超声、母体血清联合无创DNA对早中期染色体异常的诊断价值

孙宏跃，吕璇，陈雪红，卜雪瑞，王春燕

(郑州市妇幼保健院 生殖遗传科，河南 郑州 450000)

染色体为基因载体，属于细胞核的基本组成成分。染色体异常为严重先天性疾病，发生率较低，染色体异常的发生不仅使家庭和社会负担加重，还会对患儿生长发育产生严重影响[1-2]。因此，实施产前染色体异常筛查工作为降低染色体异常新生儿出生的重要手段。羊水细胞染色体核型检测为检查胎儿染色体情况的金标准，可有效发现染色体异常情况，但其为侵入性检查，可能导致孕妇流产，临床应用受限[3]。近年来，随着无创检查技术的发展，多种检查染色体异常的方式逐渐被应用于产前筛查中，但临床还需深入研究无创性产前诊断是否能取代羊水细胞染色体核型检测[4]。基于此，本研究探讨超声联合母体血清、无创DNA诊断早中期染色体异常的价值。

1 资料和方法

1.1 一般资料本研究经医院医学伦理委员会审核通过。选取2019年1月至2020年10月郑州市妇幼保健院收治的1 214例早中期筛查染色体异常高危孕妇作为研究对象。其中，孕妇年龄35～43岁，平均(38.05±2.05)岁，孕周11～27周，平均(19.52±3.39)周，孕前体质量指数22.5～29.1 kg·m-2，平均(26.02±1.43)kg·m-2。孕妇及家属签署知情同意书。

1.2 选取标准(1)纳入标准：①高危孕妇，即存在高孕前体质量指数(≥28 kg·m-2)、高龄(≥35岁)等；②单胎，孕周≥11周，行超声、母体血清、无创DNA检查；③同意行羊水细胞染色体核型检测。(2)排除标准：①精神异常、认知障碍；②合并重要器官功能障碍；③免疫系统疾病、凝血功能障碍；④依从性较差；⑤多胎；⑥孕期合并恶性肿瘤；⑦孕妇自身染色体异常；⑧接受胚胎移植。

1.3 检查方法

1.3.1超声 采用彩色多普勒超声诊断仪(GE Voluson E10)进行检查，设置探头频率为2～5 MHz，选用腹部凸阵探头或容积探头。嘱孕妇排空膀胱，取仰卧位，采集矢状切面、颅脑横切面、胸部横切面、腹部横切面、胎儿双侧上下肢切面的图像，对胎儿颅脑、心脏、颈部、四肢、面部、脐带、胸腔、腹腔等进行观察。所有操作均由医院高年资影像学医生进行操作。诊断标准：颈项部透明层厚度(nuchal translucency，NT)≥3 mm为阳性，NT<3 mm为阴性。

1.3.2母体血清 采集孕妇晨起空腹静脉血约4 mL，离心(转速3 000 r·min-1，半径8 cm，时间10 min)，分离血清。采用时间分辨免疫荧光法检测游离β人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin，β-HCG)水平，试剂盒购自广州市达瑞生物技术股份有限公司。再根据孕妇年龄、孕周、体质量、抽烟情况等采用专业软件得出染色体异常风险值，当切割值>1∶350时为高风险，即为阳性。

1.3.3无创DNA 采集孕妇晨起空腹静脉血约4 mL，离心(转速3 000 r·min-1，半径8 cm，时间10 min)，分离血清，提取游离DNA。采用大规模基因组测序法实施检测，采用高通量基因测序仪实施检查，严格按照仪器说明书进行。将测得基因序列与正常人类基因序列对比、分析。

1.3.4羊水细胞染色体核型检测 借助超声定位在严格无菌条件下实施羊膜腔穿刺抽取约20 mL羊水，离心(转速3 000 r·min-1，半径8 cm，时间10 min)，留取0.5 mL标本制成细胞悬液，再加培养基混匀，在温箱(37 ℃，体积分数为5%的CO2)中实施开放式培养。在培养数天后更换培养液，继续实施培养，查看羊水细胞情况，确保生长良好。再向培养瓶中加入秋水仙素，在分裂中期停止，进行低渗(37 ℃)、固定、制片、显带、染色处理，进行计数、核型分析。

