液相色谱法测定茶笋中的阿斯巴甜和阿力甜

王攀峰 薛晓伟 邓文辉

阿斯巴甜（Aspartame，天门冬酰苯酸甲酯）由两种不同的氨基酸即天门冬氨酸和苯丙氨酸合成，甜度为蔗糖的200倍，可以有效地降低热量，而且摄入后的消化、吸收和代谢过程不会造成牙齿龋坏，安全性高。阿力甜（Alitanme，L-2-天冬氨酰-D-丙氨酰胺），甜度是蔗糖的2000倍，對酸、对热的稳定性好。阿斯巴甜和阿力甜均为人工合成的非碳化合物类的人造甜味剂，因为甜度高、热量低，多被广泛应用于各类食品中作为糖的替代品。人工合成甜味剂也要限量使用，若超范围使用或者滥用则可能引起不同程度的毒性表现，因此采取科学方法准确测定食品中阿斯巴甜和阿力甜的含量至关重要。

目前GB5009.263-2016《食品安全国家标准 食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定》规定了部分食品中阿斯巴甜和阿力甜的检测方法，茶笋可参考执行，但需要对检验方法进行优化并验证。根据阿斯巴甜和阿力甜易溶于水、甲醇和乙醇等极性溶剂的特点设计提取方法，经过多次试验后发现在制备好的茶笋混匀样品中加入50%甲醇水溶液并过夜泡发后，离心提取试样中的阿斯巴甜和阿力甜效果最佳。

本实验参考国标GB 5009.263-2016《食品安全国家标准 食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定》中蔬菜及其制品的检测方法，建立了一种测定茶笋中的阿斯巴甜和阿力甜的高效液相色谱方法，即：用50%甲醇水溶液提取试样中的阿斯巴甜和阿力甜，以乙腈-水（20︰80）为流动相，流速0.8mL/min，在200nm波长下检测。结果表明，阿斯巴甜和阿力甜的低浓度线性和高浓度线性均良好，检出限、精密度、回收率均满足要求，而且灵敏度高、重复性良好、操作简单，可以准确测定茶笋中的阿斯巴甜和阿力甜，完全能够满足检验机构日常检测任务的要求。

一、仪器与试剂

1.仪器。热电U3000高效液相色谱仪（DAD检测器）;梅特勒XS204电子天平;梅特勒-托利多MS105DU电子天平;HC-3018高速离心机;FLUKO均质器;KQ-500DE超声波清洗器;IKA?MS3漩涡混合器。

2.试剂。阿斯巴甜（BePure，纯度95.0%）;阿力甜（BePure，纯度99.4%）;乙腈（色谱纯，迪马）;甲醇（色谱纯）;乙醇（优级纯）;纯化水。

3.仪器条件。检测器：DAD检测器，检测波长：200nm，流动相：乙腈-水（20︰80）;色谱柱：戴安C18色谱柱，250mm×4.6mm，5μm;流速：0.8mL/min，柱温：30℃，进样量：20μL。

二、试验与方法

1.标准液线性考察。（1）分别准确称取阿斯巴甜0.01089g、阿力甜0.01060g于10mL容量瓶中，用水定容，得到浓度分别为1.0346mg/mL、1.0536mg/mL的标准储备液，于4℃条件下贮存备用。（2）分别准确吸取阿斯巴甜、阿力甜标准储备液各1mL于10mL容量瓶中，用水定容。（3）分别精密移取阿斯巴甜和阿力甜溶液30μL、50μL、60μL、80μL、100μL、600μL、1000μL于10mL容量瓶中，加水定容至10mL，进行液相色谱分析，记录色谱峰面积，并绘制标准工作曲线。

阿斯巴甜线性方程：y=1.2583x-0.0729，r=0.9999。

阿力甜线性方程：y=0.9318x+0.0225，r=1。

2.样品制备。取适量茶笋样品剪成颗粒状后混匀，称取混匀样品约2g（精确到0.001g）于50mL塑料离心管中，加入25mL浓度为50%的甲醇水溶液，盖上盖子摇匀，超声10min，过夜泡发（16h）。用均质器以10000r/min的速度均质1min后，离心取上清液，过滤，滤液经0.45μm有机系滤膜过滤后用于色谱分析。

三、结果与分析

1.检出限确定。称取茶笋混匀样品，分别加入浓度为103.455μg/mL的阿斯巴甜标液0.10mL和浓度为105.364μg/mL的阿力甜标液0.1mL，按上述样品制备方法处理后上机测试。结果表明，2种色谱峰高度均大于其3倍噪音，故在茶笋样品中阿斯巴甜的检出限为0.005g/kg，阿力甜的检出限为0.005g/kg。

2.精密度试验。取茶笋样品中回收试验1份，连续测定6次，记录峰面积，计算RSD值。试验结果详见表1。

3.回收率试验。称取茶笋混匀样品9份，进行3个水平的9次加标回收试验。1、2、3号样品加入浓度为103.455μg/mL的阿斯巴甜标准溶液0.3mL和浓度为105.364μg/mL的阿力甜标准溶液0.3mL，4、5、6号样品加入浓度度为103.455μg/mL的阿斯巴甜标准溶液0.6mL和浓度为105.364μg/mL的阿力甜标准溶液0.6mL，7、8、9号样品入浓度为1034.55μg/mL的阿斯巴甜标准溶液0.2mL和浓度为1053.64μg/mL的阿力甜标准溶液0.3mL，按上述样品制备方法处理后上机测试。以1、2、3、4、5、6、7、8、9号样品测试结果计算回收率，均大于95%，符合国家标准GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检验》附录F要求。

按照本试验中的方法对茶笋中阿斯巴甜和阿力甜进行线性、检出限、精密度、回收率、重复性的验证，均满足相关要求，有利于日常检验工作的开展，也为后续阿斯巴甜和阿力甜检测方法的改进提供了新的思路。

作者简介：王攀峰（1988-），女，汉族，山西平遥人，硕士研究生，中级工程师，研究方向为食品安全。