红景天标准汤剂制备及质量标准研究

杨明爽 边雨 曲佳乐 高陆

【摘 要】 目的：制备红景天标准汤剂，并建立其质量标准，为红景天配方颗粒的质量控制提供参考依据。方法：按照标准汤剂的制备要求，制备十五批不同产地红景天标准汤剂。以红景天苷作为定量检测指标，计算其出膏率及转移率，采用高效液相色谱法建立标准汤剂指纹图谱，用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》 软件进行指纹图谱分析。结果：红景天标准汤剂平均出膏率为24.82 %;红景天苷平均转移率为48.45%，红景天标准汤剂指纹图谱共有11个共有峰，指认出红景天苷、酪醇2种成分。十五批红景天标准汤剂相似度均大于0.90。結论：红景天标准汤剂制备规范，建立的指纹图谱方法简便有效，为红景天标准汤剂质量控制提供了较全面的信息。

【关键词】

红景天标准汤剂;红景天苷;指纹图谱;转移率;出膏率

【中图分类号】R917   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2021）19-0022-05

Study on Preparation and Quality Evaluation of Rhodiola crenulata Standard Decoction

YANG Mingshuang BIAN Yu QU Jiale GAO Lu*

Jilin Modern Chinese Medicine Engineering and Research Center Co.，Ltd.，Changchun 130012，China

Abstract：

Objective To prepare Rhodiola crenulata standard decoction and establish the quality standard， and provide reference for quality control of Rhodiola crenulata formula granules. Methods Fifteen batches of Rhodiola crenulatas tandard decoction were prepared according to the standardization method. With salidroside as the detection index， the transfer rate and extractum rate were calculated and the HPLC chromatograms was established. Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM （2012） was used to analyze and compare the fingerprint. Results The average extractum rates of Rhodiola crenulata standard decoction were 24.82%， and average transfer rates were 48.45%，eleven common peaks were determined and two were identified. The similarity evaluations were carried out on 15 batches of Rhodiola crenulata standard decoction， and their similarities were all greater than 0.90. Conclusion The preparation method of Rhodiola crenulata standard decoction is standart， the established fingerprint method is simple and effective， and provides comprehensive information for the quality control of Rhodiola crenulata sformula granules.

Key words：

Rhodiola crenulata Standard Decoction; Salidroside; Fingerprint; Transfer rate; Extractum Rate

红景天是景天科植物红景天Rhodiola crenulata（Hook. f. et Thoms. ）H. Ohba的干燥根和根茎。主要分布西藏、四川、云南等西部地区[1]。中国古代第一部医学典籍《神农本草经》，将红景天列为药中上品。化学成分主要有酚类、萜类、黄酮类、苷类、木质素类等，其中酪醇和红景天苷被认为是红景天的主要药理活性成分[2]。红景天具有很高的药用价值，具有抗辐射、抗疲劳、抗衰老、增强免疫力等功效[3-4]。

传统汤剂存在服用、存储、携带不便等问题。中药配方颗粒和传统汤剂相比具有质量稳定、疗效可靠、便于携带、服用方便、便于保管等优势[5-7]。依据国家药典委员会发布的《中药配方颗粒质量控制与标准汤剂技术要求（征求意见稿）》，将标准汤剂作为衡量中药配方颗粒是否与汤剂基本一致的标准参照物，以保障临床用药的准确性和剂量的一致性[8-9]。本研究旨在开展红景天标准汤剂制备及质量标准研究，为配方颗粒后续生产及质量控制提供参考依据。

1 材料

1.1 仪器 Ultimate3000型高效液相色谱仪（美国Thermo公司）;JY2003电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）;JY-8多锅煎药机（山东青州精诚医药设备制造有限公司）;Scientz-30F冷冻干燥机（宁波新芝生物科技股份有限公司）;SB-1200D 型超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）

1.2 药品与试剂 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，来自Fisher公司，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

对照品：红景天苷对照品（批号110818-20160705，纯度：98.8%），酪醇对照品（批号 111676-200602）均来自中国食品药品检定研究院;

样品：共收集红景天饮片十五批，其中西藏7批;新疆4批;甘肃2批;河北2批;包含了红景天的道地产区和主产区。

2 方法与结果

2.1 标准汤剂的制备 按照《中药配方颗粒质量控制与标准汤剂技术要求（征求意见稿）》的技术要求确定制备方法：取红景天饮片100 g，加水煎煮2次，第一次加9倍水浸泡30 min，武火煮沸，文火保持微沸60 min，用200目濾布过滤，第二次加7倍水煎煮，武火煮沸，文火保持微沸40 min，过滤，合并滤液;采用减压浓缩方法进行低温浓缩，温度不超过50 ℃，浓缩至100 mL;将浓缩液置于培养皿，-56 ℃冻存12 h 后冷冻干燥，即得红景天标准汤剂干粉。

2.2 红景天苷含量测定 参照2015版《中国药典》[10]红景天药材项下红景天苷含量测定方法中流动相体系，进行了供试品溶液制备及相关方法学考察，确定检测方法如下。

2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水溶液（15∶85）为流动相;检测波长为275 nm。色谱图如图1所示。

2.2.2 对照品溶液的制备 取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含红景天苷0.50 mg的溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 方法学考察

2.2.4.1 线性关系的考察 精密称取红景天苷对照品4.68 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.4680 mg·mL-1的红景天苷对照品贮备液。量取六份对照品贮备液各1 mL，分别加入0 、1 、2 、3 、4 、5 mL甲醇，摇匀，配制成浓度分别为0.4680、0.2340、0.1560、0.1170、0.0936、0.0780 mg·mL-1的对照品溶液，精密吸取5 μL，按照“2.2.1”项下色谱条件测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=21.666 x+0.2354，r=0.9993，结果表明，红景天苷进样量在0.39 ～2.34 μg范围内线性良好。

