小儿颅内胶质瘤组织中B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)蛋白和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测的临床价值及意义

吕 强 李 涛 裴 航 齐 林

胶质瘤是大脑和脊髓胶质细胞发生癌变而产生的原发性颅脑内的恶性肿瘤，其发病率约占中枢神经系统肿瘤的40%以上[1]。早发现早诊断早治疗是提高该肿瘤患者生存率的唯一途径[2]。颅内胶质瘤也是小儿时期常见肿瘤，其发病率在儿童群体中仅次于白血病[3]。该肿瘤早期诊断和预后评估的生物靶标仍是其相关研究的热点内容[4-5]。本研究主要分析B淋巴细胞瘤-2基因(B cell lymphoma 2 protein,BCL-2)蛋白和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)在不同临床特征胶质瘤患儿病理组织中的表达及与其预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2015年1月至2020年1月于郑州大学附属儿童医院行手术切除的96例颅内胶质瘤患儿病理组织标本作为研究对象，切除后均置于-80 ℃冰箱保存。所有患者中，男性54例，女性42例，年龄2～14岁，平均(9.06±3.12)岁。组织学分类：星形胶质瘤44例，室管膜瘤32例，胶质母细胞瘤20例；WHO病理分级：Ⅰ级34例，Ⅱ级24例，Ⅲ级20例，Ⅳ级18例。所有患儿术前均未接受过放、化疗以及免疫治疗；家属均知情同意本研究内容并签署同意书。本研究获得郑州大学附属儿童医院伦理学委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 检测指标 取保存的胶质瘤组织，根据石蜡切片制作流程进行包埋、切片(切片厚度4 μm)、脱蜡和复水，采用鼠抗人BCL-2单克隆抗体(货号：ab77566)和鼠抗人GFAP单克隆抗体(货号：13-0300)及免疫组织化学染色试剂盒(货号：ab64211)均购自英国abcam公司，用于检测胶质瘤患儿病理组织中BCL-2和GFAP的表达，并严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2.2 阳性结果判定 采用双盲法，由郑州大学附属儿童医院病理科两位医师对免疫组化阳性结果进行判定。然后参考张贺军等[6]研究中的染色强度(Dyeing intensity)标准进行评分：细胞胞质内出现棕黄色颗粒样染色定为阳性，0分：无色、1分：浅黄色、2分：黄色、3分：棕褐色；根据阳性细胞百分率(percentage of positive cells)进行评分：0分：<25%、1分：25%～50%；2分：50%～75%；3分：>75%。组织化学评分(H-SCORE)=D×P，得分范围：0～9分；≤1为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～6分为阳性(++)，>6分为强阳性(+++)。

1.2.3 术后随访 所有患者术后出院后均进行随访，记录各个患儿预后及生存情况，并据其分为预后良好(A组)和预后差(B组)两组，比较患儿胶质瘤组织中BCL-2和GFAP蛋白的阳性表达率差异。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 不同临床特征胶质瘤患儿BCL-2阳性表达比较

结果显示：不同性别胶质瘤患儿BCL-2表达阳性率和H-SCORE得分均无显著差异(P>0.05)；不同组织学分类胶质瘤患儿BCL-2表达阳性率无显著差异，但星形胶质瘤和胶质母细胞瘤患儿H-SCORE得分显著高于室管膜瘤患儿(P<0.05)，而该两组相比差异无统计学意义(P>0.05)；不同WHO病理分级胶质瘤患儿BCL-2阳性表达率和H-SCORE得分均存在显著差异，即Ⅲ～Ⅳ级BCL-2阳性表达率和H-SCORE得分均显著高于Ⅰ～Ⅱ级(P<0.05)，见表1。

表1 不同临床特征胶质瘤患儿BCL-2阳性表达比较(例，%)

2.2 不同临床特征胶质瘤患儿GFAP阳性表达比较

结果显示：不同性别胶质瘤患儿GFAP表达阳性率和H-SCORE得分均无显著差异(P>0.05)；不同组织学分类胶质瘤患儿GFAP表达阳性率无显著差异，但H-SCORE得分则为：胶质母细胞瘤>星形胶质瘤>室管膜瘤患儿，且组间两两比较差异具有统计学意义(P<0.05)；不同WHO病理分级胶质瘤患儿GFAP阳性表达率和H-SCORE得分均存在显著差异，即Ⅲ～Ⅳ级GFAP阳性表达率和H-SCORE得分均显著高于Ⅰ～Ⅱ级(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床特征胶质瘤患儿GFAP阳性表达比较(例，%)

