Reptin、Has2在肺腺癌组织中表达及临床意义

高永政，林渝凯，刘先档，谢昊，吕威廷，李远兆，郑锦花通信作者)

(桂林医学院附属医院病理科，广西 桂林 541000)

0 引言

2015年国家癌症中心的数据显示中国的肺癌发生率、死亡率均居于首位，而肺腺癌作为非小细胞肺癌的主要病理类型之一，在中国女性肺癌中比例达到50%[1]。确诊时已是TNM分期的Ⅲ期和Ⅳ期，伴随淋巴结转移、血道转移等临床病理特征，五年生存率低。肺腺癌的发生机制主要与致癌基因的激活与抑癌基因失活或被抑制相关，发展机制主要通过各类信号通路实现，相关临床药物治疗靶点目前较为明确的是EGFR突变、ALK重排等[2]，因而目前肺腺癌的发生发展机制尚不明确，需要探索和发现更多有效的肺腺癌诊断标志物和药物治疗靶点用于干预和阻断癌症的发生发展过程。

本文选择的两个分子为Reptin、Has2，Reptin (TIP49B /RUVBL2)是AAA+ ATPases家族成员之一，其基因RUVBL2位于人染色体的19q13.33，具有ATP酶和DNA解旋酶活性，且RUVBL2与RUVBL1(Pontin)结合[3]，作为调控基因表达的上游调节因子发挥作用。而Has (Hyaluronan Synthase)家族包含Has1、Has2、Has3，在成人中主要表达Has2[4]，且HAS2基因位于人染色体8q24.13[5]，通过参与透明质酸的合成对细胞的生物学行为产生影响。本实验采用免疫组织化学染色的方法检测肺腺癌组织及癌旁组织中两种蛋白的表达情况，分析其表达的临床意义。

1 材料与方法

1.1 病例选择

经桂林医学院附属医院病理科确诊的2009年4月至2016年12月临床资料完备的肺腺癌117例。

1.2 病例收集

通过收集病人病历和随访获取相关数据，随访采用电话采访和信访两种方式。收集的信息包括：姓名、性别、年龄等基本情况，肿瘤临床分期、病理分级以及生存状况和生存时间等特征。根据TNM分期(2017)的临床评价进行分期；病理分级分为Ⅰ级(高分化腺癌)、Ⅱ级(中分化腺癌)、Ⅲ级(低分化腺癌)；病人跟踪随访截止时间为2016年12月30 日，获得的病人结局有两种：死亡和存活。以上经桂林医学院伦理委员会审核通过。

1.3 方法与结果判定

1.3.1 免疫组织化学染色法

抗体：兔抗人Reptin抗体、兔抗人Has2抗体。(BIOSS公司)

试剂盒：二步法免疫组化检测系统 (2-step plus Poly-HRP Anti-Mouse/Rabbit Ig G Detection System, PV-9000) 和DAB检测试剂盒(北京中杉金桥公司)。

1.3.2 结果判定方法

(1)阳性结果：Reptin阳性信号为黄色或者棕黄色颗粒，定位于细胞核和细胞浆，Has2阳性信号呈棕黄色或棕褐色颗粒状，定位于细胞膜和细胞间质。

(2)高倍镜下(x400)对每张切片随机选择5个视野，计数200个细胞/视野。结果评判标准为：弱阳性(+)：阳性瘤细胞占5%-10%，阳性(++)：阳性瘤细胞占10%-50%，强阳性(+++)：阳性瘤细胞占>50%，阴性(-)：阳性瘤细胞占0%-5%。

1.3.3 统计学分析方法

采用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用(±s)表示，比较采用t检验；计数资料以率(%)表示，比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化结果

见图1、2。

图1 Reptin在癌旁肺组织和肺腺癌组织中的表达(免疫组织化学染色)

图2 Has2在癌旁肺组织和肺腺癌组织中的表达(免疫组织化学染色)

2.2 统计学分析

Reptin、Has2的表达情况及与117例肺腺癌病例临床病理特征的关系，见表1、2、3。

表1 Reptin、Has2在肺腺癌组织与癌旁肺组织中的表达情况(例)

表2 Reptin的表达与Has2表达的相关性(例)

表3 Reptin、Has2蛋白表达与肺腺癌临床病理特征的关系(例)

3 讨论

Reptin (RUVBL2)在转录过程中作为NuA4组蛋白乙酰转移酶复合物的组分，通过核小体组蛋白H4和H2A的乙酰化参与基因的转录，参与癌基因和原癌基因相关激活诱导、肿瘤抑制基因相关生长周期控制、细胞凋亡以及DNA修复相关的转录程序[6]。Wood等发现RUVBL1(Pontin)和RUVBL2在体内可与MYC复合，结合依赖于对致癌活性必需的MYC结构域，通过LEF1 / TCF1-CTNNB1复合物调节转录激活，在MYC的致癌转化中发挥重要作用[7]。另外Venteicher等的发现Reptin是构成HeLa端粒酶复合物的一种组分[8]。因此，Reptin通过ATP依赖性方式催化双链DNA向单链DNA的解旋和作为多种表观遗传修饰复合物的组分，在复制、修复和转录过程中发挥广泛作用。

此外，Joaquim和Jörg等人的研究表明Reptin还可通过mTOR 和 TGF-β信号通路影响细胞生物学行为[9,10]，且在肝细胞肝癌、肾细胞癌以及胃癌、腮腺癌中扮演重要角色[11-14]，Reptin已在肝细胞肝癌中作为治疗靶点[15]。

而Has2作为一种透明质酸合成酶参与透明质酸的合成过程，透明质酸是大多数细胞外基质的主要成分，其在组织结构中具有结构作用并对细胞粘附，迁移和分化调节是必需的。Michael等用IL1B或TGF-β-1处理人肾近端小管上皮细胞(PTC)后，HAS2和HAS2AS1的表达均上调。敲减和过表达研究显示IL1B通过SP1/ SP3起作用，并且TGF-β-1通过SMAD2/ SMAD3起作用[16]。Young-Heon和Zhao等人的研究也发现Has2与TGF-β、PI3K/AKT等信号通路相关[17,18]。且Has2与乳腺癌、膀胱癌、口腔鳞状细胞癌等的侵袭与转移密切相关[19-21]，并已作为膀胱癌的诊断标志物应用于临床[20]

我们的实验通过对Reptin、Has2在肺腺癌中表达位置及临床病理特征进行统计学分析发现，两者表达存在相关性且与肺腺癌的分化程度相关。我们推测Reptin可通过激活癌基因、TGF-β信号通路等方式直接或间接影响Has2基因的表达，进而影响肺腺癌的发生发展，并可作为肺腺癌诊断的生物标志物及相关临床病理特征评估应用。