2.57%，符合方法要求[4]。

表2 中间精密度结果表

2.4 方法回收率

以重复性试验总黄酮含量平均值1.13 g/100 g作为计算本底值，用低（80%）、中（100%）、高（120%）3种水平加标量（相当于加入9.0 mg、11.3 mg、13.6 mg芦丁标准品）进行加标试验，共称取9个样品，按试验方法操作，于样品中分别加入不同量芦丁对照品，按试验方法处理进行比色测定。结果如表3所示，方法平均加标回收率在97.43%，符合回收率在95%～105%的要求[5]。

表3 回收率实验结果表

3 结论

植物中黄酮含量的测定主要有紫外分光光度法、HPLC法、毛细血管法等，本试验采取的紫外分光光度法具有仪器设备简单、操作简便易掌握、重复性好、准确度和精密度较高等特点，应用最为广泛[6]。本文采用紫外分光光度法进行减肥袋泡茶的总黄酮含量测定，方法的重复性、中间精密度、回收率均良好，可作为同类型产品中总黄酮类化合物的测定方法，为相关产品的研发和质量控制提供了依据。