1.4 观察指标(1)临床最终检查结果。(2)超声、母体血清、无创DNA及三者联合检查的诊断结果。三者联合诊断评估标准：任意单一检查为阳性即为阳性。(3)分析超声、母体血清、无创DNA及三者联合检查的诊断价值，包括灵敏度、准确度、特异度、漏诊率、误诊率、阳性预测值、阴性预测值。

1.5 统计学方法采用SPSS 22.0统计软件处理数据。计数资料以频数和率(%)表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床最终检查结果1 214例早中期筛查染色体异常高危孕妇经临床证实98例阳性，1 116例阴性。其中，41例21-三体综合征，32例18-三体综合征，22例13-三体综合征，3例Turner综合征。

2.2 超声、母体血清、无创DNA及三者联合检查的诊断结果1 214例早中期筛查染色体异常高危孕妇经超声检查检出98例阳性，1 116例阴性；经母体血清检查检出95例阳性，1 119例阴性；经无创DNA检查检出97例阳性，1 117例阴性；经三者联合检查检出122例阳性，1 092例阴性。见表1。

表1 超声、母体血清、无创DNA及三者联合检查的诊断结果

2.3 超声、母体血清、无创DNA及三者联合检查的诊断价值超声、母体血清联合无创DNA检查诊断早中期染色体异常的灵敏度、阴性预测值高于任意单一检查，漏诊率低于任意单一检查(P<0.05)。超声、母体血清联合无创DNA检查对早中期染色体异常的准确度、特异度、阳性预测值、误诊率与任意单一检查比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 超声、母体血清、无创DNA及三者联合检查的诊断价值(%)

3 讨论

及时发现胎儿染色体异常情况并及时进行针对性处理，不仅可减轻家庭、社会经济负担，还可最大程度地降低对孕妇的身心伤害。传统的产前筛查常用方式为获取羊水、脐血、胎儿绒毛或组织进行检查诊断，以上检查方式均为侵入式操作，对胎儿及孕妇可能造成一定影响，难以被接受，临床应用受限[5]。因此，无创产前诊断为临床研究重点。

母体血清学检查为临床针对产前胎儿染色体异常的常用诊断方式，具有无创、快速、安全、便宜等优势，有助于临床早期筛查，通过检测相关血清水平可筛选出高危孕妇人群，进而实施进一步检查，但在早中期检出率较低，易发生漏诊、误诊情况，不利于早期筛查工作[6]。随着超声检查技术的发展，超声被逐渐应用于胎儿染色体异常的筛查诊断中，其操作方便、安全、无创、可重复性强等，被临床医生及孕妇广泛接受。有研究指出，NT增厚与胎儿染色体异常密切相关[7]。因此，通过检测胎儿NT水平可对染色体异常情况进行分析，但也存在一定的漏诊、误诊情况，难以满足临床需求，故仍然需要寻找一种更为有效的检查方式提高诊断准确度。无创DNA检查为临床新型检查技术，属于无创检查，可降低对胎儿、孕妇的损伤程度，逐渐被用来筛查胎儿染色体异常，但易受孕妇自身染色体异常、异体输血等影响，会出现一定的误诊情况[8]。基于上述分析，不论哪种检查方式均可发生漏诊、误诊情况，难以满足临床需要。因此，本研究将3种检查方式联合应用于染色体异常的诊断中以提高诊断价值。在本研究中，1 214例早中期筛查染色体异常高危孕妇经临床证实98例阳性，1 116例阴性，采用超声、母体血清联合无创DNA检查诊断早中期染色体异常的灵敏度、阴性预测值高于任意单一检查，漏诊率低于任意单一检查。这表明将超声、母体血清联合无创DNA检查应用于早中期染色体异常的诊断中可提高诊断灵敏度、阴性预测值，降低漏诊率，可为临床制定针对性措施提供依据。

综上所述，超声、母体血清联合无创DNA检查有助于提高诊断早中期染色体异常的灵敏度、阴性预测值，降低漏诊率。