菌落总数测定不确定度分析

聂庆丽 樊云霄

随着经济的高速发展和GDP的不断增长以及人们生活水平的不断提高，人们对于饮食的安全性要求也在不断提高。食品中微生物的检测已经得到了有关部门的高度重视，特别是食品中菌落总数的测定已经被国家列为食品检测的强制检测项目。因此，菌落总数测定不确定度分析是很有必要的。为了减少实验误差，提高检测结果准确性，检测实验室应具有并应用评定测量不确定度的程序。微生物检验的性质决定其无法运用计量学和统计学正确评估测量的不确定度，但我们旨在找出影响不确定度的各个分量，并评估出它们对结果的影响程度，从而作出合适的质量控制。微生物不确定度的评定主要针对定量测试。

测量的目的是为了得到测量结果是否准确或者有效。如果报告中只表述测量结果而未给出其可信程度或者可信的范围，则测量结果是不准确的。判断测量结果是否准确需要多次测量结果的重复性，也就是测量的质量和准确度，这就需要使用不确定度来表示。文章主要介绍了测量不确定度的方法程序，分析了不确定度来源等。

一、测量方法程序

实验室依照ISO《测量不确定度表示指南》2005版分析评估本实验室菌落总数测试的测量不确定度的评定方法与结果。程序如下：（1）培养基及稀释液配制;（2）样品稀释;（3）样品培养;（4）菌落计数。

二、建立数学模型

根据测量原理及计算公式，建立测定不确定度评定所需数学模型：

三、不确定度分析来源

菌落总数测定主要是称/吸取25g（mL）样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌袋中，均质，制成1∶10的样品匀液。用1mL无菌吸管吸取1∶10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管内，混匀，制成1∶100的样品匀液。以此类推梯度稀释。选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平行。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。及时将15-20mL冷却到50℃的平板计数琼脂倾注平皿，并混合均匀。待琼脂凝固后将平板翻转，（36±1）℃培养48h左右。整个过程未使用任何设备进行量测，所以误差来源均为人为操作的随机误差。

四、实验中不确定度分析

检测过程中重复性测量引起的相对标准不确定度Ui属于A类不确定度，菌落总数测定结果见表1。

根据上述公式计算得标准偏差： S=0.0905，则其相对标准不确定度为Ui=0.064。

五、合成标准不确定度

合成標准不确定度相关内容见表2。

六、扩展不确定度

由t分配之概率表，可查得在95%置信水平上，自由度为14时t值等于2.145，因此在95%置信水平时，若以对数log的方式表示此测试方法之不确定度时，样品编号1值如下：

logX=（logX1+logX2）/2±（0.064×2.145）

=（logX1+logX2）/2±0.13728

=2.6946±0.13728

即分布在2.55732-2.83188之间取反对数antilog之值，其结果分布于361-679之间。扩展不确定度结果见表3。

七、结语

目前测量不确定度的评定方法在我国已得到了广泛应用，测量不确定度的评定和表示方法是计量科学领域发展的一个新进展，人们在测量不确定度的宣传和贯彻上也做出了很多努力，在今后的测量不确定度应用中应不断总结经验，发现存在的问题，不断完善测量不确定度的评定方法。

作者简介：聂庆丽（1979-），女，汉族，河南平顶山人，大学本科，研究方向为微生物学。