2.3 不同预后患者BCL-2和GFAP的表达

与A组相比，B组BCL-2和GFAP的表达阳性率及H-SCORE得分均显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同预后患者BCL-2和GFAP的表达情况

3 讨论

胶质瘤是神经系统恶性肿瘤之一，占比约30%，具有生长速度块、治愈率低一级预后差等特点，且患者术后除了容易复发还易出现颅内压增高、癫痫以及呕吐等不良反应，对患者日常生活及生命健康造成严重不良影响[7-9]。因此目前脑胶质瘤术后复发的分子标志物表达差异是其早期诊断及预后评估的研究重点内容。

胶质瘤的发生、进展与癌基因的激活、抑癌基因失活以及凋亡基因异常表达密切相关，BCL-2属于细胞凋亡调控蛋白，在多种癌症中均有表达，其可通过抑制引起细胞凋亡的相关因子从而发挥生物学功能，研究显示：该蛋白高表达可促进癌细胞对化疗药物的耐药性从而抵抗肿瘤的凋亡，且其高表达也是肿瘤细胞增殖及发展的关键因素[10-11]。本研究结果显示：不同性别胶质瘤患儿BCL-2表达阳性率和H-SCORE得分均无显著差异(P>0.05)；不同组织学分类胶质瘤患儿BCL-2表达阳性率无显著差异，但星形胶质瘤和胶质母细胞瘤患儿H-SCORE得分显著高于室管膜瘤患儿(P<0.05)，两组相比差异无统计学意义(P>0.05)；不同WHO病理分级胶质瘤患儿BCL-2阳性表达率和H-SCORE得分均存在显著差异，即Ⅲ～Ⅳ级BCL-2阳性表达率和H-SCORE得分均显著高于Ⅰ～Ⅱ级(P<0.05)。表明BCL-2蛋白的表达与患儿不同组织学分类有关，其原因可能在于星形胶质瘤和胶质母细胞瘤的较室管膜瘤恶性程度高[12]；另外该蛋白与患儿和病理分级也密切相关，说明其参与胶质瘤的发生和进展。除此以外，本研究结果显示：与A组相比，B组BCL-2的表达阳性率及H-SCORE得分均显著增加(P<0.05)，表明：BCL-2的表达与胶质瘤患儿预后情况有关，可能对患儿预后具有一定预测价值。

GFAP是1种星形胶质细胞标志蛋白，通常其表达量虽中枢神经系统损伤程度增加而增加，且在胶质瘤组织中表达量也显著增加[13]。研究显示：GFAP可作为脑胶质瘤与脑转移瘤鉴别诊断的检测指标，尤其是组织学诊断较为困难的患者[14]。而在本研究中，不同组织学分类胶质瘤患儿GFAP表达阳性率无显著差异，但H-SCORE得分则为：胶质母细胞瘤>星形胶质瘤>室管膜瘤患儿，且组间两两比较差异具有统计学意义(P<0.05)；不同WHO病理分级胶质瘤患儿GFAP阳性表达率和H-SCORE得分均存在显著差异，即Ⅲ～Ⅳ级GFAP阳性表达率和H-SCORE得分均显著高于Ⅰ～Ⅱ级(P<0.05)，说明GFAP蛋白与胶质瘤患儿组织学分类和WHO病理分级均密切相关，其在胶质瘤的分化和进展过程中具有重要调控作用，与相关研究结论类似[15]。另外本研究存在不足之处——该两个蛋白的表达对胶质瘤的影响之间是否具有互相调控作用，本研究为针对该问题进行深入分析，后续将展开进一步讨论。

综上所述，BCL-2和GFAP的表达与胶质瘤患儿组织学分类、病理分级以及预后情况均密切相关，在胶质瘤的发生、分化以及进展的调控方面具有重要作用。