彭燕娟
(西藏自治区兽医生物药品制造厂 850003)
羊败血性链球菌病是由C群马链球菌兽疫亚种引起的一种急性热性传染病,尤其对山羊和绵羊具有高致病性,多伴随全身性出血性败血症和纤维素性胸膜炎。C群马链球菌兽疫亚种为革兰氏阳性菌,形态为不规则圆形,菌体呈长链状排列,至多有170个单球相连,不形成芽孢,一般无鞭毛。部分菌株在病料中或含血清的培养基中能形成荚膜。羊败血性链球菌病常呈地方流行性或散发,在新发病区多呈流行性发生,而老疫区则往往呈散发性流行或地方性流行,且具有明显的季节性,多发生于冬春季节。缺草、寒冷、体弱、拥挤等易诱发此病,发病率达15%~24%,如不及时治疗,死亡率可达90%左右。临床上将羊败血性链球菌病分为最急性型、急性型、亚急性型和慢性型等。最急性型病羊的最初症状不明显,多于24 h内死亡。急性型和亚急性型临床症状相似,急性型病程2~3d,亚急性型症状相对较轻,病程1~2周,大部分病羊在发病初期体温升高,食欲不振或完全废绝,呼吸困难,有黏性鼻涕流出,粪便中带有黏液或血等,亚急性型病羊在发病后期还多表现卧地不起,全身寒战,伴随尖叫或磨牙等特征。慢性型病羊症状不稳定,体质消瘦,常伴有咳嗽和关节炎,病程可持续1个月。
1.1.1 药品
羊败血性链球菌病灭活疫苗和羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗购自西藏自治区兽医生物药品制造厂,羊败血性链球菌病活疫苗购自青海生物药品厂。注射用青霉素钠、注射用磺胺嘧啶钠购自合肥中龙神力动物药业有限公司。本研究所用培养基有本厂小培养组自制。
1.1.2 试验用动物
本试验所用家兔、小鼠、易感羊均由本厂实验动物组提供。
1.2.1 病原学检查
1.2.1.1 涂片镜检
取病料涂片、染色、镜检,见到呈单个、成对或短链有荚膜的革兰氏阳性链球菌。
1.2.1.2 细菌分离与鉴定
将适量病料分别接种至马丁氏肉汤、鲜血琼脂平板、葡萄糖胧氨酸鲜血琼脂斜面、石蕊牛奶、1%美兰牛奶、含50%胆汁的培养基、胧氨酸肉汤(pH9.6)、含6.5%氯化钠的胧氨酸肉汤、马尿酸钠培养基、纤维素固体培养基等培养基中,于37℃培养适当时间,观察其生长状况及现象。随后利用含叠氮化钠的培养基选择分离链球菌,并通过乙酰甲基甲醇(VP)试验、甲基红(MR)试验、发酵(葡萄糖、乳糖、麦芽糖、半乳糖、山梨醇、甘露醇、木糖、鼠李糖)试验等进一步鉴定分离得到的链球菌的生理生化特征。
1.2.1.3 动物回归试检
向家兔皮下注射或静脉注射1 mL链球菌菌液,向小鼠腹腔注射0.5 mL链球菌菌液,观察家兔和小鼠5d内的死亡情况。取死后家兔和小鼠的肝、腹水涂片镜检。
1.2.2 疫苗免疫和药物治疗试验
1.2.2.1 疫苗免疫试验
将40只易感羊随机分为4组,每组10只。第1组皮下注射羊败血性链球菌病灭活疫苗(5mL/只),第2组尾根皮下注射羊败血性链球菌病活疫苗(1头份/只),第3组皮下注射羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗(5mL/只),第4组为对照组(不做处理)。免疫21d后向每只羊静脉注射1 MLD的羊链球菌强毒菌液,连续观察21d。
1.2.2.2 药物治疗试验
将40只易感羊随机分为4组,每组10只。向每只羊静脉注射1 MLD羊链球菌强毒菌液。当易感羊出现羊败血性链球菌病临床症状时进行治疗。第1组每天肌肉注射2次注射用青霉素钠(160万U),第2组每天肌肉注射2次注射用磺胺嘧啶钠(10mL),第3组每天肌肉注射2次注射用青霉素钠(80万U)和注射用磺胺嘧啶钠(5mL),第4组为对照组(不做处理),连续观察至临床症状消失。