2.2.4.2 精密度试验 取同一批（编号S1）红景天标准汤剂约0.25 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL。按“2.2.1” 项下色谱条件测定，连续进样6次，结果红景天苷峰面积RSD=0.85%，表明仪器精密度良好。

2.2.4.3 重复性试验 取同一批（编号S1）红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备6份供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL。按“2.2.1” 项下色谱条件测定，测得同一批标准汤剂干粉中红景天苷的含量均值为1.59 %，RSD =1.29%（n=6），表明方法重复性良好。

2.2.4.4 稳定性试验 取同一批（编号S1）红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL。按“2.2.1” 项下色谱条件测定，分别在制备后放置0、4、8、12、16、20 h进样检测，结果红景天苷峰面积RSD=1.04%（n=6），表明供试品溶液在20 h内是稳定的。

2.2.4.5 加样回收率试验 取已知含量的红景天苷标准汤剂干粉（编号S1），约0.125 g（共6份），精密称定，分置25 mL容量瓶中，分别精密加入一定量的红景天苷对照品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.2.1”色谱条件进行液相分析。结果，平均回收率为101.41%，RSD为1.54%（n=6），表明本方法准确度良好。

2.2.5 指标成分含量测定 按照“2.2.1”项下色谱条件测定十五批标准汤剂中红景天苷的含量，并计算红景天苷转移率。结果见表2。

结果，十五批标准汤剂平均出膏率为24.82%，按照均值加减30%的范围浮动为17.37%～32.27%;标准汤剂中红景天苷平均含量为1.81%，按照均值加减30%的范围浮动为1.26%～2.35%;红景天苷平均转移率为48.45%，按照均值加减30%的范围浮动为33.92%～62.99%，本研究的十五批标准汤剂出膏率、红景天苷含量及转移率均在此范围内，表明制备工艺规范，稳定、可行。

2.3 指纹图谱研究

2.3.1 色谱条件 色谱柱为Aglient C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）为流动相;梯度洗脱，0～20 min，5%～10%乙腈;20～75min，10%～20%乙腈;75～120 min，20%～30%乙腈。检测波长为275 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温为25 ℃。此色谱条件下，各色谱峰的分离度良好，峰形对称。色谱图如图2所示。

2.3.2 混合对照品溶液的制备 取红景天苷、酪醇对照品适量，加入甲醇制成每1 mL含红景天苷0.500 mg、酪醇0.686 mg，即得混合对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 称取红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 方法学考察

2.3.4.1 精密度试验 取同一批红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，按照“2.3.3”方法制备供试品溶液一份，按“2.3.1”项下连续进样6次，以红景天苷（S）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，结果RSD分别为0.20%、1.85%（n=6），均在3 %以内，表明仪器精密度良好。

2.3.4.2 重复性试验 取同一批红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定6份，按照“2.3.3”方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下条件进行测定，以红景天苷（S）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，结果RSD分别为0.45%、2.01%（n=6），均在3 %以内，表明方法重复性良好。

2.3.4.3 稳定性试验 取同一批红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，按照“2.3.3”方法制备供试品溶液，分别在制备后放置0、4、8、12、16、20 h后，按照“2.3.1”项下条件进行测定，以红景天苷（S）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，结果RSD分别为0.23%、1.51%（n=6），均在3 %以内，表明供试品溶液在20 h 稳定性良好。

2.3.4.4 指纹图谱的建立与分析 按照“2.3.1”项下色谱条件测定十五批红景天标准汤剂指纹图谱，将所得到的色谱数据导入《中药指纹图谱相似度评价系统（2012版）软件》，采用多点校正将谱峰自动匹配，中位数法计算得出样品指纹图谱的共有模式。红景天标准汤剂指纹图谱中呈现11个共有峰，通过与对照品图谱比较，指认峰2红景天苷、峰3为酪醇，其中以红景天苷为参照峰（S峰）。十五批次红景天标准汤剂HPLC指纹图谱相似度均在0.9以上。色谱图如图3所示。

3 讨论

《中药配方颗粒质量控制与标准汤剂技术要求》强调标准汤剂是衡量中药配方颗粒是否与单味中药汤剂基本一致的物质基准。本研究共收集十五批红景天饮片样品，分别来自4个主产地（西藏、新疆、甘肃、河北），试验所用样品具有一定的代表性，并且按照规范步骤制备标准汤剂冻干粉，通过监测出膏率、指标成分含量和转移率指标，表明标准汤剂工艺规范，稳定、可行，并为后续配方颗粒研究及大生产提供参考依据。

质量标准研究，采用指纹图谱及红景天苷含量测定相结合，从整体定性及指标成分定量方向进行质量控制，其中指纹图谱是目前控制中药材综合分析最有效、最直观的手段之一，能较全面地获得重要化学群的特征信息，可以更加客观地对中药及标准汤剂进行质量评价和质量控制[11-14]。本研究采用高效液相色谱法，建立紅景天标准汤剂的指纹图谱。通过色谱条件、供试品制备方法等考察，确定最佳检测方法，红景天标准汤剂指纹图谱11个共有峰，并指认出红景天苷、酪醇2种成分，十五批标准汤剂指纹图谱相似度均在0.9以上，方法准确可行。

为红景天标准汤剂、配方颗粒的质量标准和临床用药提供了依据和研究思路。

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（收稿日期：2021-02-04 编辑：刘斌）