采用不同的血清学检测法对羊布病检测的对比

刘金录，李生福，钟卫东，赵婧

(青海省民和县畜牧兽医站，民和 810800)

布鲁氏杆菌病是由布鲁氏杆菌引起的人、畜共患传染病，牛、羊、猪均可发病。临床表现为生殖器官和胎膜发炎，引起母畜流产，公畜睾丸炎、不育等。母畜流产后将大量布鲁氏菌病随着胎儿、胎水和胎衣排出，可通过污染的饲料、饮水经消化道等途径传播。人主要通过与患病动物、污染的动物产品接触而感染，感染后主要表现长期低热、寒战、盗汗、全身不适、关节炎、神经痛、睾丸炎等，严重威胁畜牧业生产和人体健康，因此，国家将其列为法定传染病，对种畜实施布病检测，扑杀阳性畜[1]。近几年来，部分地区牛羊布鲁氏杆菌病呈高发、流行态势，通过调运引起布病流行并传染于养殖者，民和县养殖者发病数例，引起业务主管部门的高度重视，投入大批的人力、物力、财力于2020年11月对民和县12个乡镇的养殖场(大户)饲养的6964只羊进行了布病检测，对检出的阳性羊进行了扑杀[2,3]。为了快速、准确地检测布病，笔者对养殖者感染布病的养殖场(大户)的羊群采用三种不同的血清学检测法进行了对比检测，筛选出适合县级实验室对布病检测的最佳方法。现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1羊 被检6964只羊为川口镇、总堡乡等12个乡(镇)的养殖场(大户)所饲养的小尾寒羊及其杂种羊、其他羊。

1.1.2血清 采集羊颈静脉血，分离血清，2℃～8℃保存，待检。

1.1.3诊断试剂 布病虎红平板凝集抗原(批号20200915)、布病试管凝集抗原(批号20191030)、布病试管凝集试验阴、阳性血清(批号20191030)由中国兽医药品监察所生产；布鲁氏杆菌竞争ELISA抗体检测试剂盒(批号EB022006)由广州悦洋生物技术有限公司生产。

2 方法

2.1布鲁氏杆菌病按GB/T18464-2018执行[4]采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验、竞争ELISA试验分别对同一样品进行检测。

2.1.1虎红平板凝集试验 取30μL的被检血清与30μL的虎红平板凝集抗原在一次性凹槽式布病检测凝集板上混用，在5min内出现凝集者，判为阳性。

2.1.2试管凝集试验 被检血清按1∶25、1∶ 50、1∶100、1∶200稀释，加布病凝集抗原0.5mL，混用，置37℃温箱反应24h,被检血清1∶25出现“++”者判为可疑，1∶50及以上者出现“++”判为阳性。

2.1.3布鲁氏杆菌竞争ELISA抗体检测试验 按布鲁氏杆菌竞争ELISA抗体检测试剂盒说明书执行。

2.1.3.1样品处理 将待检血清、标准阳性血清和标准阴性血清均稀释20倍，将单克隆抗体稀释50倍。

2.1.3.2操作步骤 将稀释好的待检血清、标准阳性血清和标准阴性血清分别加入到抗原包被板中，每孔50μL，每孔再加单克隆抗体50μL,37℃孵育30min；洗板3次，拍干；每孔加入稀释好的羊抗鼠酶标抗体100μL，37℃孵育30min；洗板3次，拍干；每孔加入底物A和底物B按1∶1混合的底物100μL,室温避光静置显色15min；每孔加入50μL终止液50μL,反应终止后，15min内用酶标仪测定OD450nm。

2.1.3.3结果判定 计算抑制率，抑制率(PI)=(阴性对照OD450nm-待测样品OD450nm)/阴性对照OD450nmX100%，当样品的PI≥30%时，为布鲁氏杆菌病抗体阳性，当样品的PI<30%时，为布鲁氏杆菌病抗体阴性。

3 结果

3.1被检血清中布氏杆菌特异性抗体检测结果见下表。

表 被检血清中布氏杆菌特异性抗体检测结果

3.2检测羊血清218份，检出布病阳性17份，阳性率为7.8%，这些羊群中都存在引进种羊。

3.33种不同的血清学检测方法检测的结果符合率为100%。

4 分析与建议

4.13种不同的血清学检测方法检测的结果符合率为100%。布病虎红平板凝集试验快速、准确，可做大批量检测；布病试管凝集试验准确，检测数量不受限制，但检测时间长；布鲁氏杆菌竞争ELISA抗体检测准确，但价格贵，且适宜一次做92份样品，单个或数份样品会造成试剂浪费。因此，在人力财力匮乏的县级实验室大批量检测时应选择布病虎红平板凝集试验初检，再用布病试管凝集试验确诊为最佳。

4.2这3种血清学检测方法均为检测布鲁氏杆菌病抗体，只能表明血清学检测阳性，无法分清免疫抗体还是感染抗体，对于无免疫羊群可按感染抗体处理，对于免疫羊群必须进行病原学诊断，因此，对于免疫羊群要加施免疫标识，以免误诊。

4.3 本次检测出较多的布病阳性羊只并且较集中，经调查是引进的种羊无法提供免疫、检疫证明，属于违法引进。建议养殖场(户)要依法检疫，引进种羊时必须对布病实施检测，否则不得引进。

4.4由于本次大批量检测是人感染布病后由卫生部门反馈信息而知，故对养羊户的羊群进行检测进而检出布病阳性羊，因此提示兽医部门要把好检疫关，对引进种羊及时检测，淘汰阳性羊，平时做好布病检测，由被动检测转为主动检测，及时淘汰阳性羊。执法部门要加大执法力度，对违规调运者进行严格处罚。

4.5加大宣传力度，使养殖者清楚掌握布病防控知识，布病是人畜共患病，应做好个人防护，发现流产胎儿须进行无害化处理，对污染的环境进行严格消毒。