市售蜂蜜中花粉粒总数测定

徐姗娜，卢 军，侯鸿飞，唐 蕾，金菊萍

（汉中市食品药品监督检验检测中心，陕西汉中 723000）

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质[1]。蜜蜂采集花蜜时会吸入一部分花粉到蜜囊中，花蜜中不可避免地混入了蜜源植物的花粉，而每种花粉都有自己特有的形态特征，所以花粉是天然蜂蜜具有确定性、稳定性和追溯性的天然标识物。根据蜂蜜中花粉的种类和含量可区分蜂蜜的品种、辨别优劣蜂蜜。

陕西省汉中市北依秦岭，南屏巴山，气候温和湿润、干湿有度，造就了物种的多样性。森林覆盖率为52%，林草的植被率达60%，境内的两大水系（汉江和嘉陵江）均为长江一级支流，是国家“南水北调”中线工程的水源地。汉中具有良好的蜂养殖自然生态环境资源，土蜂养殖历史悠久，主要生产的蜜种是油菜花蜜和百花蜜。汉中是传统的油菜种植生产基地，全市有7.5 亿m2的油菜花田，为当地蜂群提供了充足蜜源。而秦巴山脉花草资源丰富，大量的野生山花以及野生或人工栽培的中草药资源，如党参、山茱萸、大黄、天麻、杜仲、厚朴、五味子等，都是本地产百花蜜的重要蜜源。近年来，汉中市蜂蜜产业得到突飞猛进发展，2020年7 月20 日实施的优质汉中蜂蜜（T/HZSBX 02—2020）[1]和优质汉中土蜂蜜（T/HZSBX 03—2020）[2]中均将蜂蜜中花粉浓度列为特征指标，参考限量值分别为≥10 000 个/mL和≥14 000 个/mL。

本研究随机抽取了13 批汉中市市面上销售的蜂蜜，根据《蜂蜜中植物花粉的测定方法》（GB/T 23194—2008）[3]，分别测定其全部花粉粒含量，以对其品质优劣进行初步判定。

1 材料与方法

1.1 材料

13 批蜂蜜，购于汉中市市场。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂

硫酸，天津市风船化学试剂科技有限公司；乙酸，天津市天力化学试剂有限公司；乙酸酐，天津市天力化学试剂有限公司；甘油，天津市科密欧化学试剂有限公司；苯酚，天津市天力化学试剂有限公司。

1.2.2 仪器

冷冻离心机H2100R，湖南湘仪离心机仪器有限公司；数显恒温水浴锅HH-8，国华电器有限公司；光学显微镜Ci-L，尼康仪器有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 试样的制备

未结晶的样品，搅拌均匀备用。有结晶的样品，在密闭情况下，置于55 ℃左右的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温备用。称取均匀蜜样25 g，加入40 ℃的50 mL 蒸馏水，使蜂蜜均匀溶解。

1.3.2 花粉粒总数测定

将试样溶液倒入离心管中，以2 000 r/min 的速度离心10 min，弃去55 mL 的上清液，加入5 mL 乙酸并拌匀，浸泡2 h。进行离心（2 000 r/min，10 min），弃去10 mL 上清液，加入新鲜配制的乙酸酐和硫酸的混合液6 mL，并拌匀，然后将离心管放入80～90 ℃水浴中加热7 min。停止加热后，迅速离心（2 000 r/min，10 min），弃去5 mL 上清液，加10 mL 蒸馏水洗涤，离心水洗3 次后，弃去上清液，使试样溶液留下约5 mL 的样液。加入1 mL 50%的甘油保存，并加入2～3 滴苯酚作为防腐剂。

利用血细胞计数板制片，静置5 min后，于显微镜下计数，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换高倍镜进行计数。本次采用的血细胞计数板为25 中方格、16 小方格款。

1.4 不同离心转速对每个计数室花粉粒总数的影响测定

以6 号蜂蜜为样本，按照1.3.1 和1.3.2 方法将步骤中所使用的离心转速和时间依次设定为4 000 r/min 10 min、6 000 r/min 10min、8 000 r/min 10 min、10 000 r/min 10 min、10 000 r/min 5 min，分别计数花粉粒总数。

2 结果与分析

2.1 13 批蜂蜜花粉粒总数的测定

按照1 mL 样液中的总花粉粒数=25 个中方格总花粉粒数×104计算，全部13 批蜂蜜花粉粒总数统计结果见表1。由表1 可知，不同品牌、不同批次的蜂蜜中花粉粒总量差距较大，其中2、4、7 号样品中花粉粒数量为0，均购自本地超市，属大规模工业生产产品。导致花粉粒数为0 的原因有可能是这些品牌的蜂蜜在经过高密度过滤，移除了花粉在内的各种杂质[4]，花粉一方面会影响到蜂蜜的营养价值，另一方面大规模生产中的高温加热也会直接影响蜂蜜的口感和风味。因此，选择小规模生产的土蜂蜜，可以最大程度地品尝到蜂蜜的原始风味。广大消费者在购买时可以根据自己的需求选购。

表1 13 批蜂蜜花粉粒总数测定结果

2.2 不同离心转速对每个计数室花粉粒总数的影响

以6 号蜂蜜为样本，测定不同离心转速对每个计数室花粉粒总数的影响（见表2），由表2 可知，增大离心转速后所得花粉粒总数与国标要求的2 000 r/min 比较并无显著差异(P＞0.05)，而将转速提高至10 000 r/min，时间缩短至5 min 时所得花粉粒总数与国标要求的2 000 r/min 离心10 min 比较无显著性差异（P＞0.05），因此在实验室大批量测定蜂蜜中花粉浓度且条件允许时，可以采用提高转速缩短时间的方式加快试验进度。

表2 不同离心转速对每个计数室花粉粒总数的影响

3 讨论

本研究以13 批汉中市市售蜂蜜为研究对象，采用国标方法进行了测定，因本次试验所采样品多数为本地生产的百花蜜，所以并未测定单一种类花粉的含量和浓度，而是测定总花粉粒数量。结果显示，不同品牌、批次的蜂蜜中花粉含量差异较大。其中两种高山棒棒蜜所含花粉含量最高，可能与取蜜方式、过滤效率有直接关系，因高山棒棒蜜多采用压榨取蜜法，会混入更多蜂脾和花粉，也带来了更高的营养价值。有研究显示压榨蜂蜜中的花粉含量可比分离蜂蜜高出4、5 倍之多[5]。本次试验显示不同蜂蜜的花粉粒测定的确可以反映蜂蜜的品质高低，国标并没有将蜂蜜中花粉粒含量作为判定蜂蜜真假的依据，但笔者认为蜂蜜中花粉粒含量的测定试验操作简单、耗时短、成本低，可以作为一种判断蜂蜜真伪的初筛手段，经检测不含花粉粒或者所含花粉粒种类与标示蜜源不吻合者，再通过蛋白质为“内标”的同位素检测法或高效液相色谱质谱联用法进行真假的鉴定。