病料于马丁氏肉汤中培养24 h后,菌液混浊,管底有沉淀;在鲜血琼脂平板上形成R溶血,菌落细小无色,呈露珠状;葡萄糖胧氨酸鲜血琼脂斜面上的菌落呈半透明淡灰色,且湿润,闪光,极粘稠。我们进一步将通过叠氮化钠选择分离得到的链球菌做鉴定,得到以下结果:该链球菌可使石蕊牛奶变红但不凝固,不能使1%美兰牛奶褪色,在含50%胆汁的培养基中生长良好,耐受胆盐,在胧氨酸肉汤(pH9.6)和含6.5%氯化钠的胧氨酸肉汤中均不生长,不能水解马尿酸钠、纤维素和葡萄糖,可产生硫化氢,不还原硝酸盐,不液化明胶,不产生靛基质,能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、半乳糖、山梨醇、甘露醇、产酸不产气,不发酵木糖、鼠李糖等。
动物回归实验表明该链球菌具有强毒性。攻毒后,家兔多于24~48 h内死亡,小鼠多于第4d死亡。取肝、腹水涂片镜检,均可观察到3~5个相连的革兰氏阳性链球菌菌落。
2.2.1 病理诊断
羊发病后的特征性病理变化主要包括各个脏器泛发性出血,淋巴结肿大出血,鼻、咽喉和气管黏膜出血;肺水肿或气肿,出血,出现肝变区;胸腔、腹腔及心包腔出现大量积液;心冠沟及心内外包膜有小点状出血;肝肿大呈泥土色,边缘钝厚,包膜下有出血点;胆囊肿大2~4倍,胆汁外渗;肾脏质脆、变软,出血梗塞,包膜不易剥离;各个器官浆膜面附有粘稠的纤维素性渗出物。
2.2.2 疫苗免疫试验结果
免疫羊败血性链球菌病灭活疫苗和羊败血性链球菌病活疫苗两组均未出现免疫羊发病和死亡的情况,第3组免疫羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗的10只羊均发病出现链球菌病临床症状,观察至21d仅4只羊死亡,第4组未免疫任何疫苗,10只羊均发病出现链球菌病临床症状,观察至21d有7只羊死亡(表1)。我们推测第3组免疫效果较差是由于链球菌感染病程长导致羊抵抗力下降,从而引起猝疽、羔羊痢疾或肠毒血症等梭菌病发作,免疫梭菌病疫苗后有效控制了梭菌病引起的症状,第4组则是由于感染梭菌病引发了易感羊的大量死亡。
表1 羊败血性链球菌病疫苗免疫效果
2.2.3 药物治疗试验结果
从表2可知,对照组临床症状持续存在,最后全部死亡,在易感羊刚发生羊败血性链球菌病临床症状时,使用注射用青霉素钠(160万U)或注射磺胺嘧啶钠(10 mL)进行药物治疗可有效控制临床症状,当联合使用注射用青霉素钠(80万U)和注射用磺胺嘧啶钠(5 mL)进行治疗时,仍有2只羊出现临床症状,我们推测这是两种药物相互拮抗或产生副作用的结果。
表2 羊败血性链球菌病药物治疗效果
近几年,在西藏自治区羊链球菌病多发的拉萨、山南、日喀则三市进行疫苗免疫。结果表明羊败血性链球菌病活疫苗免疫效果与羊败血性链球菌病灭活疫苗相近,均优于羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗,且羊败血性链球菌病活疫苗无佐剂和甲醛引起的副作用。因此,建议优先采用羊败血性链球菌病活疫苗进行免疫。
在未进行疫苗免疫的地方,若发生羊败血性链球菌病,为避免羊只发病死亡,建议采用每天肌肉注射2次注射用磺胺嘧啶钠(10 mL)进行治疗,该治疗方法疗程较短,效果较好。
3.3.1加强饲养管理,提高羊群的抗病能力。在换季时,给羊群饲喂添加有维生素、矿物质及预防药物的饲料,并在春冬寒冷的季节,做好防寒保暖的工作。
3.3.2做好羊舍消毒工作,不混群放牧,减少病菌传染。常用的消毒药有2%来苏儿、0.5%漂白粉和2%石炭酸等,也可采用日光照射,以上消毒方式均可在2h内杀死羊链球菌。
3.3.3严格执行隔离检疫。在羊败血性链球菌病非流行地区购买养殖,且新购入的羊必须隔离20d后才能移入消毒后的羊圈。
3.3.4消灭体外寄生虫。羊虱蝇是羊的常见寄生虫,由于羊链球菌能存活在羊虱蝇体内,因此建议每年使用阿维菌素或伊维菌素两次以消灭羊的体外寄生虫。